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Dichiarazione etica: Il Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali della Mississippi State University ha approvato tutte le tecniche di cattura, manipolazione e marcatura secondo i protocolli 04-068, 07-036, 10-033 e 13-034.
1. Stabilisci Siti di Cattura, Immobilizza e Trasporta Cervi selvatici dalla coda bianca
- Identifica le proprietà pubbliche e private iscritte al programma di assistenza alla gestione dei cervi22 e stabilisci siti di cattura ≥29 in tre regioni di origine del Mississippi, USA.
- Identificare diversi luoghi di cattura all'interno di ciascuna regione di origine per garantire che venga catturata la gamma di variazioni genetiche presenti nella popolazione regionale.
- Nota: qui, le regioni di origine includevano il Delta, che comprende quasi il 17% della superficie totale del Mississippi, USA, ed è considerato una regione del suolo di alta qualità con l'agricoltura come uso primario del suolo23,24. Tutti gli animali oggetto di studio sono stati catturati da questa regione all'interno della distribuzione di O. v. virginianus25. Altre regioni includevano la regione del Thin Loess (Thin Loess superiore e inferiore combinati), che comprende quasi il 14% della superficie totale del Mississippi, negli Stati Uniti ed è considerata una regione del suolo di media qualità. L'agricoltura è anche un uso primario del suolo nella regione del Thin Loess, anche se non così diffuso come nel Delta23,24. Tutti gli animali oggetto dello studio sono stati catturati da questa regione all'interno della distribuzione di O. v. virginianus21. Infine, la regione del suolo della Lower Coastal Plain (LCP) comprende quasi il 22% del Mississippi ed è classificata come regione del suolo di bassa qualità. Gli usi primari del suolo nel LCP sono la produzione di legname di pino e il pascolo del bestiame23,24. La LCP si sovrappone anche alla distribuzione geografica di O. v. osceola; quattro delle sei popolazioni di origine si trovavano entro 21 km da questa distribuzione25. Questa sottospecie è stata descritta come più piccola di O. v. virginianus26.

Figura 1: Popolazioni di origine. Regioni fisiografiche in cui sono state catturate madri e cerbiatti gravidi nel Mississippi, USA. Questa cifra è stata modificata da reference31. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
- Selezionare potenziali siti di cattura che soddisfino i seguenti criteri: caratteristiche dell'habitat che favoriscono il movimento dei cervi, vicinanza alle strade per l'accesso e distribuzione in tutta l'area di studio.
NOTA: I siti di cattura devono consentire l'occultamento del tecnico di cattura.
- Siti di esche con circa 10 kg di mais sgusciato per invogliare i cervi a visitarlo e valutarne l'uso in base al consumo di esche e cervi fotografati da telecamere sensibili al movimento. Trasferisciti in siti alternativi se i cervi non frequentano i siti con esche entro 5-7 giorni.
- Durante gli eventi di cattura, siediti in un "supporto" nascosto.
- Posizionare il supporto a circa 20 m sottovento rispetto al mucchio di esche, tenendo in considerazione la direzione del vento prevalente in modo che i cervi che si avvicinano all'esca siano meno in grado di annusare il tecnico di cattura.
NOTA: I supporti rialzati sono fortemente preferiti e sono necessarie imbracature di sicurezza. Esistono diverse varianti di stand con una varietà di fonti commerciali e l'uso varia in base alle preferenze personali. Ad esempio, un supporto di blocco includerebbe posti a sedere con una scala per l'accesso fissata a un albero con cinghie. I cavalletti da arrampicata portatili possono essere trasportati dal tecnico di cattura e consentono una maggiore mobilità in quanto il tecnico può scegliere un albero specifico una volta arrivato al sito di cattura. I cavalletti da arrampicata portatili sono limitati all'uso su alberi dritti senza rami fino all'altezza scelta.
- Utilizzare una pistola a dardi accoppiata con un dardo radiotelemetrico da 3 cc per erogare una miscela di teletamina HCl (4,4 mg/kg) e xilazina HCl (2,2 mg/kg).
- Pianifica gli sforzi di cattura in modo che coincidano con il tipico ciclo di attività crepuscolare di deer27. Inizia ogni tentativo di cattura 2-3 ore prima del tramonto.
- Continua a catturare gli eventi per 2-3 ore dopo il tramonto utilizzando occhiali per la visione notturna e un laser a punto rosso per il posizionamento dei colpi se i cervi non vengono catturati durante le ore diurne.
- Spara ai cervi quando sono di lato e fermi.
NOTA: Il quarto posteriore del cervo è il bersaglio perché ha un tessuto muscolare significativo e si trova lontano dal cuore e dai polmoni.
- Attendere circa 15 minuti affinché gli animali bersaglio guizzanti (cerbiatti di sei mesi di entrambi i sessi o femmine adulte gravide) diventino completamente immobilizzati prima di localizzarli con l'apparecchiatura di radiotelemetria direzionale.
- Verificare che le persone siano sedate controllando i riflessi oculari (battito delle palpebre). Quindi applicare un unguento oftalmico sugli occhi e bendare il cervo per ridurre lo stress.
NOTA: La perdita di termoregolazione è una conseguenza dell'immobilizzazione.
- Utilizzare un termometro rettale per valutare la temperatura corporea dopo il recupero. Cervo caldo con coperte riscaldate se la temperatura dell'animale è inferiore a 37,7 °C. Cervo fresco con impacchi di ghiaccio se la temperatura dell'animale è superiore a 40,0 °C.
- Posiziona i cervi in posizione sternale su una barella in stile militare e trasporta i cervi dal luogo di cattura a un rimorchio chiuso.
- Dopo aver posizionato il cervo nel rimorchio, invertire gli effetti della xilazina HCl con 0,125 mg/kg di yohimbina HCl28.
- Trasporta tutti i cervi catturati alla struttura in cattività desiderata (ad esempio, Mississippi State University Rusty Dawkins Memorial Deer Unit; MSU Deer Unit) e tenerli separati per regione di origine.
2. Strutture in cattività e pratiche generali di allevamento degli animali da ricerca
NOTA: L'unità MSU Deer è suddivisa in cinque recinti da 0,4 a 0,8 ettari.
- Copri ogni lato di ogni penna con un panno ombreggiante per fungere da barriera visiva e fisica tra le penne. Il telo ombreggiante aiuta a ridurre le lesioni e fornisce ombra durante i mesi estivi.
- Posiziona 1-2 tende a scatola rialzate a un'estremità di ciascun recinto per facilitare gli eventi di guizzo durante la raccolta dei dati.
- Posiziona due mangiatoie a trogolo alle estremità separate di ciascun recinto per ridurre la competizione per il cibo tra i cervi. Fornire anche un abbeveratoio in ogni recinto.
- Fornire ai cervi una dieta di alta qualità (20% di pellet di cervo di proteine grezze) ad libitum.
NOTA: Qui, ulteriori foraggi disponibili all'interno dei recinti includevano (Trifolium spp) e festuca (Festuca spp) insieme a erbe e forbs volontari.
- Se presente, mantenere i foraggi disponibili all'interno dei recinti utilizzando una miscela di erbicidi per controllare le erbacce a foglia larga e le graminacee utilizzando i tassi di miscela riportati sulle rispettive etichette.
NOTA: Probabilmente sarà necessario l'utilizzo di strutture fuori dal campus per ospitare maschi di ≥5,5 mesi. Queste strutture consistevano in due recinti da 0,7 ettari su ciascuna delle tre proprietà con pratiche di allevamento simili all'unità cervi MSU.

Figura 2: Posizioni delle strutture vincolate. Area di studio in cui si trovavano le strutture satellitari e l'unità cervi della Mississippi State University (MSU). Le aree ombreggiate indicano le contee di Oktibbeha (A), Noxubee (B), Attala (C), Scott (D) e Copiah (E), Mississippi, USA. Questa cifra è stata modificata da reference34. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
3. Controllo dei parassiti e delle malattie
- Monitorare gli animali da ricerca per i parassiti nematodi (Strongyloides spp) utilizzando il galleggiamento fecale con parassiti misurati come uova per grammo (EPG).
- Se presenti a livelli elevati, fornire il controllo dei parassiti somministrando un vermifugo pellettato (principio attivo fenbendazolo) a una velocità di circa 0,77 kg di vermifugo pellettato per 22,7 kg di mangime durante il mese di maggio.
- Se i livelli di parassiti rimangono elevati dopo il trattamento iniziale, utilizzare un trattamento di ivermectina pour-on (5 mg/mL)29, miscelato a una velocità di 2 mL/0,45 kg e somministrare agli animali a una velocità di 0,45 kg di mangime trattato per 45,4 kg di massa animale.
NOTA: La malattia emorragica epizootica è talvolta una malattia virale letale diffusa da un moscerino pungente (Culicoides spp) durante i mesi estivi e autunnali. Se presente, trattare la struttura di ricerca con insetticida (insetticida a bassissimo volume al 5%) 2-3 volte a settimana dal 1° luglio al 1° ottobre per ridurre la prevalenza dei vettori tra gli animali da ricerca. Spruzzare questo insetticida all'interno di ogni recinto e intorno al perimetro della struttura circa 90 minuti prima del tramonto ufficiale tramite nebulizzatore. I metodi preferiti per il controllo di parassiti e malattie sono unici per ogni struttura in cattività. I veterinari devono essere consultati durante qualsiasi ricerca sulla fauna selvatica in cattività per garantire la salute e la sicurezza degli animali.
4. Raccolta dati

Figura 3: Raccolta dati dei cerbiatti appena nati. Misurazione della lunghezza del piede posteriore di un cerbiatto appena nato presso la Mississippi State University Rusty Dawkins Memorial Deer Unit nella contea di Oktibbeha, Mississippi, USA. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
- Cerca quotidianamente i cerbiatti durante la stagione del parto nella struttura in cattività.
- Contrassegna in modo univoco i cerbiatti appena nati con marchi auricolari di plastica medi utilizzando un marcatore auricolare con antibiotico applicato all'estremità maschile del tag per prevenire potenziali infezioni. Posiziona il marchio auricolare al centro dell'orecchio del cerbiatto.
- Misura la massa corporea (più vicino a 0,01 kg) con una bilancia digitale da appendere e misura la lunghezza del piede posteriore e la lunghezza totale del corpo (più vicino ai mm).
- Raccogli campioni di capelli e inviali a un sito remoto per l'assegnazione della parentela (vedi la Tabella dei Materiali).
NOTA: L'assegnazione della parentela è stata effettuata utilizzando il DNA basato su un database di linguaggio di interrogazione proprietario, non statistico e strutturato in modo personalizzato. Nel confronto degli alleli a coppie, il sito di assegnazione della parentela remota ha assegnato la parentela quando hanno escluso tutti i tori tranne uno e una madre sulla base di un allele condiviso da ciascun genitore in tutti i loci testati (B. G. Cassidy, comunicazione personale). Questo metodo di assegnazione della parentela è stato utilizzato anche in precedenti ricerche condotte su cervi dalla coda bianca in cattività30,31.
- Somministrare 2 cc di tossoide Clostridium perfringens di tipo C e D e di antitossina di Clostridium perfringens di tipo C e D per via sottocutanea e somministrare 0,3 cc/kg di ivermectina in glicole propilenico (Mississippi State University Veterinarian School, Mississippi, USA) per via orale a ciascun cerbiatto.
- Immobilizzare chimicamente i maschi adulti (≥1,5 anni) nei mesi di ottobre e novembre per la raccolta dei dati.
- Immobilizzare gli adulti recintati utilizzando la stessa combinazione di teletamina HCl e xilazina HCl utilizzata per la cattura di animali selvatici (passaggio 1.4).
- Durante gli eventi di sedazione, accompagna il tecnico che sfreccerà fino all'estremità del recinto dove si trovano le tende rialzate. Avere un solo tecnico in ciascuna delle due tende.
- Chiedi alla persona che ha accompagnato il tecnico fino al cieco di tornare all'estremità opposta della penna.
NOTA: I cervi si allontanano da questi tecnici e si posizionano di fronte alle tende dove i tecnici sono in posizione per sparare in modo etico a ciascun cervo.
- Spara ai cervi quando sono di lato e fermi (sezione 1.4).
- Attendere circa 15 minuti affinché gli animali guizzanti si immobilizzino completamente prima di avvicinarsi.
- Verificare che le persone siano sedate controllando i riflessi oculari (battito delle palpebre). Applicare un unguento oftalmico sugli occhi e bendare i cervi per ridurre lo stress.
- Dopo che i dardi hanno sedato con successo un singolo cervo, monitora i tassi vitali del cervo.
- Utilizzare un termometro rettale per valutare la temperatura corporea dopo il recupero. Cervo caldo con coperte riscaldate se la temperatura dell'animale è inferiore a 37,7 °C. Cervo fresco con impacchi di ghiaccio se la temperatura dell'animale è superiore a 40,0 °C.
- Carica il cervo su una barella in stile militare e trasportalo tramite un veicolo utilitario in un'area di raccolta dati predeterminata.
- Una volta trasportato, registrare le stesse misure morfometriche registrate alla nascita (passaggio 4.1).
- Misura la massa corporea (più vicino a 0,01 kg) con una bilancia digitale da appendere e misura la lunghezza del piede posteriore e la lunghezza totale del corpo (più vicino a mm).
NOTA: I singoli cervi reagiscono in modo diverso alla combinazione di farmaci utilizzati durante gli eventi di sedazione, quindi somministrare circa 0,1-0,3 cc della miscela di teletamina HCl e xilazina HCl (a seconda della massa corporea di un singolo cervo) se un individuo esce dalla sedazione prima che la raccolta dei dati sia completata.
- Somministrare quantità adeguate di antibiotico, ivermectina, un vaccino contro la clostidria e un vaccino contro la leptospirosi a tutti i cervi dopo che sono stati trasportati nell'area di raccolta dei dati (vedere sezioni 1 e 3).
- Prendi tre misure di corna da maschi adulti usando un metro a nastro mentre l'animale è sedato.
- Misurare la diffusione interna (la distanza massima tra le travi principali), la circonferenza basale (diametro minimo situato tra la bava e il dente G1) e la lunghezza della trave principale (distanza dalla base delle corna alla punta della trave principale) delle corna prima della rimozione delle corna.
- Rimuovere le corna a circa 3 cm sopra la bava usando un seghetto alternativo. Non rimuovere le corna di dimensioni inferiori a 3 cm.

Figura 4: Raccolta dati di maschi adulti. Rimozione delle corna tramite sega alternativa da un cervo maschio adulto dalla coda bianca in cattività. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
- Dopo che tutti i dati sono stati raccolti dall'individuo sedato, posizionare il cervo nel recinto appropriato e somministrare 0,125 mg/kg di yohimbina HCl28 o 4,0 mg/kg di tolazolina HCl32 per invertire gli effetti della xilazina HCl. Monitorare gli individui per assicurarsi che rimangano in posizione sternale fino a quando non escono dalla sedazione e siano completamente vigili.
NOTA: Se si verificano complicazioni e gli animali devono essere soppressi, l'eutanasia mediante lussazione cerebrale tramite storditore e la recisione della vena giugulare sono mezzi etici per eliminare l'animale.
- Porta le corna in un'area designata per finire di misurare le dimensioni delle corna.
- Misurare ogni singolo dente che sporge dalla trave principale (G1, G2, G3, ecc.) e altri punti anomali con l'aiuto di wire.
NOTA: I punti che non hanno una controparte corrispondente sulla trave principale opposta o che non sono coerenti con la definizione di un tipico set di corna sono definiti dal Boone and Crockett Club33.
- Avvolgere il filo attorno al punto in cui il dente interseca la trave principale e contrassegnare quel punto come riferimento.
- Misurare da questo punto di riferimento fino alla punta del dente e ripetere per ogni dente.
- Raccogli le misurazioni della circonferenza rimanente identificando il punto più piccolo tra i denti G1 e G2 (circonferenza H2), i denti G2 e G3 (circonferenza H3) e i denti G3 e G4 se presenti (circonferenza H4).
- Se il dente G4 non è presente, misurare la distanza tra il punto medio del dente G3 e l'estremità della trave principale e misurare la circonferenza H4 nel punto intermedio.
- Misurare meno di quattro circonferenze quando le corna contengono meno di tre denti.
NOTA: Ad esempio, una trave principale con due punti tipici include solo tre misurazioni della circonferenza. Gli individui possono utilizzare altre linee guida (Safari Club International) per calcolare le dimensioni delle corna; Tuttavia, è necessario utilizzare metodi coerenti per ogni animale per un confronto valido.
- Dopo aver effettuato tutte le misurazioni, calcola un punteggio di corna simile al punteggio lordo atipico di Boone e Crockett33.
- Pesare le corna con l'approssimazione di 0,1 g utilizzando una bilancia digitale scientifica e assegnare una massa critica minima delle corna di 1 g per gli animali del primo anno con corna più corte di 3 cm.
- Immobilizzare chimicamente i giovani recintati a circa 5,5 mesi di età utilizzando gli stessi metodi per gli adulti (sezione 4.2) e contrassegnare i giovani con un grande marchio auricolare di plastica (passaggio 4.1.1).
- Utilizzare gli stessi tassi di miscela di farmaci per immobilizzare gli adulti in cattività utilizzati per immobilizzare i cervi selvatici (sezione 1).
- Raccogliere le stesse misurazioni raccolte alla nascita (passaggio 4.1.2) e somministrare gli stessi profilattici degli adulti (paragrafo 4.2).
NOTA: Dopo aver raccolto tutti i dati, trasportare ogni giovane maschio alla struttura satellite assegnata in modo casuale tramite rimorchio.
5. Produrre prole di prima e seconda generazione
- Classificare i cerbiatti selvatici di sei mesi e la prole nata nella struttura in cattività da madri catturate in natura come individui di prima generazione.
- Durante la stagione riproduttiva, posiziona due maschi con 7-16 femmine per un rapporto medio tra i sessi riproduttori di un maschio per otto femmine.
NOTA: Seleziona i maschi riproduttori da strutture satellite in base all'aspetto fisico, perché i maschi più sani (corna più grandi e dimensioni corporee) hanno maggiori probabilità di servire le femmine per l'intera stagione riproduttiva senza subire lesioni a causa della natura aggressiva dei maschi durante la stagione riproduttiva.
- Consenti ai cervi di riprodursi solo con altri individui della stessa regione di origine (ad esempio, i maschi Delta allevano femmine Delta, i maschi Thin Loess allevano femmine Thin Loess e i maschi LCP allevano maschi LCP).
- Classifica i cervi concepiti dai genitori di prima generazione come prole di seconda generazione. Allevare questi individui in cattività fin dalla nascita e nutrire con la stessa dieta di alta qualità dei loro genitori><.
NOTA: Le femmine possono produrre prole per più anni, ma in genere con tori diversi ogni anno. Raccogli gli stessi dati sulla prole di seconda generazione raccolti sugli individui di prima generazione e catturati in natura.