Un metodo di analisi cellulare per condilo mandibolare murino e morfometrica

Summary

Questo manoscritto presenta metodi per l'analisi morfometrica e cambiamenti cellulari all'interno del condilo mandibolare di roditori.

Abstract

Il giunto temporomandibular (TMJ) ha la capacità di adattarsi agli stimoli esterni, e cambiamenti di carico possa influenzare la posizione dei condili, così come i componenti strutturali e cellulari della cartilagine del condilo mandibola (MCC). Questo manoscritto descrive metodi per l'analisi di questi cambiamenti e un metodo per alterare il caricamento dell'ATM in topi (cioè, alla compressione statica TMJ caricamento). La valutazione strutturale qui illustrata è un approccio semplice morfometriche che utilizza il software Digimizer e viene eseguito nelle radiografie di piccole ossa. Inoltre, l'analisi del cellulare cambia leader alle alterazioni nell'espressione del collagene, rimodellamento osseo, divisione cellulare, e distribuzione di proteoglycan in MCC è descritto. La quantificazione di questi cambiamenti nelle sezioni istologiche - contando i pixel fluorescenti positivi utilizzando software e il mapping di distanza di misurazione di immagine e zona macchiata con Digimizer - è dimostrato anche. I metodi qui illustrati non sono limitati a TMJ murino, ma ha potuto essere usati su altre ossa di piccoli animali da esperimento e in altre regioni di ossificazione endochondral.

Introduction

TMJ è un unico giunto portante che si trova nella regione craniofacial ed è costituito di fibrocartilagine. Il MCC del TMJ è essenziale per la funzione articolare, compreso movimento della mascella senza ostacoli mentre parlando e masticare, ma esso è influenzato dalle malattie degeneranti, compreso l'osteoartrite¹. L'ATM ha la capacità di adattarsi a stimoli esterni e le alterazioni di carico, portando a cambiamenti strutturali e cellulari ai componenti del MCC^2,3,4,5. Le proprietà portanti di MCC possono essere spie....

Protocol

Il Comitato istituzionale cura degli animali del University of Connecticut Health Center ha approvato tutte le procedure di animale.

1. carico compressione statica TMJ: Bocca forzata

Nota: A topi transgenici che harboring reporter fluorescenti per il collagene (Col2a1XCol10a1), gentilmente fornito da Dr. David Rowe (Università del Connecticut), quattro-settimana-vecchi sono stati utilizzati per gli esperimenti descritti in questo manoscritto (n = 8; 4 maschi e 4 femmine). Transgene Col2a1 ciano (blu) è espresso in cellule nella zona prehypertrophic di MCC, mentre il Col10a1 ciliegie (rosse) cellule sono presenti ne....

Results

Statistiche descrittive sono state effettuate per esaminare la distribuzione delle misure morfometriche (lunghezza mandibular, condylar lunghezza, larghezza condylar) e le analisi istologiche. I risultati sono stati confrontati fra il gruppo caricato (cioè, i topi sottoposti a carico di compressione con la molla in titanio beta) e il gruppo di controllo (cioè, i topi di controllo che non hanno ricevuto alcuna procedura di corrispondenza). Differenze statisticamente signi.......

Discussion

Questo manoscritto descritto metodi per la misurazione di morfometrica e analisi cellulare del murini condili mandibolari e mandibole. Le misure morfometriche radiografica è utilizzabile anche per analizzare altre ossa da piccoli animali da esperimento. Inoltre, l'analisi cellulare (cellule quantificazione e mappatura di distanza di cartilagine) non sono limitati al condilo mandibola roditore, ma può essere utilizzato per quantificare le sezioni istologiche di numerosi tessuti.

Modelli di topi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sistema di radiografia MX20	Faxitron X-Ray LLC
Software di immagine Digimizer	MedCalc Software
Shandon Cryomatrix resina per inclusione	Thermo Scientific	6769006
Microscopio manuale Axio Imager Z1	Carl Zeiss	208562
filtro proteico fluorescente giallo - EYFP	Chroma Technology Corp	49003
filtro proteico fluorescente ciano - ECFP	Chroma Technology Corp	49001
filtro proteico fluorescente rosso - Cy5	Chroma Technology Corp	49009
acetato di sodio anidro	Sigma-Aldrich	S2889
sodio L-tartrato bibasico diidrato	Sigma-Aldrich	228729
nitrito di sodio	Substrato Sigma-Aldrich	237213
ELF97	Thermo Fisher Scientific	E6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit	Life Technologies	C10339	include EdU (5-etinil-2'-deossiuridina)
DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindolo, Dicloridrato)	Thermo Scientific	D1306
Sodio fosfato bibasico	Sigma-Aldrich	S3264
Sodio fosfato monobasico	Sigma-Aldrich	71505
Blu di toluidina O	Sigma-Aldrich	T3260
Adobe Photoshop	Adobe Systems Incorporated
Compresse saline tamponate con fosfato (PBS)	Research Products International	P32080-100T
CNA Beta III Archwire Ortho	Organizers, Inc.
GraphPad Prism	Software GraphPad, Inc.