Qui presentiamo un protocollo per descrivere sistemicamente e direttamente l'uso della neurotrofina 4 (NTF4) per rimodellare i muscoli laringei dell'invecchiamento del ratto.
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Articolo metodologico
Infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o l'iniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento
In questo articolo
Sommario
Abstract
La disfunzione della laringe negli anziani è una delle principali cause di disabilità, dai disturbi vocali alla disfagia e dalla perdita di riflessi protettivi delle vie aeree. Pochi, se esistono, esistono terapie che mirano a disfunzione muscolare laringea legata all'età. Le neurotrofine sono coinvolte nell'innervazione muscolare e nella differenziazione delle giunzioni neuromuscolari (NMJs). Si pensa che le neurotrofine aumentino la trasmissione neuromuscolare aumentando il rilascio del neurotrasmettitore. Le giunzioni neuromuscolari (NMJ) diventano più piccole e meno abbondanti nei muscoli laringei del ratto di invecchiamento, con prove di denervazione funzionale. Abbiamo esplorato gli effetti di NTF4 per l'uso clinico futuro come terapeutico per migliorare la funzione nei muscoli laringei umani di invecchiamento. Qui forniamo il protocollo dettagliato per l'applicazione sistemica e l'iniezione diretta di NTF4 per esaminare la capacità del muscolo laringeo ratto di invecchiare di rimodellare in risposta all'applicazione NTF4. In questo metodo, i ratti ricevevano NTF4 sistematicamente via oPompa smotica o mediante iniezione diretta attraverso le pieghe vocali. I muscoli della laringe furono poi disseccati e utilizzati per l'esame istologico della morfologia e della denervazione legata all'età.
Introduzione
I muscoli laringei contratti rapidamente e costantemente e sono vulnerabili agli effetti negativi dell'invecchiamento. Questa attività costante è pensata per contribuire a problemi vocali o disfagia osservati in persone di età superiore ai 65 anni 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Molti meccanismi molecolari e patofisiologici contribuiscono a questa disfunzione legata all'età. Questi meccanismi possono includere il rimodellamento della....
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Protocollo
Usa i topi maschi Fischer 344-Brown Norvegia a 6 e 30 mesi di età per questo protocollo. I ratti sono stati ottenuti dall'Istituto Nazionale di Colonia di Roditore di Aging. Abbiamo utilizzato i ratti per questo studio perché la struttura della laringa del ratto è simile a quella dell'uomo, funzionalmente funzionale alla protezione delle vie aeree e alle vocalizzazioni specifiche per specie. Questo studio è stato eseguito in conformità con la politica PHS sulla cura umana e l'uso di animali da laboratorio, La Guida NIH per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e la legge sulla protezione degli animali (7 USC et seq.); Il protocollo sull'uti....
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Risultati
I ratti sono stati eutanizzati dopo 2 settimane di infusione osmotica o una settimana dopo l'iniezione diretta di NTF4. Le laringe sono state raccolte, poste in cryoprotectant (30% saccarosio e 70% saline fosfato tamponato) e poi sezionate in serie in larghezza 10 μm con un criostato. L'invecchiamento dei muscoli laringei è influenzato dalla somministrazione di NTF4 25 . Oltre al ratto giovane e vecchio, abbiamo confrontato il lato iniettato e non iniettat.......
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Discussione
I muscoli della laringe sono vulnerabili agli effetti sfavorevoli dell'invecchiamento. Studi precedenti hanno dimostrato variazioni nei muscoli linfari che prevedono cambiamenti nella dimensione della fibra, nel numero totale di fibre, nella capacità rigenerativa, nella dimensione e nella modifica della quantità di NMJ, oltre alle variazioni della funzione contrattile e dei cambi di isoenzima di miosina 4 , 11 , 27 ,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno niente da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dell'Istituto Nazionale sulla Sordità e altri disturbi della comunicazione (R21DC010806 per CAM e JCS e R01DC011285 a CAM).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Neurotrofina 4 | Pepro Tech | 450-04 | 200 ng in 50 μ L |
| Pompa osmotica Alzet | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 gradi endoscopio | Stoltz | 61029D | |
| 50 mm 30 calibro 100-μ L siringa | Hamilton | 84850 e soluzione salina 201812 | |
| (soluzione di cloruro di sodio) | Sigma-Aldrich | S8776 | |
| ketamina cloridrato | Henry Schein | 56344 | |
| xilazina cloridrato | Henry Schein | 33198 | |
| 25 G 5/8 ago | Becton-Dickinson | 305901 | |
| 1 mL siringa | Becton-Dickinson | ||
| unguento oftalmico | Henry Schein | 8897 | |
| tosatrici | Oster | 44-018 | |
| etanolo | Decon | 2716 | |
| iodio (Betadine) | Purdue Pharma LP | ||
| termoforo | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 filo di sutura in nylon | AD Surgical | PMN-518R6 | |
| crile emostatico | Fine Science Tools | 13005-14 | |
| delicata pinza per legatura di sutura | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| meloxicam | Henry Schein | 49756 | |
| carprofene | Merritt Veterinary Supplies | 148700 | |
| unguento antibiotico | Henry Schein | 57110 | |
| acepromizina Aceproject | Henry Schein | 3845 | |
| isoflurano Isothesia | Henry Schein | 50033 | |
| scatola di induzione (scatola di anestesia) | Harvard Apparatus | 50-0116 | |
| serbatoio di ossigeno compresso | Scott Gross | Piattaforma in plexiglas UN1072 | |
| Small Parts Inc (Amazon) | |||
| pinze con punta in gomma | Gomma per strumenti di scienza fine | 11075-00 | |
| gomma liquida per pinze sopra | 42518 | Lowe | |
| (siringa BD tagliata a misura) | Becton-Dickinson | ||
| rino-laringea stroboscopio | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| videoregistratore | Kay-Pentax | ||
| saccarosio | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| criostato Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| Gill 1 ematossilina | VWR | 10143-142 | |
| Shandon eosin-Y alcolico | Thermo Fisher Scientific | 6766007 | |
| anti-canale del sodio Nav1.5 anticorpo prodotto nel coniglio | Sigma-Aldrich | S0819 | |
| Texas red-X falloidina | Sigma-Aldrich | T7471 | |
| alfa-bungarotossina alexa fluor 488 coniugato | Thermo Fisher Scientific | B-13422 | |
| Anestesia per piccoli animali macchina | Smiths Medical | CDS 9000 |
Riferimenti
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. ....
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Ristampe e permessi
