Valutazione della funzione microvascolare di tessuto adiposo umano mediante videomicroscopia

Summary

Videomicroscopia sistemi sono utilizzati per esaminare le proprietà funzionali delle arteriole del tessuto adiposo isolato in risposta a stimoli fisiologici e farmacologici. Questa tecnica può essere utilizzata per esaminare microvascolari fenotipi in domini differenti del tessuto adiposo in esseri umani obesi.

Abstract

Mentre l'obesità è strettamente legata allo sviluppo della malattia cardiovascolare e metabolica, piccolo è conosciuto circa i meccanismi che regolano questi processi. È supposto che pro--atherogenic mediatori liberati dai tessuti grassi, particolarmente in associazione con adiposità centrale/viscerale possono promuovere cambiamenti vascolari patogeni a livello locale e sistemica, e la nozione che la malattia cardiovascolare può essere il conseguenza di disfunzione del tessuto adiposo in continua evoluzione. Qui, descriviamo un metodo unico di videomicroscopia che coinvolge l'analisi delle risposte vasodilatatore e vasocostrittore di intatti piccole arteriole umani rimossi dal deposito adiposo dei soggetti umani viventi. Videomicroscopia è utilizzato per esaminare le proprietà funzionali dei microvasi isolati in risposta a stimoli fisiologici o farmacologici, utilizzando un sistema sotto pressione che imita le condizioni in vivo . La tecnica è un approccio utile per acquisire una comprensione della patofisiologia e meccanismi molecolari che contribuiscono alla disfunzione vascolare localmente all'interno il milieu di tessuto adiposo. Inoltre, le anomalie nel microvasculature tessuto adiposo inoltre sono state collegate con malattie sistemiche. Abbiamo applicato questa tecnica per esaminare depot specifiche risposte vascolari in soggetti obesi. Abbiamo valutato la vasodilatazione endotelio-dipendente sia aumentato flusso e acetilcolina in arteriole adipose (50-350 µm di diametro interno, 2-3 mm di lunghezza) isolato da due diversi depositi adiposi durante chirurgia bariatrica dallo stesso individuo. Abbiamo dimostrato che arteriole dal grasso viscerale esibiscono alterata vasodilatazione endotelio-dipendente rispetto ai vasi isolati dal deposito sottocutaneo. I risultati suggeriscono che il microambiente viscerale è associato con disfunzione endoteliale vascolare che può essere rilevante per l'osservazione clinica che collega adiposità viscerale aumentata ai meccanismi di malattia sistemica. La tecnica di videomicroscopia può essere utilizzata per esaminare i fenotipi vascolari da diversi depositi di grasso, nonché confrontare i risultati tra gli individui con diversi gradi di obesità e disfunzione metabolica. Il metodo è utilizzabile anche per esaminare le risposte vascolari longitudinalmente in risposta a interventi clinici.

Introduction

Videomicroscopia è una tecnica utile utilizzata per esaminare la funzione vasomotore delle piccole arteriole rimosso da soggetti umani viventi ex vivo. Il nostro laboratorio è concentrata sulla dissezione fuori dei microvasi piccoli compartimenti differenti del tessuto adiposo di caratterizzare gli effetti di vari microambienti adipose il microvasculature. Dei principali vantaggi di questa tecnica è che i vasi sanguigni rimossi dal corpo umano rimangono funzionali e può essere esaminati prontamente a pochi minuti da ore che seguono la biopsia. Condizioni fisiologiche sono ha imitate e costante pressione transmurale mantenuta nello spazio intraluminal tramite ....

Protocol

il protocollo e gli esempi descritti qui sono stati approvati dalla Boston University School di medicina Institutional Review Board (IRB, protocollo #H-25644) e sono stati condotti in conformità con la dichiarazione di Helsinki. Tutti gli oggetti hanno fornito consenso informato scritto prima della partecipazione.

1. preparazione di soluzioni e Micro-vetro cannule

1. preparare la soluzione salina acida 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic (HEPES). Per 1 L, sciogliere 8,059 g NaCl, g 0,298 KCl, g. 0,296 MgSO ₄ • 7 H ₂ O, 0,235 g CaCl ₂ • 2 H ₂ O, 0,16 g KH ₂ P....

Results

Il nostro laboratorio ha usato videomicroscopia per esaminare endotelio-dipendente e - indipendente vasodilatazione, così come vasocontractile funzione del tessuto adiposo arteriole isolato dal grasso sottocutaneo e viscerale degli esseri umani obesi. La caratteristica struttura sperimentale viene visualizzata in Figura 1A. Tessuto adiposo arteriole sono sospesi tra due pipette capillari in vetro e saldamente fissata con punti di sutura all'interno della came.......

Discussion

La dissezione e l'isolamento delle arteriole adipose dai tessuti circostanti può essere un processo lungo e laborioso con grande attenzione ai dettagli e protocollo tecnico. La procedura di microdissection richiede competenze meticolose e dissezione specializzati utensili per prevenire danni al muscolo liscio o endoteliale delle cellule strati del microvasculature. Anche piccole punture accidentali nella parete arteriolare possono prevenire intraluminal pressurizzazione e risultati in un esperimento riuscito. Inoltre, in.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome chimico
Acetilcolina	Sigma Aldrich	A6625
Cloruro di calcio (CaCl2)Sigma	Aldrich	223506
D-(+)-glucosio	Sigma Aldrich	G5767
Endotelina-1	Sigma Aldrich	E7764
Glicole etilenico-bis(2-amminoetiletere)-N,N,N',N'-acido tetraacetico (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Acido etilendiammina tetraacetico (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma Aldrich	H3784
Nw-nito-L-arginina estere metilico cloridrato	Sigma Aldrich	N5751
Solfato di magnesio (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
Cloruro di potassio (KCL)	Sigma Aldrich	P3911
Fosfato di potassio (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Papaverine	Sigma Aldrich	P3510
Bicarbonato di sodio (NaHCO 3 )	Sigma Aldrich	S6014
Cloruro di sodio (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Fosfato di sodio monobasico monoidrato (NaH2Po4)	Sigma Aldrich	S9638
Name	Company	Numero di catalogo	Comments
Equipment
Forceps	Strumenti per le scienze fini	15000-08
Microscopio invertito	Zeiss Achromat
Tubi da laboratorio	Euro-Pharm	250100306F999
Estrattore per aghi/pippette	David kopf instruments	720
Sutura oftalmica in nylon monofilamento	Specialità chirurgiche	A7756N
Forbici	Strumenti Finescience	150000-08
Camera del vaso	DMT	VAS v.2.1