Summary
Burada, bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanarak olmayan anestezi Sıçanlarda basit kuyruk damar kan örnekleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem kan doğrudan maruz kalma riskini azaltır ve tek bir iz birden çok örnekleri alarak basitleştirir.
Abstract
Kan üzerinden örnekleme yerlerden de, fareler toplanabilir. Örneğin, kuyruk damar kan örnekleme için üstün bir konumdur. Ancak, böylece bazen ponksiyon zordur kuyruk ven incedir. Buna ek olarak, kuyruk ven düşük kan akışı ve yeterli kan almak için uzun örnekleme süresi gerekir. Mevcut rapor basit kan örnekleme yöntemi, genellikle burada sigara anestezi sıçanlara kullanılan hastalardan kan örneklerini almak için kullanılan vakum kan toplama yöntemi açıklanır. 22 G kelebek iğne ucu yaklaşık 2-3 cm yaklaşık 20 ° ve kan açılı kuyruk ucu vakum toplama tüp va kelebek iğne kauçuk sonuna ekleyerek toplanan yanal kuyruk damarlar birinin içine eklenmiş cuum kan toplama tüp. Mevcut deneysel sonuç başarı oranı % 95'deney grubu ve başlangıç grubunda % 90'ı olduğunu göstermek. Başarı oranı ve ponksiyon süreleri iki grup arasında benzer idi. Örnekleme süresi önemli ölçüde deneysel grup acemi grubuna göre daha kısa. Sonuç olarak, bu vakum kan toplama için sıralı kan örnekleme non - imzalat sıçan kuyruk damardan diğer güvenilir bir alternatif geleneksel kan örnekleme teknikleri için kullanılan hangi hizmet olabilir mümkün ve kolay öğrenmek, yöntemidir fareler.
Introduction
Kan örnekleme fareler üzerinden çok çeşitli deneysel çalışmalar için gereklidir. Teknikleri için fareyi koleksiyonundan kan delik kalp, retro-orbital pleksus, juguler ven, Safen ven, kuyruk kan damarları, Karotid arter, abdominal aort ve vena kava içerir. (Safen ven ve kuyruk kan damarı ponksiyon) hariç çoğu teknikleri anestezi1,2gerektirir. Damarlar sıçan kuyruk rutin kan örnekleme ve vasküler enjeksiyon için delmiş. Hatta fareler imzalat3kuyruk sıcak su ile tedavi sonra kan damarlarının de dilate ve manipülasyon için uygun vardır.
Kan örnekleri küçük laboratuvar hayvanları2elde etmek için yeni ve gelişmiş teknikleri geliştirme rağmen her zaman ne zaman küçük hayvanlardan örnekleme yeterince kan elde etmek kolay değildir. Sıçan kuyruğu damar kan örnekleme4için üstün bir konumdur. Ancak, kuyruk ven ince, böylece bazen ponksiyon zordur ve onun düşük kan akımı nedeniyle yeterince kan almak için uzun bir zaman alacağını. Kan toplama bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi üzerinden günlük klinik pratikte tipik bir yöntemdir. Bu kapalı sistem toplama kan kan doğrudan maruz kalma riskini azaltır ve birden çok örneği bir tek iz5kolaylaştırdı. Mevcut rapor içinde sigara anestezi rats vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanarak basit kuyruk damar kan örnekleme yöntemi açıklanır. Bu yöntem kolay usta ve kan Sıçanlarda art arda büyük miktarda elde etmek için kullanılabilir.
Protocol
Tüm yordamları kent tıbbi üniversite Konseyi hayvan bakımı Komitesi, Huazhong Üniversitesi bilim ve Teknoloji (Wuhan, Çin Halk Cumhuriyeti) tarafından kabul edildi. El yazması varış göre hazırlanmıştır (hayvan araştırma: In Vivo deneyler raporlama) yönergeleri6.
1. yetiştirme
- Sprague-Dawley (SD) fareler kullanın (n = 20, 261-291 g ağırlığında 10 erkek, 8 haftalık, demek 272.85 ±9.07 g =) deneysel hayvan Merkezi Huazhong Üniversitesi bilim ve teknoloji ve bakımı ve kullanımı için rehber göre fareler korumak Laboratuvar hayvanlarının bize Ulusal Sağlık Enstitüsü tarafından (NIH yayın No.85-1996 revize 23,) yayınlandı
- Evin yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim standart koşullar altında. Fareler ahşap-tıraş ile 530 cm2 kafeslerde yatak takımları tutmak. Ev iki fareler her kafes içinde. Tüm kafesleri Oda ortamına (mikro-yalıtım veya havalandırılan caging) açık tut
- Deneysel iletişim kuralında yer alan personel, düzenli olarak fareler ele emin olun.
- Oda sıcaklık 21 ° C ve 23 ° c arasındaki sıcaklıklarda muhafaza Fiyatlar normal tuz diyet vermek (% 0,3 NaCl) çalışma boyunca.
2. kan toplama yordamı
Not: Vakum kan toplama sistemi çift başlı iğne [22 G (0.7 mm x 25 mm)], plastik tutucu ve vakum tüpleri bu amaç ile kauçuk stoper (şekil 1) (2 mL) bir dizi oluşur.
- Fareyi bir plastik yasaklama sahibi yerleştirin ve kuyruk herhangi bir görünür kir veya dışkı kaldırmak için sıcak (20-30 ° C) su ile yıkayın. Asistan kuyruk Genişletilmiş bir pozisyonda tutan iken, % 70 etanol ile kuyruk silin ve gazlı bez ile temizleyin ven yapmak için temiz.
- Bir pozisyonda yanal kuyruk damarlar (5 mm civarında) birini 22 G kelebek iğne ucunu takın yaklaşık 2-3 cm uzakta (Şekil 2) yaklaşık 20 ° açıyla kuyruk ucu. Kan vakum kan toplama tüpe (şekil 3) kelebek iğne kauçuk sonuna ekleyerek vakum toplama tüp içine toplamak.
Not: 1.2 mL7maksimal koleksiyonu kan birimdir. - Kan toplama sonra iğneyi çıkarın ve yavaşça kan akışını durdurmak 15-30 s için gazlı bez ile delik siteye basınç uygulayın. Sonra fare plastik yasaklama sahibinden yayın ve fareyi onun kafes için dönün.
- Kan plazması toplamak için bir antikoagülan olarak EDTA içeren tüpler kullanın. Yavaşça tüp birkaç kez kan antikoagülan karıştırın ve örnekleri buz üzerinde dikey olarak yerleştirmek için tersine çevirin.
- Plazma veya serum ayrı 10 min için 2.000 x g de soğutmalı santrifüj kan örnek koleksiyon tüplerde santrifüj kapasitesi.
- Plazma/serum, kırmızı ve beyaz kan hücresi katmanları bozmamaya dikkat çekici ayıklayın. Kan serumu toplamak için tüpler antikoagülan olmadan kullanın. Her iki tür örnek hemen kullanılan veya bir yıla kadar-80 ° C'de depolanan.
Not: Başarılı kan toplama her zaman 1.2 mL kan alma olarak tanımlanmıştır. Maksimal ponksiyon zaman kuruldu toplam kan hacmi üçüncü delik sonra 1.2 mL düşük olsaydı üç denemeler için bu başarısız kan koleksiyonu olarak tanımlanmıştır. Örnekleme süresi kuyruk ven delik kelebek iğne kaldırıldıktan sonra kan toplama başlar. -
İki hafta7içinde iki kez kan toplamak.
- Sınamak ve bu yöntemin fizibilite doğrulamak için bu kan toplama Protokolü gerçekleştirmeden önce iki tıp öğrencileri (yeni başlayanlar) için 2 h tren. 2 deneyimli arkadaşlar (deney grubu) tarafından 10 Rat ve 2 tıp öğrencileri (acemi grubu) tarafından 10 Rat kan ve yirmi fareler kullanın.
3. istatistiksel analiz
- Verileri ortalama değer ± standart sapma olarak ifade ve SPSS istatistik 17 ile analiz. Bir α değeri 0,05 seçildi, bu nedenle p < 0,05 olarak istatistiksel olarak anlamlı kabul.
Representative Results
Örnekleme süresi, vücut kitle ve iki grup kan toplama hacmi
Kan her grupta iki hafta içinde iki kez 10 Rat (5 erkek) toplanmıştır. Her iki grup halinde ortalama vücut kitle benzer (272.00 ±9.66 g ve 273.70 ±8.87 g). Örnekleme süresi önemli ölçüde deneysel grup acemi grubuna kıyasla daha kısa (2.77 ±0.53 min 3.28 ±0.83 dakika, p vs < 0,05) (Tablo 1).
Başarı oranı ve kez iki grubun ponksiyon
Başarı oranı % 95'i (19/20) deneysel grubunda ve %90 (18/20) Başlangıç grubunda yapıldı (p > 0.05). Ponksiyon kez iki grup arasında önemli ölçüde farklı değildi (1,50 ±0.61 min vs 1,85 ±0.75 dakika, p > 0.05) (Tablo 2). Bu sonuçları bu yöntemi öğrenmek kolaydır ve teknik eğitim için 2 h sonra hakim gösterir.
Resim 1 : 2 mL vakumlu kan toplama tüp (solda); 22 G kelebek iğne (Merkezi); plastik yasaklama tutucu (sağda). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : İğne ucu yanal kuyruk damar içine (yaklaşık 5 mm) konumunda eklenmiş yaklaşık 20 ° açıyla kuyruk ucu uzak yaklaşık 2-3 cm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Başarılı iz. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Deney grubu | Acemi grup | |||||||||
| Cinsiyet | Vücut ağırlığı (g) | Toplanan kan hacmi (mL) | örnekleme süresi (dk) | Cinsiyet | Vücut ağırlığı (g) | Toplanan kan hacmi (mL) | örnekleme süresi (dk) | |||
| E1-1 | Erkek | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | Erkek | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | Erkek | 291 | 1.2 | 2.73 | B1-2 | Erkek | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | Erkek | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | Erkek | 264 | 1.2 | 3,73 | |
| E2-2 | Erkek | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | Erkek | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| E3-1 | Erkek | 267 | 1.2 | 2.73 | B3-1 | Erkek | 265 | 1.2 | 3.52 | |
| E3-2 | Erkek | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | Erkek | 265 | 1.2 | 2.53 | |
| E4-1 | Erkek | 263 | 1.2 | 2,41 | B4-1 | Erkek | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | Erkek | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | Erkek | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | Erkek | 265 | 1.2 | 3,61 | B5-1 | Erkek | 277 | 1.2 | 3,48 | |
| E5-2 | Erkek | 265 | 1.2 | 2.42 | B5-2 | Erkek | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | Erkek | 285 | 1.2 | 3,33 | B6-1 | Erkek | 274 | 0,9 | 4,87 | |
| E6-2 | Erkek | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | Erkek | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | Erkek | 271 | 1.2 | 2,82 | B7-1 | Erkek | 268 | 1.0 | 3,93 | |
| E7-2 | Erkek | 271 | 1.2 | 2.42 | B7-2 | Erkek | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | Erkek | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | Erkek | 262 | 1.2 | 2,07 | |
| E8-2 | Erkek | 268 | 1.2 | 3,05 | B8-2 | Erkek | 262 | 1.2 | 3,67 | |
| E9-1 | Erkek | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | Erkek | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | Erkek | 273 | 1.2 | 3,17 | B9-2 | Erkek | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | Erkek | 261 | 1.2 | 1,82 | B10-1 | Erkek | 275 | 1.2 | 2.53 | |
| E10-2 | Erkek | 261 | 1.2 | 3,25 | B10-2 | Erkek | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Ortalama | 2,77 | 3,28 | ||||||||
| Tr-1: ilk kan toplama için deneysel grubundaki fareleri seri numarası. | ||||||||||
| En-2: deney grubu ikinci kan koleksiyonu için de, fareler seri numarası. | ||||||||||
| Bn-1: ilk kan toplama için Başlangıç grubundaki fareleri seri numarası. | ||||||||||
| Bn-2: ikinci kan toplama için Başlangıç grubundaki fareleri seri numarası. | ||||||||||
Tablo 1: Kan sonuçlarını deney grubu hem de başlangıç grubunda toplanan.
| Kan toplama kez | Ortalama ponksiyon kez | Bir zaman delik | İki kez ponksiyon | Üç kez ponksiyon | Başarısız oldu | Başarı oranı | |
| Deney grubu | 20 | 1,50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | % 95 |
| Acemi grup | 20 | 1,85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | % 90 |
| Bir zaman ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra ilk ponksiyon farelerle sayısı | |||||||
| İki kez ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra ikinci delik farelerle sayısı | |||||||
| Üç kez ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra üçüncü delik farelerle sayısı | |||||||
| Başarısız oldu: başarısız kan toplandıktan sonra üçüncü delik farelerle olan | |||||||
Tablo 2: Karşılaştırma ponksiyon kez ve deney grubu ve acemi grup başarı oranları.
Discussion
Mevcut rapor Sıçanlarda bir öğrenmek kolay kan toplama yöntemini açıklar. Sonuçlarımız bu yöntem art arda sıçanlarından emir kan büyük miktarda toplamak için uygun olduğunu gösterdi. Ayrıca, bu yöntem kolayca kısa vadeli bir öğrenme eğrisi ile hakim. Bu yordam anestezi Rat gerçekleştirilebilir ve sadece hayvanlar için en az stres neden olur.
Kan üzerinden çeşitli yerlerde sıçanlar toplanabilir. Kuyruk damar kan örnekleme4için üstün bir konumdur. Ancak, her zaman yeterli kan hacmi ince ve düşük kan akışı kuyruk ven Rats'in elde etmek kolay değil. Vakum kan toplama sistemi genellikle günlük klinik pratikte hastalardan kan örnekleri toplamak için kullanılır. Bu vakum kan toplama sistemi hastalar ve araştırma hayvanlar için uzun süre8,9,10kullanılmıştır. Bu sistem bir vakum kan toplama tüp silikon kaplamalı iç tüp duvar ve kelebek iğne ile oluşur. Bu vakum negatif basınç ilkesine dayanıyordu ve kan da kirlenme ve hemoliz11olasılığını azaltır kan toplama, riski olmadan sürekli çiziminin sağlar. Kateter kan örneğinde yaklaşık 0.3 mL birimdir. İğne kuyruğu damar geri çekilmesi toplama Vakum tüplü vakum nedeniyle içine kateter bloke kan akacak. Bu yöntem aynı zamanda daha küçük bir delik iğne kullanımı ile daha az 100 gr ağırlığında fareler gelen kan toplamak için geçerlidir.
Bu kan toplama yöntemi birçok avantajı vardır. Bu yordam yalnızca en az yaralanma için fareler neden olur ve kan toplama anestezi kullanmadan yapılabilir, böylece kan örneği üzerinde stres tepkisi ve anestezi etkisi önlenebilir. Gözlemlerimiz fareler işlem sırasında plastik yasaklama tutucu sessiz edildi ve bu deneyler sırasında ölüm yok olduğunu gösterdi. İkincisi, tekrarlanan kan toplama her bir veya iki gün mümkün, çeşitli araştırma amaçlı sık örnekleme kan ile yeterli bir güç sağlar. Son olarak, bu yöntem öğrenmesi kolay ve kolayca yeni başlayanlar tarafından kısa (2 h) öğrenim süresinden sonra benzer başarı oranları ve ponksiyon kez bu raporda deneysel ve acemi gruplar arasında gösterildiği gibi hakim olmuş oldu. Bir önceki raporda, Lee ve ark. fare4yanal kuyruk damardan kan örnekleme, benzer bir yöntem gösterdi. Bizim yöntem Lee ve ark. tarafından bildirilen daha kolaydır 4 biz doğrudan kuyruk ven ve tüp diğer ucunu ponksiyon iğnesi eklemek o doğrudan bağlı kan, ilave bir şırınga kullanımı ve kan el ile aspirasyon olmadan ve gerek kalmadan toplamak için Vakum tüplü ' süt Ing' damar kan akışını kolaylaştırmak için. Bu kapalı sistem ile kan toplama kan kontaminasyon riskini azaltır. Plastik yasaklama tutucu kullanımı da fare stresi azaltır ve kuyruk fiksasyonu kolaylaştırır.
Aşağıdaki iki adımı bu yöntem başarılı uygulama için önemlidir. 1) kuyruk genişletmek ve kuyruk hareketi önlemek; 2) hafifçe ven ponksiyon yoluyla ven kaçının ve ponksiyon iğne damar içinde tutmak için 20 ° açılı delmek.
Sonuç olarak, kabul edilen vakum kan toplama yöntemi Sıçanlarda güvenli, uygun ve kolay uygulama. Bu yöntem, Sigara anestezi sıçanlarından emir elde bir yeterli kan hacmi ile kan sık örnekleme sağlar.
Disclosures
Yazarlar ifşa yoktur
Acknowledgments
Yazarlar hiçbir bildirimleri yapmak için var.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
