Si tratta di una dieta grassa alta alimentazione protocollo per indurre l'obesità in Drosophila, un modello per la comprensione dei meccanismi molecolari fondamentali implicati in lipotoxicity. Fornisce inoltre un'analisi di triacylglyceride throughput elevato per misurare l'accumulo di grasso in Drosophila e potenzialmente altri modelli (insetti) in varie condizioni dietetiche, ambientali, genetiche o fisiologiche.
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Articolo metodologico
Dieta grassa alta alimentazione e Throughput elevato dosaggio di Triacylglyceride in Drosophila Melanogaster
In questo articolo
Sommario
Abstract
La malattia di cuore è la causa numero uno di morte umana in tutto il mondo. Numerosi studi hanno dimostrato forti connessioni tra l'obesità e malfunzionamento cardiaco negli esseri umani, ma più strumenti e gli sforzi di ricerca sono necessari delucidare meglio i meccanismi coinvolti. Per oltre un secolo, il modello geneticamente altamente trattabile di Drosophila è stato strumentale nella scoperta di geni chiave e vie molecolari che ha dimostrato di essere altamente conservata tra le specie. Molti processi biologici e meccanismi di malattia sono funzionalmente conservati al volo, come sviluppo (ad es., piano di corpo, cuore), cancro e malattie neurodegenerative. Recentemente, lo studio dell'obesità e patologie secondarie, come le malattie cardiache negli organismi di modello, ha svolto un ruolo molto critico nell'identificazione dei regolatori chiave coinvolti nella sindrome metabolica in esseri umani.
Qui, ci proponiamo di utilizzare questo organismo di modello come strumento efficace per indurre l'obesità, cioè, eccessivo accumulo di grasso e sviluppare un efficiente protocollo per monitorare il contenuto di grassi sotto forma di accumulo di tag. Oltre a altamente conservata, ma meno complesso genoma, al volo ha anche una durata breve per sperimentazione rapida, combinata con rapporto costo-efficacia. Questo documento fornisce un protocollo dettagliato per l'alimentazione di alta dieta di grassi (HFD) in Drosophila per indurre l'obesità e un'analisi di triacylglyceride (TAG) di throughput elevato per la misurazione l'associato aumento nel contenuto di grassi, con l'obiettivo di essere altamente riproducibile e efficiente per lo screening genetico o chimico su larga scala. Questi protocolli offrono nuove opportunità per efficientemente indagare meccanismi regolatori coinvolti nell'obesità, nonché fornire una piattaforma standard per la ricerca di scoperta di farmaci per il test rapido dell'effetto di farmaci candidati sullo sviluppo o prevenzione dell'obesità, diabete e malattie metaboliche correlate.
Introduzione
Siamo in un tempo dove l'obesità e suoi associati oneri economici, è un problema mondiale1. Due su ogni tre americani sono in sovrappeso o obesi con patologie relative al cuore, la causa primaria di morte entro la popolazione adulta2. Nuovi metodi efficienti sono necessari studiare adeguatamente i componenti genetici e molecolari implicati nella regolazione della sindrome metabolica utilizzando organismi modello. Per questo motivo, abbiamo scelto il moscerino della frutta Drosophila modello perché condivide i più elementari processi biologici con i mammiferi, compreso gli esseri umani e topi3
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Protocollo
1. HFD alimentazione protocollo
tabella 1. Ricetta di cibo volare.
La tabella seguente riassume i diversi ingredienti utilizzati per preparare il nostro controllo cibo. Una volta effettuata, 10 mL del cibo è versato in fiale, raffreddato e conservato a 4 ° C per la conservazione a lungo termine.
- Preparazione HFD
- per fare 1 kg di cibo grasso alto, pesare 700 g di alimento normale pre-fatta (cfr. tabella 1) e 300 g di olio di cocco in due contenitori separati....
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Risultati
In d. melanogaster, come è il caso con altre specie, non c'è dimorfismo sessuale tra maschi e femmine22. È noto che le femmine sono più grandi, con più grasso in loro addomi, di maschi22. Per testare l'efficacia del nostro protocollo, abbiamo eseguito saggi di TAG per determinare le differenze di contenuto TAG tra maschi e femmine di laboratorio standard wildtype (w1118) Vola. I dati mostrano che le femmine hanno.......
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Discussione
Induzione di obesità nei topi può richiedere mesi19,20. In mosche, questo HFD alimentazione protocollo consente per l'induzione dell'accumulo di grasso in eccesso in una questione di giorni o meno, causando aumenti in accumulo di grasso solo dopo 18 ore (Vedi Figura 2). HFD alimentando con il protocollo descritto aumenta il glucosio contenuto 12 e diminuisce Bmm lipasi e PGC-1 espressione
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Erika Taylor per l'editing di questo manoscritto. Questo lavoro è stato finanziato da sovvenzioni dal National Institutes of Health (P01 HL098053, P01 AG033561 e HL054732 R01) a R.B., un supplemento di ricerca post-dottorato (R01 HL085481) e comunione (AAUW) a S.B.D. e dall'associazione americana del cuore di S.B.D. e r.t.b.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Talboys Dispenser contagocce/perline | Talboys | #: 930150 | |
| Talboys Omogeneizzatore ad alta produttività | Talboys | #: 930145 | |
| sfere di macinazione, acciaio inossidabile | OPS Diagnostics, LLC | # GBSS 156-5000-01 | 5000 sfere |
| Masterblock 96 pozzetti profondi Micropiastre | Greiner Bio-One | # T-3058-1 | cassa da 80 piastre |
| Greiner 96 pozzetti micropiastre fondo piatto | Sigma Aldrich | # M4436 | 40 piastre |
| Greiner CapMat per sigillare piastre multipozzetto | Sigma Aldrich | # C3606 | 50 piastre di tenuta |
| Serbatoi di reagenti& nbsp; | Thomas Scientific | # 1192T71 | 12/PK |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661040 | Thermo Scientific | # 4661040 | 1-10 ul multipipetta |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661070 | Thermo Scientific | # 4661070 | 30-300ul multipipetta |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661020 | Thermo Scientific | #4661020 | 10-100ul |
| multicanale punte | Denville Scientific Inc | # P3131-S | per pipetta da 10 uL |
| Puntali multicanale | Denville Scientific Inc | # P3133-S | per pipetta da 200 uL |
| Puntali multicanale | Denville Scientific Inc | #P1125 | per pipetta da 100 uL |
| Pincipe | Roboz Surgical | # 5 Dumonts | Pinza super fine |
| Mettler Toledo Excellence XS Bilancia analitica Mfr# XS64 | Cole-Parmer esperti scientifici | # EW-11333-00 | |
| Metler Toledo Excellence XS Bilancia a caricamento dall'alto | Cole-Parmer esperti scientifici | # EW-11333-49 | |
| Centrifuga per micropiastre a 96 pozzetti | Hettich Zentrifugen | # Rotina 420R | |
| Micropiastra Lettore | Dispositivi molecolari | # SpectraMax 190 | |
| Lab-Line Bench Top Orbit Environ Shaker Incubatore | Biostad | # 3527 | |
| Reagente Infinity Trigliceridi | Thermo Scientific | # TR22421 | |
| Trigliceridi Standard | Stanbio | #2103 - 030 | |
| Avvio rapido Bradford Protein Assay | Bio-RAD | # 500-0205 | 1x reagente colorante |
| Olio di cocco | Nutiva | # 692752200014 | 15 0z barattolo |
| PBS 10X | Thermo Scientific | # AM9625 | 500 ml |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | # 9002-93-1 | |
| Foglio permeabile ai gas | Macherey-Nagel | # 740675 | 50 pezzi |
| filtro Carta | VWR | # 28317-241 | Confezione da 100 |
| fiale | di DrosophilaGenesee Scientific | Cat #: 32-116SB | |
| Avvio rapido Siero bovino Albumina Standard | Bio-Rad | # 5000206 | |
| FlyNap Anestetico | Carolina | # 173025 | 100 ml |
| Kimwipes Low-Lint | Uline | # S-8115 | 1 velo, 4,4 x 8,4" |
Riferimenti
- Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
- Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from:
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Ristampe e permessi
