Articolo metodologico

Valutazione della procedura per eseguire la cystometria sveglia in un modello di mouse

DOI:

10.3791/55588

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20 maggio 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Vermont, 2Department of Urology and Biomedical Laboratory, University of Southern Denmark, 3Wake Forest Institute for Regenerative Medicine, Wake Forest University, 4Institute for Clinical Medicine, Aarhus University

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

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Questo studio descrive le procedure chirurgiche e le tecniche sperimentali per eseguire la cistometria sveglia in un mouse in movimento. Inoltre, fornisce prove sperimentali per sostenere la sua ottimizzazione e standardizzazione.

Abstract

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La revoca della cistometria è stata utilizzata da molto tempo per valutare la funzionalità della vescica in topi liberamente spostati, tuttavia i metodi specifici utilizzati variano tra i laboratori. Lo scopo di questo studio era quello di descrivere la procedura microchirurgica impiegata per l'impianto di un tubo intravesico e la tecnica sperimentale per la registrazione della pressione vescicale urinaria in un topo sveglio, in movimento libero. Inoltre, vengono presentati dati sperimentali per mostrare come la chirurgia, così come il tipo e la dimensione del tubo, influenzano la funzione del tratto urinario inferiore e la sensibilità di registrazione. L'effetto del diametro del tubo sulla registrazione a pressione è stato valutato sia in tubo di polietilene e poliuretano con diversi diametri interni. Successivamente, il tubo più performante di entrambi i materiali è stato impiantato chirurgicamente nella cupola della vescica urinaria dei topi maschi C57BL / 6. La frequenza di micturition di 12 ore, durante la notte, è stata registrata in animali sani e intatti e animali 2, 3, 5 e 7 giorni dopo la chirurgia. Al raccolto, vesciche wSono stati valutati per segni di gonfiore utilizzando osservazione lorda e successivamente sono state trattate per l'analisi patologica. Il più grande grado di gonfiore della vescica è stato osservato nel giorno 2 e 3, che è correlato con i dati comportamentali di annullamento che evidenziano una significativa riduzione della funzionalità della vescica. Al giorno 5, l'istologia della vescica e la frequenza di annullamento erano normalizzati. Sulla base della letteratura e delle prove fornite dai nostri studi, proponiamo le seguenti fasi per la registrazione in vivo della pressione intravesica e del volume annullato in un mouse sveglio: 1) eseguire l'intervento chirurgico utilizzando un microscopio operativo e strumenti microchirurgici, 2) utilizzare polietilene-10 Tubazioni per ridurre al minimo gli artefatti di movimento e 3) eseguire cistometria al giorno 5 postoperatorio, quando si risolve il gonfiore della vescica.

Introduzione

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La cistometria di riempimento (FC) è un metodo diagnostico che prevede l'inserimento di un catetere nella vescica urinaria per registrare la pressione durante il riempimento lento della vescica. Introdotto per la prima volta nel 1927 come metodo diagnostico clinico per valutare la funzione del tratto urinario inferiore, è rimasto ampiamente utilizzato. 1 Nelle applicazioni di ricerca, FC può essere utilizzato per testare la funzione vescicale nei modelli animali sani e malati e per studiare gli effetti degli agenti farmacologici. I modelli animali roditori sono comunemente usati per indagare la funzione del tratto urinario inferiore.

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Protocollo

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Gli animali sono stati alloggiati presso l'Università di Vermont Animal Care Facility secondo orientamenti istituzionali. Tutti gli esperimenti su animali sono stati eseguiti in conformità con la Guida Nazionale delle Nazioni Unite per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.

1. Implantazione tubo intravesicale

  1. Preparazione di tubi e strumenti per la procedura chirurgica
    1. Tagliare un pezzo di PE10 da 7 cm per fare il catetere per l'impianto.
    2. Creare un flare ad una estremità del tubo PE10 lentamente avanzando l'estremità verso una fiamma aperta.
      NOTA: estrarre rapida....

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Risultati

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Non c'era alcuna differenza significativa tra i materiali di tubo e i diametri nella consistenza dell'ascesa di pressione e cadere all'interno del sistema durante l'occlusione del tubo. L'impianto di tubo intravesicale post-gonfiore della parete della vescica era significativo per i materiali di polietilene (PE) e poliuretano (PU). Il giorno 2 si è sviluppata una rigonfiata gonfiore sottocutaneo. Ha occupato la metà della sezione trasversale della vescica, portando ad ostruzione del lume.......

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Discussione

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Materiale ottimale e dimensione del tubo intravesicale

Per determinare il diametro del tubo di effetto sulle registrazioni a pressione, abbiamo provato diversi tubi microfluidici; PE50 (0,58 mm ID), poliuretano PU027 (0,4 mm ID), PE25 (0,46 mm ID) e PE10 (0,28 mm ID). Per ogni tubo, la pressione è stata registrata con la pompa di infusione in esecuzione a 1 mL / h, mentre si muove rapidamente il tubo verticalmente da 0 a 30 cm. Gli esperimenti iniziali in vivo hanno tentato di utilizzare tubi P.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Questo studio è stato finanziato dal Dipartimento di Chirurgia dell'Università del Vermont, dal Consiglio Danese per la Ricerca Indipendente e dall'Ospedale Universitario di Odense.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Tubo in polietilene (PE) 10InstechBTPE-10Adatto a connettori/spine 30G Tubo
in polietilene (PE) 50InstechBTPE-50Adatto a connettori/spine 22G
girevole in acciaio inossidabile a canale singolo da 22 GInstech375/22
Molla di prolunga in acciaio ad alto tenore di carbonio (9/64" OD)Grainger1NAH1Protegge i tubi PE50 - Tagliati a misura
Connettore 22 GInstechSP22/12
Yutaoz Pistola per colla adesiva professionale Hot MeltYutaozUtilizzare l'impostazione a bassa temperatura (100 ° C) - Qualsiasi pistola per colla a caldo con un intervallo di temperatura regolabile funzionerà
Surebonder DT-2010 stick di colla per tutti gli usiSurebonderQualsiasi colla a caldo per tutti gli usi funzionerà
Dumont #5 micropinze curveWorld Precision Instruments500232
Dumont #7 micropinze curveWorld Precision Instruments14188
Mini forbici da dissezione - dritteWorld Precision Instruments503240
Micro pinza per zanzare (12,5 cm)World Precision Instruments500451
Forbici da dissezione - diritteWorld Precision Instruments14393
Porta aghi CastroviejoPrecision Instruments503258
isoflurano, USPPhoenix2%, portata 1 L/min
Buprenorfina0,05 mg/kg
0,9% Cloruro di sodio Irrigazione, USPBaxter
6-0 Ethilon monofilamento nero, sutura non assorbibileEthiconLegame vescicale
6-0 Vicryl viola intrecciato, sutura assorbibileEthiconSutura muscolare, in esecuzione
6-0 Prolene monofilamento blu, sutura non assorbibileEthiconSutura cutanea, materasso verticale, interrotto
KD Legato 210 pompa di infusione/prelievoKD Scientific1,5 mL/h
Trasduttore di pressione monousoDigitimerNL108T2
Amplificatore di pressioneDigitimerNL108A
Power1401-3 interfaccia di acquisizione datiDigitimer
Spike2 Cambridge Electronic Design LimitedSoftware per la registrazione della pressione su PC
Microscopio operatorio chirurgico Leica MZ6 (3,2 - 20X)Leica MicrosystemsIngrandimento
World

Riferimenti

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  1. Perez, L. M., Webster, G. D. The History of Urodynamics. Neurourol Urodyn. 11 (1), 1-21 (1992).
  2. Fry, C. H., et al. Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction. Neurourol Urodyn. 29 (4), 603-608 (2010).
  3. Maggi, C. A., Santicioli, P., Meli, A.

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Tubo intravesicaleprocedura microchirurgicaregistrazione della pressione vescicaletubicino in polietilene 10quinto giorno post operatoriovescica urinariatratto urinario inferiorecistometria di riempimento

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