Articolo metodologico

Un protocollo per la misurazione Cue reattività in un modello del ratto di disturbo da uso di cocaina

DOI:

10.3791/55864

⸱

18 giugno 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center for Addiction Research, University of Texas Medical Branch, 2Institute for Translational Sciences, University of Texas Medical Branch, 3Mitchell Center for Neurodegenerative Diseases, University of Texas Medical Branch, 4Department of Neurology, University of Texas Medical Branch, 5Department of Pathology, University of Texas Medical Branch, 6Department of Pharmacology and Toxicology, University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

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Cue la reattività è concettualizzata come sensibilità ai segnali collegati con esperienze di assunzione di droghe che contribuiscono alla brama e ricadono in esseri umani astinenti. Reattività di Cue viene modellata in ratti dalla misurazione orientamento attenzionale verso spunti droga-collegato che si traduce in un comportamento Appetitivo approccio in un test di reattività cue dopo il self-administration e costretto l'astinenza.

Abstract

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Disturbo da uso di cocaina (CUD) segue una traiettoria di autosomministrazione ripetitivo durante il quale precedentemente neutri stimoli acquistano valore incentivante. Cue la reattività, la sensibilità agli stimoli precedentemente collegati con l'esperienza di assunzione di droghe, svolge un ruolo prominente nel desiderio umano durante l'astinenza. Reattività di cue è possibile valutare l'orientamento attentivo verso spunti droga-collegato che è misurabile come comportamento di approccio appetitiva in studi preclinici e umani. Questo documento descrive una valutazione della reattività di cue in ratti addestrati per auto-somministrarsi cocaina. Autosomministrazione di cocaina è accoppiato con la presentazione di segnali discreti che fungono da induritori condizionati (cioè, casa luce, stimolo, suoni di pompa di infusione). Dopo un periodo di astinenza, pressa a leva nel contesto di autosomministrazione di cocaina accompagnata da segnali discreti precedentemente accoppiati con infusione di cocaina è misurati come reattività di cue. Questo modello è utile per esplorare meccanismi neurobiologici che cue reattività processi pure valutare farmacoterapie per sopprimere la reattività di spunto e di conseguenza, modificare la vulnerabilità di ricaduta. Vantaggi del modello includono sua rilevanza traslazionale e il suo viso e validità predittiva. Il limite principale del modello è che l'attività di reattività cue può essere eseguita solo di rado e deve essere utilizzato solo in breve durata (ad es., 1 ora), in caso contrario ratti inizierà ad estinguere l'abbinamento dei segnali discreti con lo stimolo di cocaina. Il modello è estensibile a qualsiasi stimolo positivamente rinforzante accoppiato con segnali discreti; anche se è particolarmente applicabile ai farmaci d'abuso, questo modello può tenere future applicazioni in campi quali l'obesità, dove ricompense in cibo appetibile possono fungere da rafforzare positivamente gli stimoli.

Introduzione

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Disturbo da uso di cocaina (CUD) segue una traiettoria di autosomministrazione ripetitivo durante il quale precedentemente neutri stimoli guadagno valore incentivazione1. Cue reattività è la sensibilità agli stimoli precedentemente collegati con l'esperienza di assunzione di droghe, e svolge un ruolo prominente nel desiderio umano2,3,4,5. Il rischio di progressione a CUD, come pure la ricaduta durante l'astinenza, è pensato per essere più alto per gli individui che esprimono alta sensibilità a stecche di droga-collegato6,7. Entrambi contesti ambientali (ad es., persone, edifici, generi musicali) e stimoli discreti di droga-collegato (ad es., armamentario) diventano associati con la ricompensa di cocaina; l'esposizione a questi segnali può innescare cambiamenti nella fisiologia periferico (ad es., frequenza cardiaca, temperatura cutanea e resistenza della pelle), plasticità del cervello e cervello connettività funzionale2,8,9 ,10. In altre parole, ri-esposizione alla cocaina-collegato spunti attiva circuiti limbic corticostriatali per evocare risposte fisiologiche e soggettive condizionate che guidano appetitiva approccio (droga in cerca) comportamento11,12 ,13,14,15.

Reattività di cue misurata con analisi di imaging funzionale del cervello è predittiva di recidiva vulnerabilità nei soggetti con CUD16. Misurazioni di reattività di cue nei modelli del roditore servono come una misura sostitutiva per rischio di ricaduta e può essere sfruttata per studi traslazionali. Così, una farmacoterapia che diminuisce cue reattività nei roditori può essere portato avanti come un trattamento di prevenzione delle ricadute nei test clinici umani. Modelli preclinici con il merito traslazionale necessario e la validità predittiva sono particolarmente importanti dato che non ci sono attualmente nessun farmacoterapie approvato dalla FDA per CUD17.

La procedura di autosomministrazione roditore è il gold standard, modello traslazionale con validità predittiva per umani stupefacenti18 e di fondamentale importanza per capire i molecolari e fisiologici processi sottostanti CUD. Risposta - consegnaindipendente della cocaina provoca effetti comportamentali, neurochimici e molecolari distinti rispetto al risposta -dipendente l'esposizione della cocaina; ad es., evoca risposta - consegna di cocainaindipendente di mortalità significativamente più alto19. Inoltre, le conseguenze del neurochemical di astinenza da risposta -dipendente da cocaina autosomministrazione sono distinte da quelli innescati da astinenza da risposta -indipendente cocaina consegna20, 21. così, modelli CUD in base alla risposta -dipendente consegna della cocaina sono modelli superiori traslazionale quando valutano cue reattività e associati meccanismi di azione.

Nel protocollo descritto qui di seguito, la cocaina viene consegnata per via endovenosa attraverso un catetere intra-giugulare indwelling. Tuttavia, sono stati sviluppati metodi alternativi per auto-somministrarsi droga per vie orale e per inalazione. D'importanza, roditori controllano consegna della droga, esseri umani analoghi, attraverso le risposte dell'operatore. Di conseguenza, c'è alta concordanza tra farmaci autosomministrati da roditori ed esseri umani22. La procedura di auto-somministrazione preclinici droga qui sotto si avvale di leva premendo, rafforzata dalla somministrazione di farmaci, per motivare i tassi di risposta superiori di controllo del veicolo. Comportamento alla ricerca di droga è allenato da abbinamento originariamente "neutro" cues (ad es., una luce di stimolo o tono e l'ambiente contestuale in cui la cocaina si verifica l'autosomministrazione) con infusione di cocaina; questi segnali diventano induritori condizionati (per la Revisione: Cunningham & Anastasio, 201423). Successiva ri-esposizione alla cocaina-collegato spunti innesca il comportamento alla ricerca di droga in roditori (cioè, tenta di recapitare la cocaina attraverso premendo sulla leva precedentemente-attivo) così come il desiderio e la ricaduta nel CUD soggetti24, 25 , 26 , 27.

In genere, studi preclinici roditore di comportamento alla ricerca di droga cocaina auto-somministrazione utilizzano reintegrazione di formazione e/o droga di estinzione condotta all'interno l'ambiente droga-collegato28,29, 30 , 31 , 32. presse la leva precedentemente attivi, in assenza di consegna di droga e/o cue, tipicamente costituiscono la misura di ripristino seguendo estinzione33,34,35. Al contrario, cue reattività droga in cerca di comportamento è valutato seguente l'astinenza forzata senza previa estinzione formazione28,36,37,38,39 .

Misure di risultato e variabili sperimentali sono stati attentamente scelte e convalidate per sezionare i diversi aspetti della neurobiologia del comportamento alla ricerca di droga e ricaduta-like, ed è affermato che neuroadaptations differiscono tra modelli con e senza estinzione formazione 40,41,42,43. Inoltre, da una prospettiva traslazionale, formazione di roditore estinzione non è speculare nelle regolazioni cliniche per CUD poiché stecche di droga sono stati dell'umore, luoghi e persone44; la combinazione unica di questi spunti sono probabilmente non è disponibile in un ambiente clinico45,46,47. Quindi, il modello del roditore descritto nel presente documento funge da un parallelo meglio alla condizione umana rispetto a molti dei modelli attualmente disponibili.

Di seguito viene descritto un addestramento di autosomministrazione di cocaina convalidato, l'astinenza forzata e cue reattività test protocollo per i ratti. Brevemente, ratti sono impiantati con cateteri intra-giugulari, addestrati per auto-somministrarsi cocaina o soluzione salina tramite press 'attivo' leva, e ricezione dello stimolo cocaina o salino è accoppiato con segnali discreti di luci e suoni che servono come condizionate induritori. Dopo 14 giorni di autosomministrazione di cocaina, i ratti sono sottoposti a 30 giorni di astinenza forzata e un test di reattività successivi 60min cue nella quale leva di pressatura viene misurata. Il test di reattività cue è una misura sostitutiva per la vulnerabilità di ricaduta di cocaina in esseri umani.

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Protocollo

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Tutte le manipolazioni degli animali sono eseguite in conformità con la Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (2011) e con l'approvazione del Comitato di uso e istituzionali Animal Care.

1. gli animali

  1. Acclimatare ratti Sprague Dawley maschi circa 8-9 settimane di età (250-260 g) per un minimo di sette giorni in una camera di Colonia tenuto a 21-23 ° C e 45-50% di umidità su un ciclo luce-buio di 12 h (luci su 06:00-18:00 h).
  2. Casa ratti due / gabbia e gestire giornalmente in tutto lo studio. Fornire cibo e acqua ad libitum nella gabbia casa in tutte le fasi dello studio.
    Nota: Restrizione alimentare aumenta la salienza di cocaina ricompensa48, rafforza l'attività locomotrice indotta da cocaina49e agisce come una fonte di stress per reintegrazione50 e così può anche reattività cue impatto.
  3. In modo casuale assegnare ratti salino o cocaina gruppi di trattamento.

2. chirurgia

  1. Ratto di posto nell'ambito dell'anestesia utilizzando un cocktail contiene 8,6 mg/kg di xilazina, 1,5 mg/kg di acepromazina e 43 mg/kg di ketamina sospesa in soluzione salina batteriostatica. Confermare che il ratto è sufficientemente anestetizzato da pizzicare la punta e il monitoraggio di respirazione e riflessi motore. Applicare unguento oftalmico direttamente agli occhi per prevenire la secchezza degli occhi.
    Nota: Se il topo non è sufficientemente anestetizzati esporrà una risposta motoria per il pizzico di punta, e tasso di respirazione del ratto può aumentare rapidamente.
    1. Utilizzando una tecnica asettica mentre il ratto è sotto anestesia, impiantare un catetere endovenoso nella vena giugulare collegata ad un supporto posteriore con una cannula. Dopo l'impianto chirurgico, consentire ratti a recuperare per 5-7 giorni 28,36,37,51.
      Nota: La via endovenosa di autosomministrazione di cocaina in esseri umani si traduce in un aumento rapido nel cervello cocaina livelli52,53. Così, in una delle sue più comuni varianti preclinici, ratti sono addestrati per auto-somministrarsi cocaina tramite un catetere intra-giugulare.
  2. Mantenere la pervietà del catetere con vampate quotidiane usando una soluzione di 0,1 mL di soluzione salina batteriostatica contenente eparina sodica (10 U/mL), streptochinasi (0,67 mg/mL) e ticarcillina disodico (66,67 mg/mL). Inizierà il catetere vampate di calore il giorno dopo l'intervento chirurgico e continuare ogni giorno successive sessioni di autosomministrazione.
    1. Riempire una siringa con la soluzione e collegate il supporto posteriore con la siringa attraverso tubi di polietilene per irrigare.
    2. Verificare il funzionamento corretto catetere periodicamente in tutto l'esperimento tramite la somministrazione endovenosa di 10 mg/kg di sodio methohexital.
      Nota: Questa è una dose sufficiente ad anestetizzare brevemente l'animale solo quando somministrato per via endovenosa.

3. self-Administration

  1. Utilizzare il software di programmazione per generare 4 programmi separati, come descritto di seguito.
    1. Codice due programmi per l'autosomministrazione su un rapporto fisso (FR) 1 pianificazione, vale a dire., dove una pressa a leva attiva si traduce in un'infusione. Da programma #1, codice la leva di sinistra come la leva attiva; per il programma #2, codice la leva di destra come la leva attiva. Costruire entrambi i programmi per essere 180 min in lunghezza e consegnare lo stimolo di cocaina e discreti cue complessi nel modo seguente:
      1. Hanno una leva attiva premere causa illuminazione simultanea di entrambi la luce di casa e la luce di stimolo sopra la leva attiva.
      2. Dopo un ritardo di 1-s, avere la pompa di infusione consegnare 0,1 mL della soluzione oltre 6-s.
      3. Avere lo stimolo luce spento dopo 7-s (inattivazione allo stesso tempo come la pompa di infusione).
      4. Avere la luce di casa ha spento dopo 27-s, con l'ultimo 20-s che indica un periodo di timeout durante il quale pressa a leva attiva non hanno pianificate conseguenze, ma questi sono ancora registrati.
      5. Per l'uscita dati, raccogliere infusioni, pressa a leva attiva, pressa a leva inattivo e latenza alla prima stampa di leva attiva.
    2. Codice più due programmi per l'autosomministrazione su un FR5 pianificare, vale a dire., dove cinque leva presse risultato in un'infusione. Ancora una volta, fare un programma con la leva attiva come sinistra e un programma con la leva attiva come diritto. Fare entrambi programmi 180 min in lunghezza e consegnare il rinforzo e discreti cue complessi nel modo seguente:
      1. Hanno cinque leva attiva presse causa illuminazione simultanea sia la luce di casa e l'impulso di luce sopra la leva attiva.
      2. Ripetere i passaggi 3.1.1.2 attraverso 3.1.1.5.
  2. Formazione di auto-amministrazione
    1. Preparare la soluzione di cocaina al giorno in sterile 0,9% NaCl ad una dose di 0,75 mL di mg/kg/0.1.
      Nota: Per la durata di ogni sessione di auto-somministrazione di 180 min, ratti amministrare circa 4-5 mL di soluzione di cocaina, così per preparare in eccesso, anticipare circa 8 mL/ratto ogni giorno.
    2. Riempire la siringa catetere (10 mL) con almeno 8 mL di soluzione salina o cocaina. Dopo aver verificato che la soluzione di cocaina/saline sta fluendo, inserire la pompa di infusione le siringhe e collegare il tubo di polietilene racchiuso da un guinzaglio di metallo molla all'inizio di ogni sessione di autosomministrazione. Regolare con cura la siringa in ogni pompa di infusione tale che la soluzione è uniformemente e completato distribuiti nelle tubazioni in polietilene prima di fissare per ogni catetere.
    3. Posto ratti in condizionamento standard rispettivi alloggiamenti alloggiati in cabine ventilate, suono-attenuando con ventilatori. Coerentemente porre ogni ratto nella stessa camera operante e tenere la leva attiva sul lato stesso durante tutti gli esperimenti. Controbilanciare assegnazione dei ratti tra sinistra e destra attive le leve.
      Nota: Ogni camera è dotata di un recipiente di pellet fiancheggiato da due leve di risposta retrattile, una luce di stimolo sopra ogni leva di risposta e una luce di casa di fronte le leve. Cocaina/saline siringhe sono collegati a un g 23 ago (archiviato per evitare frugando tubazione) collegato alla tubazione in polietilene racchiusa all'interno di un guinzaglio di primavera di metallo che si connette al catetere di ogni ratto ed è gestito su un liquido girevole. Siringhe sono inseriti in pompe di infusione che si trova adiacente al cubicolo.
    4. Ratti di treno a leva premere per infusioni di cocaina (0.75 mg/kg/0.1 infusione) o infusioni saline (0,1 mL) durante sessioni giornaliere di 180 min utilizzando stabilito metodi28,36,37,51.
      Nota: Questa formazione è eseguita semplicemente posizionando il ratto nella camera dell'operatore e che permette alla stampa di leva; premendo la leva attiva si tradurrà in ricezione della stecca discreta complessa e infusione di cocaina, mentre premendo la leva inattiva non sopporta conseguenze pianificate.
      1. Completamenti di pianificazione sul risultato attivo leva nella consegna di cocaina o infusione salina per un periodo di 6-s accoppiare contemporaneamente con illuminazione della casa luce e stimolo luce sopra la leva attiva e l'attivazione della pompa di infusione (questo è il discreto complesso di cue accoppiato con consegna di cocaina); Pressa a leva inattivo non produrre alcuna conseguenza pianificata. A seguito della consegna di rinforzo (cocaina), la luce di stimolo così come la pompa di infusione è inattivata; la luce di casa rimane accesa per un ulteriore 20-s indicare un periodo di timeout durante il quale la pressa a leva non hanno conseguenze pianificate.
        Nota: Una descrizione di come impostare questa funzione si trova in passaggi 3.1.1.1-3.1.1.4
    5. Al termine della sessione 180 min, togliere ogni ratto dalla sua camera di condizionamento operante e lavare il catetere (punto 2.2). Pulire accuratamente le camere tra le sessioni, pulendo ogni superficie con una soluzione di etanolo 70%.
      Nota: Ratti che ricevono cocaina durante la sessione di auto-amministrazione possono essere difficili da rimuovere dalla camera e hanno maggiori probabili di essere aggressivi. Usa movimenti lenti, attenta a scollegare ogni ratto dal suo cavezza.
    6. Ferroviaria di ratti su una pianificazione FR1 di rinforzo e di progresso per una pianificazione di FR5 dopo il raggiungimento di un criterio di sette infusioni/h con meno del 10% variabilità del numero totale di infusi per ogni sessione per tre giorni consecutivi. Continuare le sessioni di autosomministrazione finché ratti hanno raggiunto un totale di 14 giorni di formazione di auto-somministrazione.
      Nota: Questa è una variante dell'apprendimento operante; alcuni protocolli preferiscono avere ratti rimangono a FR1 tutta la durata dell'esperimento. Cambiamenti nella pianificazione del rapporto fisso da FR1 per FR5 non impatto il numero di infusioni di un animale, auto-gestisce54,55. Tuttavia, l'aumento delle dimensioni del rapporto fisso aiuta a garantire la stabilità di rispondere nel ratto e può aumentare la prominenza del ricompensa56. Inoltre, se si desidera un trattamento durante l'astinenza forzata, ratti dovrebbero essere pseudo-assegnati a caso ai gruppi del trattamento al momento di ottenere la stabilità (meno di variabilità del 10% del numero totale delle infusioni per ogni sessione per un minimo di 3 giorni consecutivi) presso la pianificazione di FR5. Inoltre, ratti salini non diventerà da FR1 FR5, come la salienza di soluzione fisiologica non è sufficiente per raggiungere la stabilità necessaria per progredire da FR1 a FR5.

4. forzata astinenza

  1. Inserire ratti nell'astinenza forzata per 30 giorni; cioè, non forniscono ratti con la possibilità di auto-somministrarsi cocaina o soluzione salina per una durata di 30 giorni. Cosa importante, durante questo periodo non restituiscono ratti agli alloggiamenti operanti (il contesto precedente di autosomministrazione). Tuttavia, è possibile rimuovere ratti da casa gabbie per movimentazione giornaliera e pesatura, come misura di salute generale.
    Nota: La durata dell'astinenza forzata può essere alterata, ma è importante scegliere una durata che è sufficiente per evitare effetti di soffitto e pavimento. Fattori da essere consapevoli di quando si sceglie la durata del periodo di astinenza forzata includono roditore ceppo, età, durata della sessione di auto-somministrazione e durata, droga, durata di infusione e la dose di droga e il sesso dell'animale.

5. cocaina Cue reattività

  1. Codice due programmi software per l'attività di reattività cue a una pianificazione FR1; un programma con la leva di sinistra come la leva attiva e uno con la leva di destra come la leva attiva. Ogni programma per raccogliere leva premendo dati per 60 min di costruire e fornire lo spunto discreto complesso come descritto di seguito.
    1. Ripetere i passaggi 3.1.1.1-3.1.1.4
    2. Per l'uscita dati, raccogliere presentazioni di cue (precedentemente noti come infusi), pressa a leva precedentemente attivi, pressa a leva inattivo e latenza alla prima stampa di leva.
  2. Sessione di Test cocaina Cue reattività
    1. Valutare la reattività di cue il giorno 30 di astinenza forzata in una sessione di test operante 60 min. Scaglionare i tempi di inizio dei ratti per facilitare la rapida decapitazione e raccolto di cervello. D'importanza, per il test di reattività del cue, non posizionare la siringa nella pompa di infusione affinché il suono della pompa infusione serve come un segnale uditivo ma nessun rinforzo di cocaina viene consegnato.
      Nota: Reattività Cue possono essere valutate in giorni diversi da giorno 30 di astinenza forzata, tuttavia il fatto che la velocità di risposta ai segnali di cocaina-accoppiato varia nel tempo34 dovrebbe essere tenuto presente quando si sceglie la data per il test di reattività di cue.
    2. Posizionare ogni ratto nella camera di autosomministrazione in cui è stato addestrato e legare alla sua cannula come durante le sessioni di auto-somministrazione giornaliera. Presse sulla leva che precedentemente consegnato cocaina o salino ora sono solo rafforzate dalla consegna del complesso discreto spunto (i. e., la luce di stimolo e la casa sono illuminate e si avvia la pompa di infusione) su un programma di FR1 (vale a dire, uno complesso discreto spunto è presentato per rotativa leva attiva); contare le presentazioni di cue e pressa a leva precedentemente attivi durante una sessione di 60 minuti e anche registrare il numero di pressa a leva inattivo. Tuttavia, come con l'autosomministrazione, pressa a leva inattivo non produrre alcuna conseguenza pianificata.
      Nota: È un'opzione di controllo aggiuntivo per registrare pressa a leva precedentemente attivi e inattivi in assenza di conseguenze pianificate (cioè., nessun rinforzo complesso discreto spunto).
    3. Al completamento della reattivita ' cue sessione di test, immediatamente eutanasia ratti per catturare gli effetti biochimici di ri-esposizione alla camera di condizionamento operante e discreti cue complessi.

6. raccolta di dati, organizzazione e analisi

  1. Suddividere i dati in tre categorie convenzionali: salute generale, self-administration e reattività di cue.
    1. Monitorare la salute generale (ad es., animale di peso, condizione di pelliccia) in tutto l'esperimento e fornire gli animali con il veterinario cura, se necessario, o rimuovere dallo studio se premendo leva appare interessato di salute.
    2. Raccogliere dati di autosomministrazione durante i 14 giorni di autosomministrazione. Utilizzare un spaiati, due code, test t per determinare le differenze statistiche fra cocaina e gruppi di auto-gestione salina per numero totale di infusioni, pressa a leva attiva, pressa a leva inattivo e latenza alla prima stampa di leva attiva.
      Nota: Self-administration dati devono essere analizzati prima di forzata astinenza se uno vuole studiare l'effetto di un trattamento durante l'astinenza forzata sulla reattività di cue (in modo che gruppi possono avere un numero uguale di medio delle infusioni, così come attivi e inattivi Pressa a leva). Se un disegno di due-a-due è scelto (cocaina ±, trattamento salino ±), un ANOVA a due vie con adeguata analisi post-hoc dovrebbe essere utilizzato per analizzare i dati.
    3. Per dati di reattività di cue raccogliere e analizzare per il numero totale di cue presentazioni, pressa a leva precedentemente attivi, pressa a leva inattivo e latenza alla leva prima premere. Anche analizzare i dati con un spaiati, due code t-test per determinare le differenze tra animali auto-somministrazione di cocaina e quelli auto-somministrazione di soluzione salina.
      Nota: Ancora una volta, se un disegno di due-a-due è scelto (cocaina ±, trattamento salino ±), un ANOVA a due vie con adeguata analisi post-hoc dovrebbe essere utilizzato per analizzare i dati.

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Risultati

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Risultati di un esperimento di autogestione e astinenza cocaina seguita da un test di reattività cue da un studio precedentemente pubblicato57 sono mostrati nella Figura 1. La timeline di studio è raffigurata in Figura 1A.

Ratti individualmente transizione da FR1 per FR5 che soddisfino i criteri. Come procede il condizionamento operante nel grupp...

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Discussione

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L'esposizione al farmaco-accoppiato spunti e cambiamenti fisiologici in risposta a questi spunti16 sono associati con la ricaduta,11,16 e il test di reattività di cue cocaina impiegato sopra eventualmente presenta spunti di cocaina-accoppiato nella assenza di droga; così, comportamento alla ricerca di droga sotto forma di pressa a leva precedentemente attivo serve come misura della vulnerabilità di ricaduta. Il protocollo di reattività cue...

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno conflitti di interesse a divulgare.

Ringraziamenti

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Tutti i test comportamentali è stata eseguita nel Università di Texas Medical Branch (UTMB) roditore In Vivo valutazione (RIVA) nucleo, diretto da Dr. Kelly Dineley e ospitato all'interno del centro per la ricerca di dipendenza, diretto da Dr. Kathryn Cunningham. Il supporto per questo lavoro è venuto dal Peter F. McManus Charitable Trust, National Institute of Environmental Health Sciences Center per tossicologia ambientale all'UTMB (T32ES007254), Istituto per le scienze traslazionale all'UTMB (UL1TR001439), Mitchell centro per le Malattie Neurodegenerative e Center for Addiction Research presso UTMB (DA007287, DA070087 e studio pilota fondi).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Equipment
Tubo del catetere: 0,50 mm ID x 0,94 mm OD x 0,2 mmdi larghezza Fisher Scientific, Hampton, NH, USA11-189-15A1/esperimento
Cue LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-229M2/cannule guida a camera operante
(calibro 22, dimensioni del piedistallo-8 mm, lunghezza di taglio 11 mm, 5 mm sopra il piedistallo)Plastics One, Roanoke, VA, USA8IC313G5UPXC1/ratto
House LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-227M1/camera operante
Pompa di infusione MedAssociates Inc., St. Albans, VT, USAPHM-1001/camera operante
LeversMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-110M2/camera operante
Girelle liquideInstech, Plymouth Meeting, PA, USA375/221/camera operante
Pacchetto MED-PC con pompa di infusione SoftwareMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASOF-735 (software per infusioni SOF-700RA-10 versione 1.04)1
Guinzaglio a molla in metalloPlastics One, Roanoke, VA, USAC313CS/SPC1/camera operante
Ago (23g, 1 in)Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA3051931/ camera operante
Nitex Mesh (6/6 foglio di rete tessuta, 12 "x12", 500 micron di spessore, 38% area aperta)Amazon, Seattle, WA, USACMN-0500-C, B000FMUNE6~ 1 foglio / 100 ratti
Pacchetto di interfaccia PCIMed Associates Inc., St. Albans, VT, USADIG-700P2-R2, MED-SYST-161/16 camere operative
Alimentatore per moduli di interfacciaMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASG-6510D1/16 camere operative
Cubicolo fonoassorbente MedAssociates Inc., St. Albans, VT, USAENV-018V1/camera operante
Siringhe, 10 mL Luer-Lok™ puntaFisher Scientific, Hampton, NH, USA14-827-521 caso/esperimento (1/camera operativa)
Tygon Tubo per flussi: 0,51 mmID x 1,52 mm OD 0,51 mm di larghezza x 152,4 m di lunghezzaFisher Scientific, Hampton, NH, USA14-170-15B1/ experiment
Chemicals
Acepromazine (10mg/mL)Henry Schein (Animal Health), Melville, NY, USA003845~0,5mg/ratto*
Acraweld Repair ResinHenry Schein (Dental), Melville, NY, USA10139591/esperimento
Altalube (unguento oftalmico)Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA60500591/esperimento
CocainaNIDA North Bethesda, MD, USAN/A~350mgs/ratto per l'intero esperimento*; richiede la licenza DEA
Eparina (10.000 unità USP/10 mL)Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USANDC 25021-400-101/esperimento (~21 unità/ratto*)
Jet LiquidHenry Schein (Dental), Melville, NY, USA12564011/esperimento
Ketamina (100mg/mL, 10mL)Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA1049007~15mg/rat*; richiede la licenza DEA
Methohexital Sodium (Brevital®, 500 mg/50 mL)Patterson Dental, Saint Paul, MN, USA043-54611/esperimento; richiede la licenza DEA
Soluzione salina (0,9%, USP)Baxter, Deerfield, IL, USA2B13071 caso/esperimento
Streptochinasi da streptococco β-emolitico (Gruppo C di Lancefield) ≥ 3.000 unità/mgSigma Aldrich, St. Louis, MO, USAS3134-250KU1 fiala/esperimento (~1,5mg/ratto/esperimento*)
Ticarcillina Sale disodicoFisher Scientific, Hampton, NH, USA50-213-695~4 fiale/esperimento o acquista la fiala da 25 g cat.# 50-489-093 (~150mg/ratto/esperimento*)
Xilazina (100mg/mL)Henry Schein (Animal Health), Melville, NY, USA033198~3mg/ratto*
*Si presume che l'età del ratto sia quella descritta nel protocollo, che i ratti si autosomminimino per 14 giorni e che le vampate di calore si verifichino per 21 giorni.

Riferimenti

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