Articolo metodologico

Valutazione difetti di ostruzione delle vie urinarie Junction iniettando colorante blu di metilene

DOI:

10.3791/56247

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12 ottobre 2017

1Cancer and Developmental Biology Laboratory, National Cancer Institute, National Institutes of Health

In questo articolo

Sommario

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Iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale facilita la valutazione dei difetti di ostruzione delle vie urinarie giunzione durante lo sviluppo embrionale dell'apparato urinario del mouse. Qui, un protocollo per l'iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale è descritto.

Abstract

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Difetti di ostruzione delle vie urinarie giunzione sono anomalie congenite inducendo idronefrosi e hydroureter. Difetti di ostruzione giunzione murino delle vie urinarie possono essere valutati da monitorando il flusso di colorante blu di metilene all'interno del sistema urinario. Blu di metilene colorante viene iniettato nella pelvi renale dei reni embrionali perinatale e flusso di tintura è monitorato dalla pelvi renale del rene attraverso l'uretere e nel lume della vescica dopo l'applicazione di pressione idrostatica. Accumulo di colorante sarà evidente nel lume della vescica dell'apparato urinario perinatale normale, ma sarà vincolata tra pelvi renale e il punto finale di un uretere anormale, in caso di ostruzioni delle vie urinarie. Questo metodo facilita la conferma delle ostruzioni di giunzione delle vie urinarie e visualizzazione di idronefrosi e hydroureter. Questo manoscritto descrive un protocollo per l'iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale per confermare ostruzioni di giunzione delle vie urinarie.

Introduzione

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Il sistema urinario è costituito da una coppia di reni e ureteri e un comune della vescica e dell'uretra. La funzione principale del sistema urinario è di mantenere l'omeostasi corporea gestendo l'equilibrio di acqua ed elettroliti del sangue. I reni filtrano il sangue per controllo di concentrazione di elettroliti e l'equilibrio acido-base e producono urina per espellere l'acqua in eccesso e rifiuti tra cui soluti e metaboliti. Urina viene quindi trasportato attraverso l'uretere dalla pelvi renale del rene per la bladderin un modo unidirezionale dove viene immagazzinata e infine eliminata attraverso l' uretra1.

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Protocollo

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topi (Wnt5a flox / flox topi (Wnt5a tm1.1Tpy) e Dll1Cre linea, modello murino UVJO) 7 erano gestiti secondo le linee guida NIH per la cura e l'uso degli animali da laboratorio Studiò con un protocollo approvato dal comitato di uso e NCI-Frederick Animal Care.

1. preparazione della soluzione di colorante blu di metilene

  1. misura 0,1 g di blu di metilene polvere.
  2. Sciogliere completamente il blu di metilene in salino normale 10 mL o 1 x tamponato fosfato salino (PBS) nel Vortex.
  3. Filtrare la soluzione di blu di metilene 10 mg/mL con un siringa filtro (d....

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Risultati

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I reni e il sistema urinario inferiore si trovano dorsale alla maggior parte degli altri organi interni come il fegato ed intestino. Dopo la rimozione di questi altri organi interni, una coppia di reni e ureteri e vescica una singola sono visibili (Figura 1A). Al momento di successo dissezione, il colorante iniettato nella pelvi renale fluirà dal rene nella vescica tramite l'uretere. La pelvi renale è la parte prossimale dilatata imbuto dell'uretere nel rene........

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Discussione

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I reni mouse sono inizio funzionale alle E16.5 e una prova di iniezione della tintura è teoricamente possibile da questo punto di tempo. Tuttavia, il rene è troppo piccolo per essere iniettato con la soluzione colorante e fenotipi quali idronefrosi e hydroureter non si osservano chiaramente dal momento che questi fenotipi sono un effetto secondario di urina accumulato a causa del trasporto delle urine anormali. Questi fenotipi, da ostruzioni quali UPJO o UVJO, sono evidenti alle E18.5 di dilatato reni e ureteri. Reni più.......

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Dichiarazioni

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L'autore non ha nulla di divulgare.

Ringraziamenti

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Ringrazio il dottor Alan O. Perantoni (NIH/NCI/CDBL) per sostenere la presentazione di questo manoscritto. Ringrazio anche il Dr. Michael Hall (NIH/NCI/CDBL) e Nirmala Sharma (NIH/NCI/CDBL) per la modifica di questo manoscritto. Sono grato a Lai Thang (SAIC) per il suo allevamento eccellente mouse. Questo lavoro è stato sostenuto dagli istituti nazionali di salute, National Cancer Institute e centro per la ricerca sul cancro.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Blu di metileneSigma-AldrichM9140
Quality Biological Inc. SOLUZIONE SALINA NORMALE - 500MLFisherscientific50-983-204
Siringa monouso da 3 ml con punta BD Luer-LokBD309657
Acrodisc Filtri per siringhe con membrana SuporPall corporation4614
Exel Set per vene del cuoio capelluto (farfalla); 27G x 3/4" 12" EXELINT26709
Forbici Chirurgiche DelicateRoboz Surgical Instrument Co.RS-6702
Pinza per microdissezioneRoboz Surgical Instrument Co.RS-5135
Pinzetta Dumont; Modello #5Roboz Surgical Instrument Co.Aghi RS-5045
BD PrecisionGlide 30 G x 1/2"BD305106

Riferimenti

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  1. Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
  2. Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
  3. Bohnenpoll, T., Kispert, A.

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