L'esame ecocardiografico è frequente nei topi. Sono stati sviluppati dispositivi costosi ultrasuono ad alta definizione per questo scopo. Questo protocollo descrive una procedura ecocardiografica conveniente combinata con analisi morfometriche istologico per determinare la morfologia cardiaca.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Esame ecocardiografico ed istologico della morfologia cardiaca nel topo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Un numero crescente di modelli murini geneticamente modificati è diventato disponibile negli ultimi anni. Inoltre, il numero di studi farmacologici effettuati nei topi è alto. Caratterizzazione fenotipica di questi modelli del mouse richiede anche l'esame della morfologia e funzione cardiaca. L'ecocardiografia e la formazione immagine a risonanza magnetica (MRI) sono comunemente utilizzati approcci per caratterizzare la funzione cardiaca e morfologia nei topi. Apparecchiatura ecocardiografica e MRI specializzati per l'uso in piccoli roditori è costoso e richiede uno spazio dedicato. Questo protocollo descrive misure cardiache nei topi usando un sistema ecocardiografico clinico con una sonda vascolare umano 15 MHz. Misurazioni eseguite su topi adulti anestetizzati. Almeno tre sequenze di immagini sono registrati e analizzati per ogni animale in M-mode nella visualizzazione parasternale asse corto. In seguito, viene eseguito l'esame istologico cardiaco e del cardiomyocyte diametri sono determinati su ematossilina-eosina - o germe di grano dell'agglutinina (WGA)-paraffina sezioni macchiate. La densità del vaso è determinato morfometrico dopo Pecam-1 immunostaining. Il protocollo è stati applicati con successo agli studi farmacologici e diversi modelli animali genetici sotto condizioni di base, così come dopo infarto miocardico sperimentale di legatura permanente del (dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra LAD). Nella nostra esperienza, indagine ecocardiografica è limitata agli animali anestetizzati ed è fattibile in topi adulti peso corporeo di almeno 25 g.
Introduzione
Una grande varietà di modelli murini geneticamente modificati sono disponibili e il numero di studi farmacologici nei topi è alta1,2. Ecocardiografia e MRI sono gli approcci comunemente utilizzati per la caratterizzazione fenotipica della funzione cardiaca e la morfologia in questi modelli del mouse3. L'obiettivo del protocollo presentato è quello di analizzare la funzione cardiaca e morfologia in topi adulti. Combina ecocardiografica, istologiche e immunohistochemical misurazioni. L'esame ecocardiografico è ampiamente usato in topi4,....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
gli esperimenti descritti qui sono stati effettuati in conformità con le leggi pertinenti istituzionale e francese sul benessere degli animali, linee guida e criteri. Essi sono stati approvati dal comitato etico francese (Comité Institutionnel d ' Ethique Pour il ' animale de Laboratoire; numero NCE/2012-106).
1. ecocardiografia
- determinare il peso del corpo del mouse usando una bilancia di laboratorio standard, tenendola leggermente dalla coda per assicurare il posizionamento corretto.
- Anestetizzare l'animale tramite l'iniezione intraperitoneale (i.p.) di 50 mg/kg pentobarbital 25
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Nella Figura 1, rappresentante registrazioni ecocardiografiche dimostrano l'utilità di ecocardiografia per identificare fenotipi cardiaci in topi geneticamente modificati. La differenza tra un mouse con la normale funzione cardiaca (Figura 1A) e un animale con un ventricolo di sinistra dilatato e ridotta funzione di LV (Figura 1B) possa essere facilmente identificata. Figura 2
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Sono stati sviluppati diversi metodi per valutare la struttura cardiaca e funzione in topi, tra cui l'ecocardiografia, MRI contrapporre-aumentato, micro CT e scansione PET. Grazie alla sua economicità e semplicità, l'ecocardiografia è la tecnica più ampiamente usata per l'analisi funzionale in topi11. In generale, a causa delle piccole dimensioni del cuore e l'alta frequenza della frequenza cardiaca nei topi, trasduttori con una frequenza > MHz 10 dovrebbe essere usato, anche se misure di succ.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Il lavoro è stato sostenuto dal governo francese (National Research Agency, ANR) attraverso il programma "Investimenti per il futuro" LABEX SIGNALIFE (riferimento ANR-11-LABX-0028-01) e da sovvenzioni a K. d. W. dalla Association pour la Recherche sur le Cancer, Fondation de France e pianificare l'Inserm di cancro. D. B. e V. a. ricevuto borse di studio dalla Fondation pour la Recherche Médicale e dalla città di Nizza, rispettivamente. L'ecocardiografo e il trasduttore sono state gentilmente fornite da Philips. Ringraziamo la Borderie r., S. Destree, M. Cutajar-Bossert, r. Landouar, r. Martres, r. Biancardini e S. M. Wagner per la loro assistenza di tecnico qualificat....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Agglutinina del germe di grano (WGA) tetrametilrodamina coniugata | Life Technologies, Sonde molecolari | W849 | |
| Capra biotinilata Anticorpo IgG di coniglio | Vectorlabs | BA-1000 | |
| Kit di blocco avidina/biotina | Vectorlabs | SP-2001 | |
| VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (perossidasi, standard) | Vectorlabs | PK-6100 | |
| Mezzo di montaggio antisbiadimento VECTASHIELD con DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
| SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidina | Sigma | D4168 | |
| Soluzione di perossido di idrogeno | Sigma | H1009 | |
| Anticorpo anti-Pecam-1 (CD31) | Abcam | ab28364 | |
| Gel per trasmissione degli ultrasuoni, Gel Aquasonic 100 | Parker | ||
| Sonda ecografica lineare, ecocardiografo | Philips Healthcare | ||
| Philips Healthcare | IE33 xMATRIX | ||
| Leica | DMi8 | ||
| per | 11525304 | TDAPI | |
| Leica | 11525310 | TxR | |
| , SPOT RT3 Color Slider | Spot Software di imaging | ||
| , software avanzato e di base SPOT 5.2 | spot | ||
| Imaging Forbici | |||
| Forbici grandi | Strumenti per la scienza | 14501-14 | |
| Lame per bisturi | Strumenti per la scienza | 10023-00 | |
| Graefe Forcipe | Fine Science Tools | 11650-10 | |
| Rasoio per roditori | Harvard Apparatus | 34-0243 | |
| cassette per inclusione di paraffina | Sakura | 4155F | |
| neutro tamponato Formalina | Sakura | 8727 | |
| Xilene | Sakura | 8733 | |
| Paraffine TEK III | Sakura | 4511 | |
| apparecchio automatizzato per inclusione, Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
| Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
| Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
| Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
| , Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
| Terreno di montaggio: Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
| scatole per vetrini | Sakura | 3958 | |
| soluzione di eosina | Sakura | 8703 | |
| soluzione di ematossilina | Sakura | 8711 | |
| microtomo RM2125RT | Leica | 720-1880 (VWR | |
| bagno d'acqua Leica HI1210, | Leica | 720-0113(VWR) | |
| Etanolo | VWR | ACRO444220050 | |
| provette da 15 ml | VWR | 734-0451 | |
| Vaschetta di vetro colorante | VWR | MARI4220004 | |
| VW | MARI4200005 | R | |
| Incubator | Binder | 9010-0012 | |
| Compresse di perossido di idrogeno DAB e urea, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidina | compresse Sigma | D4293 | |
| PBS (10X) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 |
Riferimenti
- Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
- Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological resear....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
