Dissezione e preparazione coronale fetta di sviluppare la ghiandola pituitaria del Mouse

Dongmei Cao; Xianhua Ma; Weiping J. Zhang; Zhifang Xie

doi:10.3791/56356

Method Article

Dissezione e preparazione coronale fetta di sviluppare la ghiandola pituitaria del Mouse

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

Dongmei Cao¹ , Xianhua Ma¹ , Weiping J. Zhang¹ , Zhifang Xie¹^,²

¹Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, ²Department of Cell Biology, Second Military Medical University

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vi presentiamo un protocollo per sezionare le ghiandole pituitarie e preparare sezioni coronali pituitarie da topi di sviluppo.

Abstract

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La ghiandola pituitaria o ipofisi sono un importante organo endocrino che secerne ormoni essenziali per l'omeostasi. Si compone di due ghiandole con origini embrionali separate e funzioni — neurohypophysis e adenohypophysis. Ghiandola pituitaria del mouse in via di sviluppo è molto piccolo e delicato con una forma ovale allungata. Una sezione coronale è preferita per visualizzare sia il adenohypophysis e neurohypophysis in una sola fetta del pituitary del mouse.

L'obiettivo del presente protocollo è quello di ottenere sezioni coronali pituitari corretto con le architetture di tessuto ben conservato da topi di sviluppo. In questo protocollo, descriviamo dettagliatamente come sezionare ed elaborare ghiandole pituitarie correttamente da topi di sviluppo. In primo luogo, topi vengono fissati mediante perfusione perfusione di formaldeide prima della dissezione. Quindi tre diverse tecniche di dissezione vengono applicate per ottenere ghiandole pituitarie intatti a seconda dell'età dei topi. Per topi fetali dai giorni embrionale (E) 17,5-18,5 e neonati fino a 4 giorni, le regioni di sella intera compreso l'osso sfenoidale, ghiandola e nervi di trigeminal vengono sezionate. Per i cuccioli invecchiati giorni postnatali (P) 5-14, ghiandole ipofisi collegati con nervi di trigeminal vengono sezionati nel suo complesso. Per i topi vecchio oltre 3 settimane, le ghiandole pituitaria attentamente vengono sezionate gratis dai tessuti circostanti. Visualizziamo anche come incorporare le ghiandole pituitaria in un orientamento corretto utilizzando i tessuti circostanti come punti di riferimento per ottenere soddisfazione sezioni coronali. Questi metodi sono utili per analizzare le caratteristiche istologiche e dello sviluppo delle ghiandole pituitaria in topi di sviluppo.

Introduction

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La ghiandola pituitaria o ipofisi sono un importante organo endocrino che secerne ormoni essenziali per l'omeostasi¹^,². Anatomicamente, la ghiandola pituitaria è una struttura di ' due-in-one ' costituita neurohypophysis e adenohypophysis. Queste parti hanno diverse origini embrionali e funzione in modo molto diverso. Neurohypophysis è derivato da ectoderma neurale e secerne l'ormone antidiuretico e l'ossitocina. Adenohypophysis proviene da di Rathke ed è responsabile per il rilascio degli ormoni tra cui l'ormone della crescita, prolattina, ormone stimolante la tiroide, ormone follicolo - stimolante, ormone lu....

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Protocol

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topi C57BL/6 sono allevati in condizioni da organismi patogeni specifiche. Tutti i metodi sperimentali animali sono in conformità con le linee guida approvate dal comitato di etica presso Second Military Medical University e cura degli animali.

1. dissezione di postnatale sviluppando ghiandola pituitaria

eseguire anestesia: posto topi neonatali (P0 - P5) su ghiaccio tritato per indurre ipotermia. Per topi più di 5 giorni di età, iniettare intraperitonealmente 5% uretano (30 µ l/g di peso corporeo) per indurre l'anestesia. Valutare le risposte per coda/tep pizzichi. Procedere solo dopo che il mouse non risponde agli stimoli nociv....

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Results

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Questo protocollo presenta un metodo per sezionare ghiandole pituitarie da topi di sviluppo. Per il mouse neonatale, le regioni di sella intera che contiene la ghiandola pituitaria, i nervi di trigeminal e la sottostante osso sfenoidale sono stati sezionati fuori dalla base del cranio. La ghiandola pituitaria piccola e delicata rimasto intatta durante il processo (Figura 1A). Per topi più di 5 giorni, le ghiandole pituitaria collegate ai nervi di trigeminal l.......

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Discussion

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Per lo sviluppo di cadaveri murini, è stato tecnicamente difficile ottenere sezioni coronali corretto a causa della loro piccole e fragile caratteristiche e peculiarità anatomiche⁶^,⁸. Alcuni gruppi di ricerca ha così scelto sagittale sezioni per analizzare la morfologia di embrionale e neonatale pituitario¹¹^,¹². Però la sezione sagittale del pituitary è anche capace di risultati intermedi, anteriore e pos.......

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Disclosures

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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Acknowledgements

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Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni da National Natural Science Foundation of China (31201086, 31470759 e 31671219) e Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900).

....

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Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
Strumenti/Attrezzature
Forbici chirurgiche-dritte	JinZhong	J21010	possono essere acquistate da altri fornitori
Forbici fini	JinZhong	WA1010	possono essere acquistate da altri fornitori
Pinze smussate	JinZhong	JD1020	possono essere acquistate da altri fornitori
Pinze fini	Dumont	RS-5015	per l'isolamento dell'ago ipofisario
da 26 G (0,45 mm)	HongDa		per perfusione transcardica
Siringa (1 mL)	BD	300841	può essere acquistata da altri fornitori
Siringa (10 mL)	BD		può essere acquistata da altri fornitori Piastra
35 mm	Corning	430165	può essere acquistata da altri fornitori
La carta per la pulizia delle lenti	ShuangQuan		può essere acquistata da altri fornitori
Il microscopio anatomico	OLYMPUS	SZX-ILLB2-200	può essere acquistato da altri fornitori La
cassetta per l'inclusione	Thermo Fisher	22-272423	può essere acquistata da altri fornitori
Il sistema di console per l'inclusione dei tessuti	KEDEE	KD-BM11	può essere acquistato da altri fornitori
Microtomo	Thermo Fisher	HM315R	può essere acquistato da altri fornitori
Vetrini Superfrost-Plus	Thermo Fisher	22-037-246	può essere acquistato da altri fornitori Vetro
di copertura	Thermo Fisher	12-543	può essere acquistato da altri fornitori Microscopio
fluorescenza	OLYMPUS	BH2-RFCA	può essere acquistato da altri fornitori
Nome	Azienda	Numero di catalogo	Comments
Reagents
Uretano	BBI	EB0448
NaCl	Sigma	S9625	per PBS
KCl	Sigma	P9541	per PBS
Na2HPO4.12H2O	Sigma	71650	per PBS
K2HPO4	Sigma	P2222	per PBS
NaNO2	Sigma	237213
Eparina Iniezione di sodio	SPH	H31022051	per perfusione salina
Paraformaldeide (PFA)	Sigma	P6148
Etanolo	SCR	10009218
Xilene	SCR	10023418
Paraffina	Thermo Fisher	8330
Ematossilina	Sigma	H9627	per H& Colorazione E
Eosin Y	Sigma	E4009	per H& Ormone
dell'ormone della crescita (GH)	del		colora
l'anticorpo	dell'immunocolorazione dell'ipofisi
Anticorpo GFAP del coniglio	Sigma	G9269	per l'immunocolorazione dell'anti-coniglio
di capra IgG, HRP	Jackson	111-035-003	per l'immunocolorazione
del sistema TSA	NEN Life Science Products	NEL700	per l'immunocolorazione
Streptavidina, Alexa Fluor 594	Thermo Fisher	S32356	per l'immunocolorazione
Anti-FITC Alexa Fluor 488	Thermo Fisher	A11090	per l'immunocolorazione

da a nazionale coniglio che

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

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