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Articolo metodologico

Istituzione di un Bioreposito di base clinico

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DOI:

10.3791/55583

29 maggio 2017

In questo articolo

Sommario

I tumori cutanei vengono spesso scartati dopo la chirurgia microscopica di Mohs. Qui viene descritto un protocollo che consente al personale di supporto clinico di elaborare e memorizzare in modo efficace campioni tumorali cutanei ( ad esempio, carcinoma delle cellule squamose, carcinoma delle cellule basali e melanoma) per applicazioni di laboratorio a valle senza interferire con le operazioni cliniche.

Abstract

L'incidenza del cancro della pelle ( es., Carcinoma delle cellule squamose , carcinoma delle cellule basali e melanoma) è in aumento negli ultimi anni. Si prevede che ci sarà una domanda parallela per campioni tumorali cutanei per studi di ricerca biomedica. La disponibilità dei tessuti, tuttavia, è limitata a causa del costo della creazione di un bioreposito e della mancanza di protocolli disponibili per ottenere campioni clinici che non interferiscono con le operazioni cliniche. È stato stabilito un protocollo per raccogliere e elaborare campioni tumorali cutanei e associati di sangue e saliva che hanno un impatto minimo sulle procedure cliniche di routine alla data di una chirurgia Mohs. I campioni tumorali vengono raccolti e trattati da pazienti sottoposti al primo strato di chirurgia Mohs per tumori maligni cutanei provenienti da biopsia da parte del histotechnologista Mohs. Il tessuto normale adiacente viene raccolto all'atto della chiusura chirurgica. Ulteriori campioni che possono essere raccolti sono sangue intero e tampone buccale. Utilizzando campioni di tessuti normalmente scartati, è stato generato un bioreposito che offre diversi vantaggi fondamentali basandosi sulla clinica rispetto all'ambiente di laboratorio. Questi includono una vasta gamma di campioni raccolti; L'accesso ai dischi identificati, inclusi i rapporti patologici; E, per il tipico donatore, l'accesso a campioni aggiuntivi durante le visite di follow-up.

Introduzione

La ricerca sul cancro e sul biomarker si basa su una fornitura di campioni di tessuti umani di qualità e l'offerta limitata ha ostacolato la ricerca 1 , 2 . Molti studi dermatologici sono limitati dall'inadeguata offerta, qualità variabile e costi associati all'uso del tessuto umano. Il costo della creazione di una grande banca bio-dedicata è stato stimato di circa due milioni di dollari3 e questi costi collocano l'uso del tessuto umano fuori dalla portata di molti ricercatori. Inoltre, il processo di generazione e conservazione di campioni di ricerca pone il rischio di influenzare le operazio....

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Protocollo

Tutta la sperimentazione sui campioni di tessuto umano è stata approvata da Western IRB (Protocollo WIRB # 20142461). Il singolo criterio per la raccolta dei tessuti per queste procedure è una diagnosi bioscopica di SCC. Nessun criterio di esclusione è stato descritto nel protocollo originale IRB, ma non sono stati utilizzati campioni di pazienti con una nota patologia trasmessa dal sangue. Il consenso informato è stato ottenuto prima della raccolta del tessuto cutaneo, del sangue e della saliva. La commissione di revisione istituzionale del Midwest ha approvato il lavoro di convalida con campioni biorepositivi basati su cliniche presso la Midwestern University (AZ #....

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Risultati

Tumore e ANT sono stati utilizzati con successo in isolamento proteico e testati da blotting occidentale. Come mostrato nella figura 3 , i marker di carcinoma cutanee squamose cutanee (Muc1 14 , FHL-1 15 e p40 16,17 ) possono essere rilevati nei campioni dei pazienti raccolti e conservati nel nostro bioreposito in base alla clinica.

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Discussione

Alla conoscenza dell'autore, questo protocollo è il primo del suo genere che si concentra sull'approvazione clinica di campioni di tessuto cutaneo in un approccio economico e veloce. I pazienti sottoposti a microchirurgia di Mohs sono in genere pianificati durante specifici blocchi di tempo e la raccolta è limitata a questi periodi. La raccolta di campioni comporta l'impegno dell'assistente medico coinvolto nella cura del paziente, del histotechnolog Mohs che elabora i campioni tumorali e un membro del p.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno niente da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dai fondi del Midwestern University College of Health Sciences per la Facilitazione della Ricerca, concesso a EEH e all'Ufficio Midwestern Office of Research e ai Programmi Sponsorizzati Intramural Grant, assegnato a KJL. Ulteriori sostegno è stato fornito da Affiliated Laboratories e Dermatologia Affiliated. Ringraziamo Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel e Ali Zaidi per la loro assistenza tecnica.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Provette per la raccolta del sangue in plastica BD Vacutainer con K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
Microscopia elettronica Scienze Lame a doppio taglioThermoFisher Scientific50-949-411
Pinze curve per uso generico a punta mediaThermoFisher Scientific16-100-110
Provetteper microcentrifuga premiumThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Cheratinocita MediumThermoFisher ScientificNC9791321
Microscopia elettronica Scienze Composto TEK OCT tissutaleThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 CryostatLeica Biosystems14047743909
Vetrini per microscopio smerigliatiThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon Rapid-Chrome H& E Kit di colorazione per sezioni congelateThermoFisher Scientific99-900-01
Nalgene Provette criogeniche per conservazione a lungo termineThermoFisher Scientific03-337-7X
Falcon 15 mL Provette per centrifuga conicheThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swab ThermoFisher ScientificNC9679349
Tecnologia di segnalazione cellulare 10x tampone RIPAThermoFisher Scientific50-195-822
Cocktail di inibitori della proteasi e della fosfatasi ThermoFisherScientificPI78443
Eppendorf 5424R MicrocentrifugaThermoFisher Scientific05-401-203
Omogeneizzatorea batteria per morter a pelletThermoFisher Scientific12-141-3
Pestello a pellet senza RNAsiThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2 IncubatriceThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Siero fetale bovinoThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco Penicillina-StreptomicinaThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 M HepesThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc Coltura cellulare 35 mm con sfiatoThermoFisher Scientific1256591
Anti-CFH anticorpo monoclonale clone OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) anticorpoAbnovaABX-144A
Anticorpo Anti MUC-1Santa Cruz Biotechsc-7313
Anti-Lumaca + Lumaca (fosfo S246)AbcamAb63568
Capra anti-coniglio IgG, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 Sonde molecolari di fallodina A12380
ProLong Gold Antifade Mountant consonde molecolari DAPI P36941
Microscopio Zeiss Axio Imager Z1 con fotocamera AxiocamZeiss4300009901
Olympus IX51 a contrasto di fase con fotocamera DP72OlympusIX511F3

Riferimenti

  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

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Ristampe e permessi

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