Le zanzare Aedes aegypti infettate con Wolbachia vengono rilasciate in popolazioni naturali di sopprimere la trasmissione dell'arbovirus. Descriviamo i metodi retro Ae. aegypti con Wolbachia infezioni in laboratorio per esperimenti e rilascio di campo, prendendo precauzioni per ridurre al minimo la selezione e l'adattamento di laboratorio.
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Articolo metodologico
Mantenimento di Aedes aegypti zanzare infettate con Wolbachia
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le zanzare Aedes aegypti infettate sperimentalmente con Wolbachia stanno utilizzandi in programmi per controllare la diffusione di arbovirus come dengue, chikungunya e Zika. Wolbachia-zanzare infette possono essere rilasciate nel campo di ridurre dimensioni di popolazione attraverso accoppiamenti incompatibili o trasformare popolazioni con le zanzare che sono refrattari alla trasmissione del virus. Per queste strategie avere successo, le zanzare rilasciate nel campo dal laboratorio devono essere competitive con le zanzare autoctone. Tuttavia, mantenere le zanzare in laboratorio può provocare inbreeding, deriva genetica e adattamento di laboratorio che può ridurre la loro idoneità nel campo e può confondere i risultati degli esperimenti. Per verificare l'idoneità dei diversi Wolbachia infezioni per la distribuzione in campo, è necessario mantenere le zanzare in un ambiente di laboratorio controllato attraverso più generazioni. Descriviamo un protocollo semplice per mantenere le zanzare Ae. aegypti in laboratorio, che è adatto per entrambi Wolbachia-zanzare infette e wild-type. I metodi minimizzare adattamento di laboratorio e implementano esogamici per aumentare la rilevanza degli esperimenti alle zanzare di campo. Inoltre, colonie sono mantenute in condizioni ottimali per massimizzare la loro idoneità per i rilasci di campo aperto.
Introduzione
Le zanzare Aedes aegypti sono responsabili della trasmissione di alcune dell'arbovirus più importanti del mondo, tra cui la dengue, Zika e chikungunya1. Questi virus stanno diventando una crescente minaccia per la salute globale, come la distribuzione capillare di Ae. aegypti nei tropici continua ad espandersi2,3,4. Femmina Ae. aegypti preferenzialmente si nutrono di sangue umano5 e quindi tendono a vivere in prossimità di esseri umani, soprattutto nelle aree urbane, dove le popolazioni sono più densi.....
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Protocollo
Alimentazione di sangue di zanzare su soggetti umani è stato approvato dall'Università di Melbourne Comitato etica umana (approvazione n.: 0723847). Tutti i volontari forniti informato consenso scritto.
1. larvale allevamento
Nota: Le zanzare sono tenute presso 26 ± 0,5 ° C e 50-70% di umidità relativa, con un fotoperiodo di 12:12 h (luce: scuro) per questo protocollo di manutenzione di Colonia. Queste condizioni sono simili alle condizioni climatiche media a Cairns, Australia e all'interno della gamma termica ottima per Ae. aegypti sopravvivenza e sviluppo44,
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Risultati
Figura 4 illustra gli effetti della nutrizione suboptimale sullo sviluppo delle larve di Ae. aegypti . Quando sono disponibili contenitori con 0,25 mg di cibo al larva al giorno o meno, aumenta il tempo di sviluppo per sia i maschi che le femmine, ed è meno sincrona rispetto in contenitori fornita con 0,5 mg di cibo. Se un'alimentazione adeguata non viene fornita per tutta la durata dello sviluppo larvale, questo potrebbe avere un impatto negativo su.......
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Discussione
Seguendo il protocollo presentato qui per la manutenzione di Wolbachia-infetti Ae. aegypti dovrebbero assicurare che le zanzare sane di una qualità costante sono prodotte per esperimenti e aprire campo releases. A differenza di altri protocolli che privilegiano la produzione di massa quantità di zanzare (Vedi riferimento57), i metodi si concentrano su come massimizzare la loro idoneità, sia all'interno di generazioni implementando rilassate condizioni di allevamento e da altra pa.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.
Ringraziamenti
Riconosciamo Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson e Clare Doig per il loro contributo allo sviluppo dei nostri metodi di manutenzione di Colonia e tre utenti anonimi per i suggerimenti che ci ha aiutato a migliorare il manoscritto. La nostra ricerca è supportata da un programma grant e la fellowship di AAH dal National Health e il Medical Research Council e una traduzione concedere dal Wellcome Trust. PAR è un destinatario di un australiano governo ricerca formazione programma di borsa di studio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Wild type Aedes aegypti | Raccolto da luoghi di campo nel Queensland, Australia, vedi Yeap e altri39 per dettagli | ||
| w Mel-infected Aedes aegypti | Fornito dalla Monash University. Fare riferimento a Walker e altri23 per informazioni sul ceppo< | ||
| em>w AlbB-infected Aedes aegypti | Fornito dalla Monash University. Fare riferimento a Xi e altri21 per informazioni sul ceppo strain | ||
| w MelPop-infected Aedes aegypti | Fornito dalla Monash University. Fare riferimento a McMeniman e altri22 per informazioni sul ceppo | ||
| Lievito secco istantaneo | Lowan Stimola | schiusa delle uova. Trovato nei negozi di alimentari generici. Possono essere utilizzate altre marche | |
| Vasca di plastica da 5 L | Quadrante | Q110950 | Utilizzato per la schiusa e l'allevamento delle larve. Altri prodotti possono essere utilizzati |
| Cibo per pesci (compresse tropicali di tetramina) | Tetra | 16152 | Fornito alle larve come fonte di cibo. Sito web: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE |
| Contenitori | Utilizzati per l'allevamento delle larve. Qualsiasi contenitore di plastica superiore a 500 ml dovrebbe essere adatto | ||
| Pipetta | Utilizzato per il trasferimento di larve e pupe tra i contenitori. Indirizzo web: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez | ||
| Contatore clicker | RS Pro | 710-5212 | Utilizzato per aiutare nel conteggio di larve, pupe e uova. Sito web: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y |
| Vassoi per l'allevamento | Gratnells | Utilizzato per l'allevamento delle larve. Indirizzo web: http://www.gratnells.com | |
| Rete | di nylon Utilizzato per trasferire larve e pupe in contenitori di acqua dolce. Possono essere utilizzate altre marche. Indirizzo web: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white | ||
| Gabbie | BugDorm | DP1000 | Ospita zanzare adulte. Possono essere utilizzati prodotti alternativi. Indirizzo web: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html |
| Bicchiere di plastica da 35 ml | Huhtamaki | AA272225 | Utilizzato per fornire acqua o saccarosio alle zanzare adulte. Altre marche possono essere utilizzate |
| Coperchio a tazza di plastica da 35 ml | Huhtamaki | GB030005 | Utilizzato per fornire saccarosio alle zanzare adulte. Possono essere utilizzate altre marche |
| Cotone idrofilo | Cutisoft | 71841-13 | Il cotone idrofilo umido viene fornito come fonte d'acqua agli adulti. Altre marche possono essere utilizzate |
| Zucchero | Fornito come fonte di zucchero per le zanzare adulte. Trovato nei negozi di alimentari generici | ||
| Corda | M Recht Accessori | C323C / W | Utilizzato per fornire soluzione di saccarosio agli adulti. Possono essere utilizzate altre marche. Indirizzo web: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/ |
| Bicchiere di plastica (grande) | Utilizzato come contenitore per l'ovideposizione. Qualsiasi bicchiere di plastica che contenga 100 ml di acqua deve essere adatto | ||
| Carta vetrata | Norton Master Painters | CE015962 | Fornito come substrato per l'ovideposizione. Possono essere utilizzati prodotti alternativi, ma usiamo questo marchio perché è relativamente inodore. I colori più chiari vengono utilizzati per il contrasto con le uova. Indirizzo web: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html |
| Carta da filtro | Whatman | 1001-150 | Utilizzato come substrato alternativo per l'ovideposizione. Possono essere utilizzate altre marche |
| Guanti in lattice | SemperGuard | Z560979 | Previene le punture di zanzara sulle mani durante l'alimentazione del sangue. Possono essere utilizzate altre marche. Sito web: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/ |
Riferimenti
- Mayer, S. V., Tesh, R. B., Vasilakis, N. The emergence of arthropod-borne viral diseases: A global prospective on dengue, chikungunya and zika fevers. Acta Trop. 166, 155-163 (2017).
- Campbell, L. P., et al.
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Ristampe e permessi
