Articolo metodologico

Un metodo per la valutazione Insetticida efficacia contro Bed Bug, Cimex lectularius, Uova e First stadi

DOI:

10.3791/55092

⸱

15 marzo 2017

 , 
1Department of Entomology and Nematology, University of Florida, 2Department of Entomology, Virginia Tech

In questo articolo

Sommario

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valutazioni Insetticida sono spesso presi di mira contro gli insetti adulti, piuttosto che stadi immaturi. Qui, vi presentiamo un protocollo per la valutazione insetticidi contro le uova di bug letto con un confronto con il primo stadio bug letto ninfale. Questi protocolli possono essere regolati per altri insetti per valutare l'efficacia insetticida in fasi della vita non adulti.

Abstract

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valutazioni di tossicità standard di insetticidi contro insetti nocivi sono condotte principalmente di insetti adulti. Le valutazioni sono basate su una dose-risposta o curva concentrazione-risposta, se la mortalità aumenta all'aumentare della dose o concentrazione di un insetticida è aumentato. Concentrazione standard letale (LC 50) e dose letale (LD 50) prove che si traducono nel 50% di mortalità di una popolazione di prova può essere difficile per valutare la tossicità degli insetticidi contro i non-adulti fasi di vita degli insetti, come le uova e instar presto o fasi nymphal . Tuttavia, queste informazioni sono essenziali per la comprensione di efficacia insetticida in tutte le fasi della vita di cimici, che colpisce gli sforzi di controllo e di trattamento. Questo protocollo utilizza un saggio biologico immersione standard modificato per le uova di cimici e un test di insetticida di contatto per il trattamento di nymphal primi stadi. Questi test producono una curva di concentrazione-risposta per quantificare ulteriormente LC 50 valori per le valutazioni insetticida.

Introduzione

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Le cimici dei letti sono un parassita urbano significativo che può causare la perdita di sangue, irritazioni della pelle, insonnia, depressione e ansia nei loro ospiti umani 1, 2, 3, 4, 5, 6. I costi di smaltimento e controllare le cimici dei letti sono alti e spesso richiedono più visite a casa da una società di controllo dei parassiti 7. visite multiple sono di solito necessari a causa del comportamento criptico di cimici e le difficoltà connesse con la loro uccisione. In particolare, le uova di cimici sono difficili da controllare a causa della loro piccola dimensione e la protezione dell'embrione dal guscio.

Attualmente, una pratica comune per molte aziende di controllo dei parassiti in tutti gli Stati Uniti è quello di trattare una casa per le cimici dei letti utilizzando un insetticida chimico. È risaputoche le uova sono difficili da controllare, così molte aziende hanno implementato un lasso di tempo di due settimane per ri-trattamenti 8. Questo permette di uova di cimici abbastanza tempo per covare, in modo che il primo stadio emergerà e presumibilmente più facile per uccidere con insetticidi. Tuttavia, vi è una carenza di studi che valutano l'efficacia degli insetticidi liquido contro le uova di bug letto e primi stadi.

uova di insetti sono stati documentati per essere il più difficile fase della vita da controllare in insetti infestanti urbani, diverso da cimici dei letti, oltre a molti parassiti agricoli. La maggior parte di queste difficoltà sono state attribuite al guscio d'uovo, mentre pochi studi hanno riportato resistenza agli insetticidi. Resistenza allo stadio di uovo è stato documentato in Triatoma infestans 9, Pediculus humanus capitis 10, Plutella xylostella 11, Rhyzopertha dominica 12, Cimex lectularius 13, e più coleotteri di prodotti conservati (cioè Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus e Rhyzopertha dominica). 14 Lo sviluppo della resistenza nella fase di uovo e stadi immaturi, così come le complicazioni associate con la penetrazione insetticida attraverso il guscio d'uovo, richiede la necessità di test biologici insetticida efficacia contro queste fasi della vita.

Questo protocollo prevede una procedura passo-passo per determinare l'efficacia di insetticidi nell'uovo e primo stadio fase di cimici comuni, Cimex lectularius. Entrambi questi protocolli sono saggi concentrazione-risposta per consentire la quantificazione di LC 50 valori. saggi di concentrazione-risposta sono comunemente usati per studi tossicologici, ma questo protocollo è stato adattato per il trattamento facilmente gruppi di uova di bug letto e primi stadi. Questi saggi possono essere adattatiper le uova diverse specie di insetti 'e le fasi della vita immaturi.

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Protocollo

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NOTA: Questo protocollo include due saggi insetticidi per il trattamento a parte le uova di cimici e primi stadi. Entrambi i protocolli sono stati condotti utilizzando gli stessi insetticidi, tuttavia, i protocolli dovevano essere adattati per garantire l'esposizione insetticida e di manipolare agevolmente i campioni.

1. Uovo immersione Insetticida Assay

  1. Tirare accoppiati, ben nutriti adulti cimici femminili da una colonia e posizionare le femmine (5-10) in una capsula di Petri con carta da filtro. Avere almeno dieci replicati per garantire che ci siano abbastanza uova per il dosaggio insetticidi. Verificare se le femmine hanno deposto le uova ogni giorno.
    1. Una volta che depongono le uova, prendere le femmine fuori della scatola di Petri (6 centimetri × 5 cm) e metterli in nuove piastre di Petri con una nuova carta da filtro quotidiano e registrare la data sulle vecchie e nuove piastre di Petri.
    2. Lasciare le uova a 4 anni a 5 giorni prima di iniziare il test. La suscettibilità agli insetticidi modifiche durante lo sviluppo embrionale, so è importante per il controllo per l'età delle uova. Tenere tutte le fasi della vita a 12:12 L: D fotoperiodo, il 60% di umidità relativa, e 27 ° C.
  2. Una volta che le uova sono invecchiati in modo appropriato, togliere le uova di cimici delicatamente dalla carta da filtro con pinze a punta morbida. raschiare delicatamente la parte inferiore dell'uovo attaccato alla carta da filtro con le pinze e poi afferrare con delicatezza senza applicare molta pressione sull'uovo di limitare lanciando uova di bug letto.
  3. Mettere le uova di cimici rimossi nei loro rispettivi gruppi all'interno di piatti di plastica Petri. Limitare l'elettricità statica lanciando uova cimici strofinando il fondo di ogni piatto Petri sulla parte esterna con un foglio di ammorbidente. gruppi Trattare di uova di cimici (5-10 uova per gruppo) tutti in una volta. Prendere in considerazione un gruppo di replica e utilizzare almeno cinque (o più) replica per questo test.
  4. Preparare diluizioni seriali di insetticidi per ottenere una gamma di 5 diverse concentrazioni (0,21-21 microlitri / ml per imidacloprid (0,1%) / β-ciflutrin (0,5%) e un controllosoluzione con il solvente (acqua di rubinetto) solo. Rendere 20 mL di ciascuna concentrazione di avere un volume sufficiente per il dosaggio immersione.
  5. provette Cut centrifuga (50 mL) alla linea 35 mL medialmente con un utensile rotante con un accessorio disco di taglio e quindi tagliare un foro nel tappo della provetta (diametro = 2.54 cm) usando lo stesso utensile rotante con alluminio ossido di rettifica accessorio di pietra. Lasciare 5 cm sul bordo della calotta durante il taglio, in modo che il tappo si avvitare saldamente nel tubo (Figura 1).
  6. Tagliare a maglia fine in quadrati grande abbastanza da contenere nel tappo (~ 5 centimetri 2). Avvitare la maglia stretta, eliminando eventuali urti, nelle provette da centrifuga che utilizzano il tappo provetta.
  7. Posizionare un gruppo di uova di bug letto (una replica) utilizzando un pennello sulla maglia all'interno della provetta. Immergere il gruppo di cimici all'interno della provetta taglio in una concentrazione di insetticida per 5 secondi.
  8. Rimuovere la provetta da centrifuga di thsoluzione insetticida e. Essiccare la rete con le uova all'interno ponendo la provetta direttamente su un tessuto di laboratorio.
  9. Rimuovere il gruppo di uova fuori della provetta con un piccolo, fine-setole del pennello e metterli in un ambiente pulito capsula di Petri con una carta da filtro pulito.
  10. uovo mortalità Record (mancata schiusa) per 14 giorni al fine di garantire tutte le uova hanno avuto il tempo sufficiente per covare.
  11. Corretta per la mortalità nel trattamento di controllo usando la formula di Abbott (test di mortalità% - controllo% di mortalità / 100 - la mortalità di controllo x 100).
  12. Inserire la mortalità registrato con le corrispondenti concentrazioni nel software di analisi 15 per calcolare LC 50 valori.

2. Prima Instar Insetticida Assay

  1. Separare un gruppo di cimici ben nutriti (5 maschi adulti e 5 femmine adulte), preferibilmente alimentato 1 giorno prima, e metterli in una capsula di Petri (6 centimetri × 5 cm) con carta da filtro previsto mating e la deposizione delle uova. Lasciare le cimici adulti per accoppiarsi e deporre le uova per circa 7-9 giorni. Per l'alimentazione, utilizzare un sistema di alimentazione artificiale che circola acqua calda in tubi di vetro di sangue 16 circostanti. Per questo studio, usare sangue di coniglio defibronated.
  2. Rimuovere le adulti dalle piastre di Petri (6 cm x 5 cm) e permetta che le uova si schiudono in primi stadi all'interno delle piastre di Petri. Ci vogliono circa 7-9 giorni per le uova di cimici alla schiusa a temperatura ambiente.
  3. Raccogliere i digiuni primi stadi della stessa età con un pennello. Età può essere determinata rimuovendo i primi stadi quotidianamente e registrando il giorno sono nati. Metterli in nuove, pulite piastre di Petri fino al test insetticidi. Primi ninfe instar non sono molto resistenti essiccante, quindi il saggio insetticida dovrebbe essere completata al più presto possibile.
  4. Per il saggio, preparare diluizioni seriali di imidacloprid / β-ciflutrin per ottenere una gamma di 5 diverse concentrazioni e una solu controllozione con solo solvente. prodotti formulati etichettati per il controllo di cimici dei letti negli Stati Uniti sono stati utilizzati per questi studi, quindi il solvente era acqua (secondo l'etichetta).
  5. Pipetta 150 microlitri aliquote di ogni concentrazione insetticida ed acqua per il gruppo di controllo sulle singole carte da filtro (# 1, 4,2 centimetri di diametro). Distribuire l'insetticida sull'intera carta da filtro con il pipettatore applicando goccioline lungo l'intero bordo e il centro della carta da filtro.
  6. Mettere le carte da filtro trattate individualmente sulla parte superiore dei pannelli di truciolato individuali (7 cm 2).
  7. gruppi uscita del primo stadi (da 5 a 10 per gruppo) sul singole carte da filtro mentre ancora bagnato con insetticida e coprire i primi stadi con un fondo rovesciata di una capsula di Petri.
  8. Collocare un peso sopra della scatola di Petri per evitare i primi cimici instar fuoriuscita superficie trattata.
  9. Record di mortalità dei primi cimici instar dopo 24 ore di esposizione a tuttile concentrazioni di insetticida.
  10. Corretta per la mortalità nel trattamento di controllo usando la formula di Abbott (test di mortalità% - controllo% di mortalità / 100 - la mortalità di controllo x 100).
  11. Inserire la mortalità e le concentrazioni registrate nel software di analisi 15 per calcolare LC 50 valori.

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Risultati

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Le uova sono stati immersi in 5 diverse concentrazioni di imidacloprid / β-ciflutrin (ul / mL). I primi stadi sono stati collocati su superfici trattate di cinque diverse concentrazioni di imidacloprid / β-ciflutrin (Figura 2).

Abbiamo usato tre diverse popolazioni di C. lectularius: Harlan, Richmond, ed Epic Centro (Tabella 1). Il ceppo Harlan è suscettibile di insettici...

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Discussione

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Un passaggio critico di questo test consiste nell'assicurarsi che nessun ovulo rimosso da una superficie venga danneggiato prima del test. Molti insetti cementano le loro uova su un substrato, quindi potrebbe essere necessario un test preliminare per garantire che la rimozione non causi la mortalità. Questo test può essere condotto con diverse repliche di un gruppo trattato (cimici dei letti rimosse dalla carta da filtro) rispetto a un gruppo di controllo (cimici dei letti non rimosse). Simili bassi tassi di mortalità (...

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Ringraziamo Molly saldi per la diluizione e pesticidi assistenza formulazione. Ringraziamo anche Troy Anderson per la guida analisi probit e Zachary Adelman per l'assistenza con disegno sperimentale. Questa ricerca è stata in parte sostenuta da un premio entomologica Foundation e dai fondi borse di studio Virginia Pest Management.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Piastre di PetriFisher Scientific Inc.08-757-105Carta
da filtroWhatman1001-042
Pinze peso piumaFisher Scientific Inc.4750
Temprid SC (imidacloprid/bifentrin)Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifentrin)FMC Corp.
Provetta06-443-1850 mL; filettata a sommità piatta
Maglia7250C
KimWipe06-666A11 cm x 21 cm
PennelloQualsiasi pennello piccolo
PannelliLegno composito o piastrelle sarebbero sufficienti in un negozio di bricolage
Metallo pesi Qualsiasitipo di vite metallica che manterrà il peso della capsula di Petri su una superficie
in plastica da centrifuga fine piccolo di faesite

Riferimenti

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  1. Sabou, M., et al. Bed bugs reproductive life cycle in the clothes of a patient suffering from Alzheimer's disease results in iron deficiency anemia. Parasite. 20, (2013).
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