Anormale funzione sensoriale è alla base di dolore viscerale e altri sintomi delle malattie intestinali infiammatorie e funzionali. Un protocollo per la registrazione elettrofisiologica dei nervi afferenti colici in una preparazione di colorectum del ratto ex vivo è presentato qui.
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Articolo metodologico
In Vitro Caratterizzazione delle proprietà elettrofisiologiche di fibre afferenti coliche in ratti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Disfunzione dei nervi sensoriali colici è stata implicata in patofisiologia di parecchi termini comuni, compreso il diabete e le malattie intestinali infiammatorie e funzionali. Qui, descriviamo un protocollo per la caratterizzazione in vitro delle proprietà elettrofisiologiche delle afferenze colica in ratti. Colorectum, con il ganglio pelvico intatto (PG) collegato, viene rimosso dal ratto; superfusi con carbogenated soluzione di Krebs nella camera di registrazione; e cannulate alle estremità orale e anale per consentire per distensione. Un fascio di nervi bene che emana dal PG viene identificato, e l'attività nervose afferenti multiunit viene registrata utilizzando un elettrodo di aspirazione. Distensione del segmento colico suscita aumenti graduali in scarico multiunit. Un'analisi delle componenti principali è condotto per distinguere la bassa soglia, l'alto-soglia e le fibre afferenti del largo-gamma dinamica. Sensibilità chimica delle afferenze colica può essere studiata attraverso la vasca o intraluminal somministrazione di sostanze da testare. Questo protocollo può essere modificato per applicazione ad altre specie, come topi e porcellini d'India e di studiare le differenze nelle proprietà elettrofisiologiche delle afferenze toracolombare/hypogastric e lombosacrale/pelvica del colon discendente in normale e condizioni patologiche.
Introduzione
Tratto gastrointestinale (GIT) è riccamente innervato con estrinseci nervi afferenti che trasmettono segnali sensoriali dall'intestino al sistema nervoso centrale e che contribuiscono all'interazione di intestino-cervello. Alterata eccitabilità di queste afferenze estrinseca, come pure alterata elaborazione centrale degli input afferente, è alla base di dolore viscerale e altri sintomi di GI condizioni, tra cui funzionali e infiammatorie intestinali malattie1. Informazioni sensoriali da colorectum viene trasmesso principalmente attraverso il toracolombare/hypogastric e i nervi lombosacrale/pelvici (PN)2. C'è stato un cre....
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Protocollo
il protocollo sperimentale riportato qui è stato approvato dall'animale etico Comitato di Shanghai Jiaotong University School of Medicine (n # SYXK2013-0050). la dissezione del colorectum con ganglio intatto e nervo tronco richiede un minimo di 15 minuti per una persona abbastanza esperta in questa tecnica. Pertanto è necessario mantenere l'animale in vita ma in anestesia profonda quando si esibiva le dissezioni, per garantire la vitalità del tessuto per la successiva registrazione elettrofisiologica.
1. preparazione della soluzione di perfusione e residui della prova
- preparare 5 L di soluzione di Krebs: 113 mM NaCl, 5,9 mM KCl,....
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Risultati
La figura 1 rappresenta l'illustrazione schematica dell'apparato sperimentale per la preparazione di colorectum ex vivo "tubo", con un rappresentante di registrazione da un nervo distale a PG. Il nervo presumibilmente conteneva una miscela di afferenze splancnico lombare e pelvica. Nelle preparazioni da ratti normali, i nervi afferenti colici in genere hanno un basso livello di attività spontanea irregolare. Distensione di rampa del colon induce un g.......
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Discussione
Il protocollo presentato qui è un metodo relativamente semplice sperimentale per valutare le proprietà elettrofisiologiche delle afferenze colica dei ratti. Il protocollo (da dissezione del tessuto per impostare la registrazione del nervo) di solito ci vogliono circa 2 ore per completare. Raccolta di tessuto (passaggio 3) e la preparazione dell'elettrodo aspirazione (passo 5) sono i punti critici. È fondamentale essere in grado di individuare il PG, il numero LSN e il PN e fare attenzione a non per danneggiare il ganglio.......
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Dichiarazioni
Gli autori non dichiarano alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Questo protocollo è stato sostenuto da borse di ricerca da National Foundation Natural Science of China (#31171066, #81270464) e il centro di scienza di Sino-tedesco (GZ919).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sodio Pentobarbital | Shanghai Westang Bio-Tech | B558 | |
| Capsaicina | Sigma | M2028 | |
| Estrattore di elettrodi | MicroData Instrument Inc | PMP107 | |
| Neurolog System (Bioamplificatore) | Digitimer, Ltd | Neurolog System | |
| Convertitore A/D | Cambridge Electronic Design | Micro1401 | |
| Software di elaborazione dati | Cambridge Electronic Design | Spike2 versione 6 | |
| Filo d'argento | World Precision Instruments | EP12 | |
| Tubi di vetro | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
| Portaelettrodo | World Precision Instruments | MEH3SBW | |
| Bagno di riscaldamento | Grant | GR150 | |
| Microscopio da dissezione | Leica | Zoom2000 | |
| Microscopio da dissezione | World Precision Instruments | PZMIII-BS | |
| Accendisigari | qualsiasi | NA | |
| Strumenti chirurgici | World Precision Instruments | NA | |
| Perni per insetti | fatti in casa con filo di acciaio inossidabile da 0,1 mm | NA | |
| Manipolatore | a tre vieWorld Precision Instruments | KITF-R | |
| Ratti | Qualsiasi | NA | Qualsiasi ceppo/sesso può essere utilizzato. |
Riferimenti
- Al-Chaer, E. D., Traub, R. J. Biological basis of visceral pain: recent developments. Pain. 96 (3), 221-225 (2002).
- Christianson, J. A., Traub, R. J., Davis, B. M. Differences in spinal distribution and neurochemical phenotype of colonic afferents in mouse and rat.
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Ristampe e permessi
