Presentiamo un metodo dettagliato per studiare la fisiologia placentare umana in vivo a termine. Il metodo combina il campionamento di sangue dai vasi in entrata e in uscita sui lati materni e fetali della placenta con misurazioni a ultrasuoni del flusso di sangue del volume e del campionamento dei tessuti placentari.
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Articolo metodologico
L'approccio di campionamento a 4 nave per studi integrativi della fisiologia placentare umana
In questo articolo
Sommario
Abstract
La placenta umana è altamente inaccessibile per la ricerca mentre è ancora in utero . L'attuale comprensione della fisiologia placentare umana in vivo è quindi fondata in gran parte su studi sugli animali, nonostante l'elevata diversità tra le specie in anatomia placentare, emodinamica e durata della gravidanza. La stragrande maggioranza degli studi di placenta umana sono studi di perfusione ex vivo o studi in trofoblasti in vitro . Anche se studi in vitro e modelli animali sono essenziali, l'estrapolazione dei risultati da tali studi alla placenta umana in vivo è incerta. Abbiamo cercato di studiare fisiologia umana della placenta in vivo a termine e presentare un protocollo dettagliato del metodo. Sfruttando l'accesso intraabdominale alla vena uterina poco prima dell'incisione uterina durante la sezione cesarea pianificata, raccogliamo campioni di sangue dalle navi in entrata e in uscita sui lati materni e fetali della placenta. Quando si combinano conMisurazioni di centratura da campioni di sangue con misurazioni del flusso di sangue volume, siamo in grado di quantificare l'assorbimento placentario e fetale e il rilascio di qualsiasi composto. Inoltre, i campioni di tessuto placentare provenienti dalle stesse catene materno-fetali possono fornire misure di densità e attività trasportatori e altri aspetti delle funzioni placentari in vivo . Attraverso questo uso integrativo del metodo di campionamento a 4 navi siamo in grado di testare alcuni dei concetti attuali di trasferimento nutriente e metabolismo placentare in vivo , sia in gravidanze normali che patologiche. Inoltre, questo metodo consente di identificare le sostanze scelte dalla placenta alla circolazione materna, che potrebbero essere un importante contributo alla ricerca di biomarcatori di disfunzione della placenta.
Introduzione
Secondo gli Istituti Nazionali di Salute, USA, la placenta è l'organo meno compreso nel corpo umano 1 , 2 , 3 . È difficile accedere e studiare la placenta umana in vivo senza imporre rischi non etici sulla gravidanza in corso. Gli studi sulla funzione placentare nell'uomo sono pertanto largamente basati su modelli in vitro e ex vivo . La maggior parte degli studi in vivo precedenti del trasporto del placenta e del metabolismo sono stati eseguiti negli animali 4 , 5 ,<....
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Protocollo
Lo studio è stato approvato dai funzionari della protezione dei dati presso l'Ospedale Universitario di Oslo e dal Comitato Regionale per l'Etica della Ricerca Medica e Salute, la Norvegia meridionale 2419/2011. Tutti i partecipanti hanno firmato un consenso informato scritto all'atto dell'inserimento.
1. Preparativi
NOTA: una sequenza temporale per le procedure è descritta in Figura 1 .
Figura 1<....
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Risultati
Il metodo di campionamento a 4 navi è applicabile nella pratica clinica e abbiamo ottenuto con successo campioni di sangue da 209 madri / coppie infantili. In 128 di questi abbiamo anche raggiunto per misurare il volume del flusso di sangue. Sono stati ottenuti campioni completi di campionamento a 4 vasi e misure di flusso di buona qualità sia di vasi materni che fetali in 70 coppie madre-feto ( Figura 3 ). Inoltre abbiamo finora raccolto campioni di sangue .......
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Discussione
Il metodo di campionamento delle 4 navi in placenta è rilevante per tre scopi principali. In primo luogo, può essere usato per studiare come le sostanze specifiche vengono prelevate dalla placenta sul lato materno e eventualmente trasferite alla circolazione ombelicale e al feto, come dimostrato dai nostri studi sul glucosio e sugli amminoacidi. In secondo luogo, il metodo è molto rilevante per studiare sostanze prodotte dalla placenta e rilasciate alle circolazioni materne o fetali, come dimostrato dai risultat.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno niente da rivelare.
Ringraziamenti
Innanzitutto, ringraziamo sinceramente le madri che hanno partecipato a questo progetto. Successivamente, riconosciamo tutto il personale che ha assistito e facilitato la procedura di campionamento, l'anestesista, l'infermiere anestesista e gli infermieri chirurgici. Il progetto non sarebbe stato possibile senza finanziamenti dall'Autorità regionale per la salute regionale della Norvegia sudorientale e dall'unità consultiva norvegese sulla salute delle donne, dall'Università di Oslo e dai finanziamenti locali forniti dall'Ospedale universitario di Oslo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Composizione corporea materna | |||
| Scala di impedenza | Tanita | o simili | |
| Misurazioni ecografiche Ecografo | |||
| Sequoia 512 | Acuson | dotato di trasduttore curvo con Doppler a colori e a onde pulsate (larghezza di banda di frequenza 2 - 6 MHz) | |
| Campioni di sangue | |||
| Cannula aringa | BD Medical | 682245 | o similare |
| Siringa eccentrica con punta Luer da 20 cc senza ago | Termo | SS-20ES | o similare. 3 necessari. |
| Siringa eccentrica Luer Tip da 10 cc senza ago | Termo | SS-10ES | o similare. 9 necessari. |
| Siringa Luer 6% da 5 cc senza ago | Termo | SS-05S1 | o simile. 2 necessari. |
| Siringa per gas ematici arteriosi | Radiometro medico | o similare. 4 necessari. | |
| Ago alato sterile collegato a un tubo flessibile, | Greiner Bio-One | calibro | (destinato all'uso singolo).3 necessario. |
| Provetta vacutainer 6 mL EDTA | Greiner Bio-One | 456043 | o simili. Etichetta con sito di campionamento. 10 necessari. |
| Provetta Vacutainer 5 mL LH Separatore di litio eparina | Greiner Bio-One | 456305 | o simile. Etichetta con sito di campionamento. 5 necessari. |
| Provetta Vacutainer 6 ml Attivatore di coaguli di siero | Greiner Bio-One | 456089 | o simili. Etichetta con sito di campionamento. 5 necessari. |
| Provetta Vacutainer 3 mL 9NC Citrato di sodio della coagulazione 3,2% | Greiner Bio-One | 454334 | o similare. Etichetta con sito di campionamento. 5 necessari. |
| Fiale criogeniche, 2,0 mL | Corning | 430488 | o simili. Etichetta con sito del campione, siero/tipo di plasma e ID. 90 necessario. |
| Vassoi contrassegnati per il trasporto delle | per il trasporto dei campioni di sangue in sala operatoria | ||
| Bilanciere | per una miscelazione delicata dei campioni | ||
| Ghiaccio | in scatola di polistirolo | ||
| Azoto | in contenitore appropriato | ||
| Campioni di placenta | |||
| Metallo vassoio | |||
| Ghiaccio | in scatola di polistirolo | ||
| Scala | |||
| Righello | |||
| 1 M Soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma | D1408 | o simile. Diluire 10 M per 1 M prima dell'uso |
| Soluzione di stabilizzazione dell'RNA | Sigma | R0901-500ML | o similare |
| Composto a temperatura di taglio ottimale (O.C.T.) VWR | 361603E | o | |
| fiale criogeniche simili, 2,0 mL | di Corning | 430488 | o simili. Etichetta con sito di campionamento. contenuto e ID. 10 necessari. |
| Provette da centrifuga, fondo conico 50 mL | Greiner Bio-One | 227,285 | o similari. Etichetta con "RNA later", sito di campionamento e ID. 2 necessari. |
| Azoto | in contenitore appropriato | ||
| Composizione corporea fetale | |||
| Bilancia | |||
| Metro a nastro |
Riferimenti
- Jansson, T., Powell, T. L. Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches. Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).
- Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early dev....
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Ristampe e permessi
