Generazione e manutenzione a lungo termine di nervi liberi<em&gt; Hydra</em

Cassidy M. Tran; Sharon Fu; Trevor Rowe; Eva-Maria S. Collins

doi:10.3791/56115

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Articolo metodologico

Generazione e manutenzione a lungo termine di nervi liberi

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DOI:

10.3791/56115

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7 luglio 2017

Cassidy M. Tran¹ , Sharon Fu¹ , Trevor Rowe² , Eva-Maria S. Collins¹^,²

¹Division of Biological Sciences, UC San Diego, ²Physics Department, UC San Diego

In questo articolo

Sommario

Attraverso un doppio trattamento con colchicina, può essere generata una tossina derivata da piante che uccide cellule divisorie, senza idrografia Hydra vulgaris . Questi Hydra non possono nutrire o esaminare da soli. Questo documento descrive un metodo migliorato per la manutenzione a lungo termine di Idra vulgaris privo di nervi in laboratorio.

Abstract

La linea di cellule interstiziali di Hydra comprende cellule staminali multipotenti ei loro derivati: cellule ghiandolari, nematociti, cellule germinali e cellule nervose. Le cellule interstiziali possono essere eliminate mediante due trattamenti consecutivi con colchicina, una tossina derivata da piante che uccide le cellule divisorie, eliminando così il potenziale di rinnovamento delle cellule differenziate derivate dalle cellule staminali interstiziali. Ciò consente alla generazione di Hydra che mancano di cellule nervose. Un polipo privo di nervi non può aprire la bocca per alimentare, controllare o regolare la pressione osmotica. Tali animali, tuttavia, possono sopravvivere e essere coltivati indefinitamente in laboratorio se regolarmente alimentati e burped. La mancanza di cellule nervose consente di studiare il ruolo del sistema nervoso nel regolare il comportamento e la rigenerazione degli animali. I protocolli precedentemente pubblicati per la manutenzione Idra libera da idrocarburi comprendono tecniche obsolete quali la pipettazione a bocca con micropipetta tirata a manoIps per alimentare e pulire l' Hydra . Qui viene introdotto un miglioramento del protocollo per la manutenzione di Idra priva di nervi. Le pinze fine-punte vengono utilizzate per forzare la bocca e inserire Artemia appena uccisa. Dopo l'alimentazione della forza, la cavità del corpo dell'animale viene lavata con un mezzo fresco usando una siringa e un ago ipodermico per rimuovere il materiale non digerito, qui indicato come "burping". Questo nuovo metodo di erogazione di forza e burping Hydra senza nervi attraverso l'uso di pinze e siringhe elimina la necessità di pipettazione a bocca con punte a micropipetta tirate a mano. Questo rende il processo più sicuro e significativamente più tempo efficiente. Per garantire che le cellule nervose nel iostomo siano state eliminate, viene condotta l'immunohistochemistry usando l'anti-tirosina-tubulina.

Introduzione

Il sistema nervoso di Hydra è costituito da una rete nervosa, con i neuroni associati a entrambi gli strati di tessuto epiteliale ¹ . La rete nervosa è più densa nel hypostome e nel peduncolo e meno densa nella colonna del corpo ² . Le cellule nervose provengono da cellule staminali interstiziali, che sono cellule staminali multipotenti che danno origine a cellule secretarie, nematociti, cellule germinali e neuroni ¹ . È possibile eliminare le cellule interstiziali di Hydra vulgaris attraverso il trattamento con colchicina ³ ^,