Articolo metodologico
* These authors contributed equally
Questo documento introduce un metodo per misurazioni ripetute di ventilazione e l'attività muscolare respiratorio in un modello murino amiotrofica liberamente comportarsi sclerosi laterale (ALS) durante la progressione della malattia con pletismografia corpo intero e elettromiografia tramite un dispositivo di telemetria impiantato.
muscoli respiratori accessori aiutano a mantenere la ventilazione quando è compromessa la funzione del diaframma. Il seguente protocollo descrive un metodo per misure ripetute più di settimane o mesi di accessorio attività dei muscoli respiratori e contemporaneamente misura di ventilazione in un mouse non anestetizzati, liberamente comportarsi. La tecnica comprende l'impianto chirurgico di un trasmettitore radio e l'inserimento dell'elettrodo conduce nella scaleno e trapezio muscoli per misurare l'attività elettromiogramma di questi muscoli inspiratori. La ventilazione è misurata mediante pletismografia corpo intero, e il movimento animale è valutata video ed è sincronizzato con l'attività elettromiogramma. Le misurazioni di attività muscolare e ventilazione in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica vengono presentati per mostrare come questo strumento può essere utilizzato per studiare come i cambiamenti respiratori attività muscolare nel corso del tempo e per valutare l'impatto delle attività muscolare sulla ventilazione. I metodi descritti possono all'easily essere adattato per misurare l'attività di altri muscoli o per valutare l'attività dei muscoli respiratori accessori in altri modelli murini di malattie o lesioni.
Muscoli respiratori accessori (ARM) aumentare la ventilazione durante i periodi di alta richiesta (ad esempio, esercizio) e aiutano a mantenere la ventilazione quando la funzione diaframma è compromessa in seguito a lesione o malattia 1, 2. Sebbene alterazioni della funzionalità membrana sono stati ben descritti nei pazienti sclerosi laterale amiotrofica (ALS) e modelli murini 3, 4, 5, 6, e tanto meno si conosce l'attività o la funzione di armi nella SLA. Tuttavia, uno ....
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procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato di cura e l'uso dei bambini di Cincinnati Hospital Medical Center Istituzionale Animal e condotto in conformità con la guida NIH per la cura e l'uso di animali da laboratorio.
1. Preparazione per telemetria Chirurgia implantare Dispositivo
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Il protocollo descritto è stato usato per impiantare un dispositivo di telemetria e per registrare e scaleno trapezio EMG, WBP, e video di una SOD1 (G93A) modello ALS topo. Periodi in cui l'animale è inattivo (ad esempio, non si muove) sono stati identificati utilizzando la registrazione video e confermati dalla mancanza di attività movimento-correlata nella traccia WBP (Figura 3A). I periodi inattivi includono il tempo trascorso in REM o sonno non-REM, così.......
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La procedura consente dimostrato qui per la misurazione non invasiva (dopo l'impianto chirurgico iniziale del trasmettitore) di attività dei muscoli respiratori e ventilazione per molti mesi, nello stesso animale. Questa tecnica ha diversi vantaggi rispetto alle tecniche standard di EMG nei topi anestetizzati: 1) gli esperimenti richiedono un minor numero di topi e di fornire la possibilità di registrare i dati provenienti dallo stesso sito in un unico mouse attraverso stadi della malattia (invece di utilizzare molt.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Il supporto per questo lavoro è stato fornito dal Premio Trustee Hospital Medical Center di Cincinnati a bambini SAC ed una borsa di formazione NIH (T32NS007453) per VNJ
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| B6.Cg-Tg (SOD1*G93A)1 Gur/J | Jackson Laboratory | 4435 | |
| Camera per pletismografia | Buxco Respiratory Products/ Data Sciences International | 601-1425-001 | |
| Ricevitori di telemetria (modello RPC-1) | Data Sciences International | 272-6001-001 | |
| Pompa di flusso di polarizzazione (modello BFL0500) | Data Sciences International | 601-2201-001 | |
| ACQ-7000 USB | Data Sciences International | PNM-P3P-7002XS | |
| Dataquest A.R.T. Data Exchange Matrix Data | Sciences International | 271-0117-001 | |
| Nuovo sistema di analisi Ponemah | Data Sciences International | PNM-POST-CFG | |
| Ponemah Physiology Platform Software di acquisizione v5.20 | Data Sciences International | PNM-P3P-520 | |
| Pacchetto di analisi della pletismografia del respiro intero illimitato Ponemah v5.20 | Data Sciences International | PNM-URP100W | |
| Sistema software Ponemah configurato | Data Sciences International Modulo | PNM-P3P-CFG | |
| (URP) | Data Sciences International | PNM-URP100W | |
| Amplificatore universale | Data Sciences International | 13-7715-59 | |
| Scheda di sincronizzazione | Data Sciences International | 271-0401-001 | |
| Cavo di sincronizzazione | Data Sciences International | 274-0030-001 | |
| Trasduttore-Pressione Buxco | Data Sciences International | 600-1114-001 | |
| Misuratore di portata | Data Sciences International | 600-1260-001 | |
| Magnete e radio inclusi nello starter kit | F20-EETData Sciences International | 276-0400-001 | |
| Telecamera Axis P1363 | Data Sciences International | 275-0201-001 | |
| Terg-A-Zyme | Fisher Scientific | 50-821-785 | Detergente enzimatico |
| Actril | Minntech Corporation | 78337-000 | |
| Microscopio da dissezione stereo sterilizzante chimico (modello MEB126) | Leica | 10-450-508 | |
| Umidificatore/incubatrice per neonati servocomandato | OHMEDA Ohio Care Plus | 6600-0506-803 | |
| TL11M2-F20-EET Trasmettitori Data Sciences | International | 270-0124-001 | |
| Dumont #2 Pinze per laminectomia - Punte standard/Dritte/12 cm (x2) | Fine Scientific Instruments | 11223-20 | Per la manipolazione di fili |
| Dumont #2 Pinze per laminectomia - Punte standard/Dritte/12 cm (x2) | Fine Scientific Instruments | 11223-20 | Per chirurgia |
| Pinze a modello stretto - Seghettate/Curve/12 cm | Fine Scientific Instruments | 17003-12 | |
| - Taglio duro/Dritto/Affilato/12,5 cm/6 mm Tagliente | Strumenti scientifici fini | 15124-12 | |
| Forbici per separare i tessuti - Dritte/Blunt-Blunt/11,5 cm | Fine Scientific Instruments | 14072-10 | |
| Forbici fini - Taglio duro/Curvo/Affilato-Affilato/9 cm | Fine Scientific Instruments | 14058-11 | Per tagliare fili e tagliare chiodi Manico |
| bisturi #3 | World Precision Instruments | 500236 | |
| Lama per bisturi | Fine Scientific Instruments | 10010-00 | Per la preparazione di cappucci di piombo |
| Sutura assorbibile intrecciata in polisorbo | Coviden | D4G1532X | Per avvolgere i cavi del trasmettitore |
| Gluture | Zoetis Inc. | 6606-65-1 | Adesivo cianoacrilato |
| 3 mL Syring Slip Tip - Soft | Vitality Medical | 118030055 | |
| Ago da 25 G (x2) | Becton Dickinson and Co. | 305-145 | |
| Applicatori con punta in cotone | Henry Schein Animal Health | 100-9175 | |
| Andis Easy Cut Hair Clipper Set | Andis | 049-06-0271 | Rasoio elettrico venduto a Target |
| Isoflurano | Henry Schein Animal Health | 29404 | Anestetico |
| Alcool isopropilico 70% | Priority Care 1 | MS070PC | |
| Dermachlor 2% Medical Scrub (clorexidina 2%) | Butler Schein | 55482 | |
| Lacrime artificiali | Henry Schein Animal Health | 48272 | Lubrificante Unguento oftalmico |
| Grasso sottovuoto | Dow Corning Corporation | 1597418 | |
| Coperta d'acqua | JorVet | JOR784BN |
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