Questo video articolo fornisce una dimostrazione dettagliata delle procedure necessarie per rimuovere con successo il pancreas da un mouse tramite la dissezione per l'analisi istologica e profiling metabolico.
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Articolo metodologico
Dissezione del Pancreas del Mouse per l'analisi istologica e Profiling metabolico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Stiamo indagando il fattore di trascrizione specifico del pancreas, 1a cre-ricombinasi; ratto di salmone affumicato-fermata-salmone affumicato-Kristen sarcoma, glicina, l'acido aspartico pone al codone 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) ceppo il mouse come un modello di cancro del pancreas umano. L'obiettivo dei nostri studi attuale consiste nell'identificare nuovi biomarcatori metabolici della progressione del cancro del pancreas. Abbiamo eseguito il profilo metabolico di urina, feci, sangue ed estratti di tessuto del pancreas, come pure le analisi istologiche del pancreas per mettere in scena la progressione del cancro. Il pancreas del mouse non è un organo solido ben definito come negli esseri umani, ma piuttosto è un tessuto molle diffusamente distribuito che non è facilmente identificabile da parte di persone non hanno familiarità con l'anatomia interna del mouse o da individui che hanno poca o nessuna esperienza di prestazione dissezioni di organo del mouse. Lo scopo di questo articolo è quello di fornire una dettagliata graduale dimostrazione visiva per guidare i novizi nella rimozione del pancreas del mouse tramite la dissezione. Questo articolo dovrebbe essere particolarmente utile per gli studenti e gli investigatori di nuovo alla ricerca che richiede la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.
Introduzione
Il mouse è emersa come un importante modello animale di cancro del pancreas umano1,2. Nel Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modello del topo, Kristen oncogene di ratto sarcoma (K-Ras) viene attivata esclusivamente nel pancreas, con conseguente apertura di lesioni precancerose del pancreas, conosciuto come neoplasia intraepiteliale pancreatica (PanINs), che il progresso per gli adenocarcinomi duttali pancreatici, comunemente come PDACs3. Questo sistema di modello del mouse fornisce uno dei migliori modelli animali disponibili per cancro del pancreas umano
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Protocollo
le procedure effettuate nel video e descritti di seguito sono state approvate da istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC) presso l'Università di Miami.
1. preparazione e Test di stimolo
- stabilire due aree distinte per la procedura chirurgica, il tavolo operatorio e la tabella post-operazione. Fase di entrambe le aree con tutti i materiali e gli utensili necessari.
Tabella
- stage operativo sotto un cappuccio ventilato. Organizzare la tabella con l'apparecchiatura in un modo che permette il continua e senza ostacoli delle prestazioni della procedura.
- Stabilire una tabella di postoperatoria nella stessa....
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Risultati
La figura 1 Mostra una panoramica dell'area ambiente operativa e la figura 2 Mostra l'area di operazione post. Mentre questa impostazione fornisce la quantità minima di attrezzature e messa in scena, gli individui possono scegliere di modificare questo per meglio soddisfare le esigenze individuali. Il protocollo dovrebbe essere ottimizzato secondo le specifiche esigenze dell'esperimento. Questa procedura è condotta in modo che te.......
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Discussione
Significato per quanto riguarda i metodi esistenti
Mentre esista altri video informale delle dissezioni del mouse, questo video articolo fornisce la prima qualità professionale, inter pares, dimostrazione visiva di tutti i passaggi dettagliati necessari per l'estrazione e la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione10 . Il pancreas è un organo principale per attività metabolica e insulino produzione, la dissezione e la raccolta del pancreas permette la conservazione.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
MAK riconosce il supporto per questo lavoro dai National Institutes of Health / numero - 1R15CA152985-01A1 di sovvenzione del National Cancer Institute. Questo progetto è stato supportato anche dal Miami University Undergraduate Research Award programma, le opportunità di dottorato-laurea Università di Miami per Scholarship Program e il programma di studiosi di Miami University estivo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Barattolo di vetro | Corning | 3140-150 | Il barattolo di vetro utilizzato nel video è stato interrotto. Questo è il suo sostituto. |
| Coperchio del barattolo di vetro | Corning | 9985-150 | Il coperchio del barattolo di vetro utilizzato nel video è stato interrotto. Questo è il suo sostituto. |
| Provette Falcon da 15 ml | Fisher Scientific | 339650 | |
| Forbici chirurgiche | Fisher Scientific | 9201 | |
| Flacone da spremere | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% etanolo | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalina | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Pannelli in schiuma | Therapak | 562908 | |
| Pinze | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Siringhe | BD Biosciences | 309624 | |
| Provette Falcon da 50 mL | Fisher Scientific 339652 | ||
| Provette per microcentrifuga da 2,0 mL | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Cuscinetti chirurgici | Fisher Scientific | S67011 | |
| Perni a T Lunghezza: 2" | Prodotti Advance Store | X32T-05 | |
| Salviette sterilizzanti | Monouso professionali International Inc. | Q85084 | |
| Contenitore per oggetti taglienti | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Bilancia analitica | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Bocca larga e poco profonda Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Rack per microprovette galleggiante | VWR | 60986-100 | |
| Fiala criogenica 1,2 mL, sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (isoflurano) | Henry Schein Salute degli animali | 050033 | |
| Azoto liquido | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Ceppo di topo Kras | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Ceppo di topo | Cre MMRRC | OOO435-UNC |
Riferimenti
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al.
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Ristampe e permessi
