Questo protocollo descrive la stabilizzazione del livello di ossigeno in un piccolo volume di tampone riciclato e aspetti metodologici della plasticità sinaptica attività-dipendente di registrazione in fettine ippocampali acute sommersi.
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Articolo metodologico
Registrazione di plasticità sinaptica in fettine ippocampali Acute mantenuti in un piccolo volume riciclaggio - aspersione- e sistema di immersione-tipo camera
In questo articolo
Sommario
Abstract
Anche se gli esperimenti su fettine di cervello sono stati in uso fin dal 1951, permangono problemi che riducono la probabilità di realizzare un'analisi stabile e di successo della modulazione della trasmissione sinaptica durante l'esecuzione di registrazioni sul campo potenziale o intracellulare. Questo manoscritto descrive aspetti metodologici che potrebbero essere utili nel migliorare le condizioni sperimentali per la manutenzione delle fette del cervello acuto e per la registrazione di potenziali postsinaptici eccitatori di campo in una camera di immersione disponibili in commercio con un'unità di deflusso-carbogenation. Il deflusso-carbogenation aiuta a stabilizzare il livello di ossigeno negli esperimenti che si basano sul riciclaggio di un serbatoio di buffer di piccole dimensioni per migliorare l'efficienza dei costi degli esperimenti di droga. Inoltre, il manoscritto presenta esperimenti rappresentativi che esaminano gli effetti di carbogenation diverse modalità e paradigmi di stimolazione sulla plasticità sinaptica attività-dipendente della trasmissione sinaptica.
Introduzione
Nel 1951, gli esperimenti di fetta di primo-ha segnalato il cervello acuto erano condotti1. Nel 1971, dopo il successo in vitro registrazioni da piriform corteccia2,3 e la scoperta che i neuroni hippocampal sono interconnessi trasversalmente lungo l'asse di septotemporal di ippocampo4, uno del prime registrazioni in vitro dell'attività di un neurone hippocampal era raggiunto5. La somiglianza dei parametri neurofisiologici o neurostructural dei neuroni in condizioni in vivo e in vitro sono ancora oggetto ....
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Protocollo
Gli animali sono stati mantenuti in conformità con le norme stabilite di cura degli animali e le procedure dei istituti di scienza del cervello e stato chiave laboratorio di medici Neurobiologia della Fudan University, Shanghai, Cina.
1. soluzione preparazione
Nota: Vedere la tabella dei materiali.
- Preparare il tampone per affettare (soluzione di Gey modificate): 92 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 30 mM NaHCO3, glucosio di 25 mM, 20 mM HEPES, 3mm Na+-piruvato, 10mm MgSO4e 0,5 mM CaCl2.
- Regolare il pH a 7,6 utilizzando 1 M NaOH senza carbogenatio....
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Risultati
Nella sezione protocollo, abbiamo descritto la preparazione di fettine ippocampali acute dalla parte ventrale e intermedi della formazione hippocampal (Figura 1) del maschio C57BL/6 topi e ratti maschii di Wistar (5-8 settimane). La posizione degli emisferi sulla piattaforma affettatrice aiuta a tenerli stabili ed elimina la necessità di stabilizzazione con agar o dell'agarosi. Il sistema di perfusione stesso è basato su una pompa peristaltica operata su alta.......
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Discussione
Anche se Colombo fetta interfaccia esibiscono più robusto Risposte sinaptiche25,26,27,28, alloggiamenti di sommersione forniscono ulteriore comodità per la registrazione di patch-clamp e fluorescenza di imaging. Così, abbiamo descritto diversi aspetti di field recordings potenziali in fettine ippocampali acute utilizzando una camera di fetta di sommersione commerciale che può essere facilmente .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano che la ricerca è stata condotta in assenza di rapporti commerciali o finanziari che potrebbero essere interpretate come un potenziale conflitto di interessi.
Ringraziamenti
W.W. condotto, analizzato e progettato gli esperimenti e ha scritto il manoscritto. D.X. e C.P. assistito nella preparazione di figura e condotti gli esperimenti. Questo lavoro è stato supportato da NSFC (31320103906) e 111 Project (B16013) a T.B.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagents required | |||
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent, Cina | 10019318 | |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent, Cina | 10016318 | |
| KH2PO4 | Sinopharm Reagente chimico, Cina | 10017618 | |
| MgCl2 &punto medio; 6H2O | Reagente chimico Sinopharm, Cina | 10012818 | |
| CaCl2 | Sinopharm Reagente chimico, Cina | 10005861 | |
| NaHCO3 | Sinopharm Reagente chimico, Cina | 10018960 | |
| Glucosio | Sinopharm Reagente chimico, Cina | 10010518 | |
| NaH2 Reagente chimico PO4 | Sinopharm, Cina | 20040718 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Piruvato di sodio | Sigma | A4043 | |
| MgSO4 | Sinopharm Reagente chimico, Cina | 20025118 | |
| Reagente chimico NaOH | Sinopharm, Cina | 10019718 | |
| Strumenti e materiali per la dissezione | |||
| Decapitatori | Apparecchio Harvard | 55-0012 | per la decapitazione del ratto |
| Forbici per bende | SCHREIBER | 12-4227 | per la decapitazione del topo |
| lama a doppio taglio | Flying Eagle, Cina | 74-C | |
| IRIS Forbici | RWD, Cina | S12003-09 | |
| Bone Rongeurs | RWD, Cina | S22002-14 | |
| Cucchiaio | Hammacher | HSN 152-13 | |
| spatola per cemento dentale | Hammacher | HSN 016-15 | |
| escavatore dentale a doppia estremità | Fabbro chirurgico, USA | BS-415-017 | |
| Microtomo vibrante | Leica, Germania | VT1200S | |
| lama chirurgica | RWD, Cina | S31023-02 | |
| supporto chirurgico | RWD, Cina | S32007-14 | |
| Attrezzature e materiali per elettrofisiologia | |||
| Estrattore verticale per pipette | Narishige, Giappone | PC-10 | |
| Tabella di isolamento dalle vibrazioni | Meirits, Giappone | ADZ-A0806 | |
| registrazione di tipo sommerso camera | Warner Instruments | RC-26GLP | |
| Micromanipolatore a 4 assi | Sutter, USA | MP-285, MP-225 | |
| Filo di platino | World Precision Instruments | PTP406 | |
| Amplifier | Molecular Devices, USA | Multiclamp 700B | |
| Sistema di acquisizione dati | Molecular Devices, USA | Digidata 1440A | |
| Anaysis software | Molecular Devices, USA | Clampex 10.2 | |
| Nikon, Giappone | Sorgente luminosa a LED FN1 | ||
| Lumen Dynamics Group, Canada | Micropipette X-cite 120LED | ||
| Apparecchio | Harvard | GC150TF | a registrazione extracellulare |
| Sutter, USA Pinza | patch | BF150-86 | |
| elettrodo di tungsteno | A-M Systems, USA | 575500 | |
| pompa peristaltica | Longer, Cina | BT00-300T | |
| tubi per pompa peristaltica | ISMATEC, Wertheim, Germania | SC0309 | 1x afflusso, ID: 1,02 mm |
| tubi per pompa peristaltica | ISMATEC, Wertheim, Germania | SC0319 | 2x tubi per deflusso, ID: 2,79 mm |
| CCD camera | PCO, Germania | pco.edge sCMOS | |
| carta per la pulizia delle lenti | Kodak | ||
| 50 mL provetta da centrifuga conica | Thermo scientific | 339652 | |
| Precamera | Warner Instruments | BSC-PC | |
| SF-28 | |||
| Regolatore di temperatura | Warner | Instruments TC-324B |
Riferimenti
- McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
- McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....
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Ristampe e permessi
