Viene presentato un protocollo per la creazione di un modello di topi geneticamente modificato del cancro del colon-retto mediante infezione adenocarica segmentale e la sua sorveglianza mediante colonscopia ad alta risoluzione.
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Articolo metodologico
Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nonostante i vantaggi di una facile applicabilità e di un rapporto costo-efficacia, i modelli del topo tumorale colorato a base di iniezione di cellule tumorali hanno gravi limitazioni e non simulano accuratamente la biologia tumorale e la diffusione delle cellule tumorali. I modelli del mouse geneticamente modificati sono stati introdotti per superare questi limiti; Tuttavia, tali modelli sono tecnicamente impegnativi, specialmente in grandi organi come il colon in cui è desiderato un solo tumore.
Di conseguenza, è stato sviluppato un modello di topo immunocompetente, geneticamente modificato del cancro del colon-retto, che sviluppa tumori altamente uniformi e può essere utilizzato per studi di biologia tumorale, nonché studi terapeutici. Lo sviluppo del tumore è iniziato dall'infezione chirurgica, segmentale del colon distale con virus adeno-cre in topi condizionati condizionatamente mutanti. I tumori possono essere facilmente rilevati e monitorati tramite colonscopia. Qui descriviamo la tecnica chirurgica dell'infezione segmentale di adeno-creIl colon, la sorveglianza del tumore mediante colonscopia ad alta risoluzione e presentare i tumori colorettali risultanti.
Introduzione
Il cancro del colon-retto (CRC) continua ad essere una delle cause principali della morte correlata ai tumori nei paesi occidentali. 1 Mentre la prognosi dei pazienti con malattia precoce è buona, molti tumori vengono diagnosticati in fasi successive in cui, nonostante numerose opzioni di trattamento, la prognosi è limitata. 2 , 3 , 4 , 5
La maggior parte dei modelli di mouse correnti del CRC si basa sull'impianto di cellule tumorali derivate da linee cellulari o tumori del paziente i....
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Protocollo
Gli esperimenti animali qui presentati sono stati riesaminati e approvati in maniera indipendente da un comitato istituzionale e governativo per la cura degli animali e sono stati condotti secondo le linee guida dell'Associazione federale delle scienze animali animali (FELASA). Tutte le misure possibili sono state prese per ridurre al minimo la sofferenza, inclusa l'anestesia e l'analgesia o, se necessario, l'eutanasia precoce.
1. Induzione tumorale locale attraverso l' infezione da Adeno-crea chirurgica
- Preparazione degli animali per la chirurgia
NOTA: Virtualmente qualsiasi....
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Risultati
Se eseguita adeguatamente,> 85% degli animali sviluppa tumori. La mortalità della procedura chirurgica qui presentata è <5%, la mortalità della colonoscopia è praticamente inesistente. Nella maggior parte dei topi è stata individuata una singola lesione; In circa il 30% possono essere rilevati 2 - 3 piccoli adenomi che si fondono di solito in un unico tumore entro 2-3 settimane dall'insorgenza del tumore.
Il fenotipo.......
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Discussione
Mentre sono generalmente facili da generare e mantenere, i modelli classici di CRC basati sull'iniezione della linea cellulare sono artificiali e non sono in grado di ricapitolare completamente la malattia umana. Di conseguenza, i GEMM sono stati sviluppati. Il primo GEMM CRC era il mouse Apc Min , che ospita una mutazione null eterozigote nel gene Apc, quindi imitando la poliposi adenomatica familiare familiare (FAP) della malattia ereditaria umana. Tuttavia, i topi Apc Min sviluppano invariab.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è dedicato alla memoria del professor Moritz Koch.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagenti / materiali di consumo | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Tripsina-EDTA (0,25%, Phenol-Red) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| Soluzione salina normale 0,9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Gene Transfer Vector Core University of Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL provette per centrifuga | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Provette Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL | Sarstedt AG & Co. | 72.695.400 | |
| Piastra di Petri PS 100/15 mm (sterile, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| Siringa da 1 mL (senza volume morto) - Injekt-F SOLO Braun | /neoLab | 194291661 | |
| 30G ago per iniezione | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Analgesia / anestesia | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Ossigeno | ||
| medico | Air Liquide Medical | ||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - unguento oftalmico | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Macchina per anestesia da tavolo x / O2 Flush con vaporizzatore di sevoflurano | Parkland Scientific | V3000PS / PK | |
| strong> Nome< / strong > | < strong> Azienda< / strong > | Numero di catalogo< / strong > | Comments< / strong > |
| Attrezzature chirurgiche | |||
| Tamponi di cellulosa | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Siringa da insulina EMG 1 mL (con cannula da 30 G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Tubo a foro fine (alesaggio: 0,28 mm/ diametro: 0,61 mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Forcipe Micro-Adson | Strumenti per la scienza fine | 11018-12 | |
| Forbice per iride - Strumenti per | scienza fine | 14058-11 | |
| Olsen-Hegar Portaaghi | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| AutoClip | Kit Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura chirurgica) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Morsetto vascolare curvo Micro Serrefine | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Clip a molla Fogarty Edwards | CDSAFE 6 | ||
| Piastra riscaldante 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Rasoio per capelli | Aesculap - Braun | - | |
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Colonscopia | |||
| Fontana a luce fredda XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Cavo a fibra ottica | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM Testa telecamera a tre chip | Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM SLII Unità di controllo telecamera | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Monitor a schermo piatto da 15" EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Telescopio dritto HOPKINS diametro 1,9 mm; lunghezza 10 cm autoclavabile trasmissione della luce in fibra ottica incorporata | Karl Storz | 64301AA | |
| Guaina di protezione e visita | Karl Storz | 61029C |
Riferimenti
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al.
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Ristampe e permessi
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