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Articolo metodologico

Ri-Arterialized trapianto parziale di fegato del ratto con un in vivo vaso-Oriented 70% Hepatectomy

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DOI:

10.3791/56392

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8 aprile 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 2Reproductive Center, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 3Department of Transplantation, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 4Department of Surgery, Perelman School of Medicine at the University of Pennsylvania

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Qui, un protocollo che coinvolge il trapianto di fegato parziale ri-arterialized ratto è presentato. In particolare, 70% fegato è stato resecato in vivo utilizzando una tecnica aggiornata di hepatectomy orientato alla nave. L'arteria epatica è stato ricostruito in maniera fine--lato. La tecnica del polsino è stata modificata per accorciare i tempi di anastomosi della vena cava infrahepatic.

Abstract

Trapianto di fegato Split e il trapianto di fegato fegato da donatore vivente sono stati sviluppati in clinica a utilizzare il fegato gli organi in un modo più efficiente. Per comprendere meglio il meccanismo dietro queste procedure chirurgiche, un modello di trapianto parziale di fegato (PLTx) del ratto è stato istituito per studi chirurgici pertinenti. A causa della complessità del modello PLTx ratto, è necessario un protocollo con descrizioni dettagliate. Un articolo pubblicato precedentemente segnalato un protocollo in cui è stato utilizzato ex vivo hepatectomy per raggiungere 50% ratto PLTx. In contrasto con questo protocollo, abbiamo introdotto una ri-arterialized PLTx con un hepatectomy di 70% in vivo . Un aggiornato hepatectomy orientato alla nave fu inglobato nel ratto PLTx per perfezionare la procedura microchirurgica. Il portale di vene e arterie epatiche del lobo laterale di sinistra ed il lobo mediano erano individualmente sezionate e legate prima della rimozione del parenchima del fegato, quindi facente diminuire la probabilità di sanguinamento nel ceppo del fegato residuo. Inoltre, un'anastomosi di fine--lato nave tra l'arteria epatica comune e l'arteria epatica adeguata allargata è stata introdotta per ri-arterialize l'arteria epatica. Utilizzando questa tecnica di anastomosi del fine--lato nave, il diametro dell'anastomosi è stato ingrandetto, quindi diminuendo la difficoltà di sutura a mano e mantenere un alto tasso di pervietà anastomotiche. Inoltre, l'anastomosi di polsino della infrahepatic vena cava è stato leggermente modificato. Una sezione del parenchima del fegato della circonferenza intorno alla vena cava di un destinatario è stata conservata durante l'anastomosi di polsino per mantenere la forma tridimensionale del lumen vascolare. In questa sezione del parenchima del fegato è stato rimosso dopo aver completato l'anastomosi. Con questa modifica, il passo che coinvolge il posizionamento di suture di soggiorno è stato omesso, così ulteriormente abbreviare i tempi di anastomosi del polsino. Utilizzando questo protocollo del ratto PLTx, un livello basso degli enzimi del fegato, un'architettura lobulare epatica intatta e un alto tasso di sopravvivenza sono stati raggiunti dopo microsurgery.

Introduzione

Attualmente, c'è una grande discrepanza tra il numero di organi donati del fegato e il numero di pazienti in attesa di un fegato donato. La carenza di organi del fegato è un problema globale. Per espandere il pool di donatori, dividere il trapianto del fegato (LTx) e donatore vivente LTx sono stati sviluppati per l'utilizzo di un fegato parziale come un innesto1.

Per indagare ulteriormente il meccanismo dietro trapianto parziale di fegato (PLTx), modelli animali pertinenti sono stati stabiliti2,3,4,5. Nel ratto PLTx, i lobi del fegato sono resecati in vivo ed ex vivo per imitare le condizioni del donatore vivente LTx e dividere LTx, rispettivamente, nell'essere umano. Un libro pubblicato nel Journal of Experiments visualizzati presentato un protocollo dettagliato che coinvolgono un topo 50% PLTx utilizzando un ex vivo hepatectomy5. Tuttavia, un ratto PLTx con un'epatectomia in vivo ancora non è stato segnalato nella letteratura visualizzato in quel momento.

Oltre alla differenza tra hepatectomies in vivo ed ex vivo , la tecnica di esecuzione un'epatectomia si svolge anche un ruolo importante nel determinare l'esito di PLTx. attualmente, in molti studi chirurgici utilizzando il topo PTLx modello, il fegato i lobi sono stati resecati dopo aver piazzato una legatura semplice presso il pedicle del lobo del fegato2,3,6,7,8,9. Tuttavia, porre una legatura semplice prima che la resezione non è adatta per tutti i lobi del fegato, come diversi lobi del fegato hanno diverse forme e dimensioni. Una legatura semplice alla base del lobo mediano trasporta un ad alto rischio di causare un restringimento della vena cava, che alla fine possa influire il deflusso dei parziale dell'innesto del fegato10,11. Di conseguenza, un'aggiornamento hepatectomy tecnica basata sulla conoscenza dell'anatomia epatica del ratto è necessaria nel campo del ratto PTLx.

Il protocollo descritto in questo studio, un aggiornato hepatectomy di 70% orientato alla nave fu incorporato la procedura del ratto PLTx. Il portale di vene e arterie epatiche del lobo laterale sinistro (LLL) e lobo mediano (ML) erano dissecate e divisi singolarmente prima della rimozione del parenchima del fegato. Quindi, le vene epatiche del LLL e ML erano legate da piercing suture. Utilizzando singoli legature e più penetranti suture anziché ponendo una legatura semplice, il moncone residuo della ML è stato in grado di diffondersi oltre la vena cava. Quindi, la costrizione della vena cava infrahepatic causato da una legatura chirurgica è stata evitata. Inoltre, l'occlusione del rifornimento di anima del LLL e ML di legature singole prima rimozione del parenchima del fegato in diminuzione il tasso di sanguinamento nel ceppo residuo del fegato, riducendo così al minimo l'influenza della perdita di sangue sui esperimenti11.

Per microsurgeons, è una sfida significativa per ricostruire l'arteria epatica adeguata (PHA) di un innesto del fegato a causa del diametro estremamente piccolo di questa nave. Anche se la questione se sia veramente necessario ri-arterializzazione in LTx è ancora in discussione12,13,14, numerose tecniche di microchirurgia per ricostruire l'arteria epatica sono stati proposti14 . Qui, presentiamo una nuova tecnica per ri-arterializzazione dell'innesto del fegato, che le anastomosi dell'arteria epatica comune (CHA) il PHA allargata in maniera fine--lato. Utilizzando questa tecnica di fine--lato, due arterie epatiche sono collegate con un'anastomosi di un diametro maggiore. Maggiore è il diametro dell'anastomosi, la suturazione di mano più facile è quello di eseguire e maggiore diventa il miglioramento la pervietà dell'anastomosi.

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Protocollo

Tutte le procedure seguite le linee guida della chirurgia del roditore approvato dalla polizza animale Università medica di Wenzhou e Welfare Committee 15.

1. gli animali

  1. Utilizzare i ratti maschii di Lewis pesano 250-350 g come donatori e riceventi.

2. operativo ambiente

  1. Eseguire tutte le procedure microsurgical sotto un microscopio chirurgico con un ingrandimento che vanno da 7 X a 20x. Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici prima dell'uso in operazione.
    Nota: La sala operatoria e il tavolo operatorio sono pulite ma non sterili.

3. manovre di Microsurgical base

  1. Gratis, sezionare e mobilitare la nave.
    1. In primo luogo, è possibile utilizzare micro-forcipe dritto per sollevare il tessuto circostante sulla nave.
    2. In secondo luogo, delicatamente e ripetutamente aprire e chiudere le punte micro-pinzetta tale che le estremità sottili può tagliare aperto e sbucciare il tessuto circostante sulla parete anteriore della nave.
    3. In terzo luogo, è possibile utilizzare micro-forcipe dritto per il bloccaggio e sollevare il vaso per esporre lo spazio posteriore. Quindi, utilizzare i suggerimenti delle micro-pinze curve per sbucciare il tessuto circostante sulla parete posteriore della nave. Infine, dovrebbe essere presentato un vaso calvo senza alcun tessuto circostante collegato.
  2. Dividere o doppio legare e dividere una nave o tessuto.
    1. In primo luogo, legare due nodi quadrati sulla nave o tessuto utilizzando due micro-forcipe16. In secondo luogo, tagliare la nave o il tessuto tra i due nodi quadrati utilizzando micro-forbici.

4. preparazione del polsino e Stent biliare

  1. Rendere i polsini della vena portale e infrahepatic vena cava utilizzando cateteri endovenosi calibro 12 e calibro 14, rispettivamente, mentre lo stent biliare usato è un catetere endovenoso di calibro 22. I polsini sono costituiti da una parte del corpo e la parte della maniglia. Utilizzare una cilindrica sulla parte del corpo per proteggere la parete del vaso sul polsino (Figura 1).

5. l'anestesia e la fissazione dei ratti

  1. Posizionare delicatamente il ratto di Lewis in una scatola di induzione con isoflurano 5% mescolato con ossigeno 0,5 L/min per indurre l'anestesia per inalazione. Monitorare la frequenza respiratoria del ratto per prevenire la morte improvvisa causata da un'overdose di isoflurane. Ridurre la concentrazione di isoflurane al 2% per mantenere l'anestesia quando il topo non risponde allo stimolo di dolore.
  2. Fai avanzare il ratto ad una plancia di 30 cm x 30 cm Rovere coperta da un tovagliolo stuoia chirurgico sterilizzato e posizionare il ratto in posizione supina. Legare i quattro arti del ratto utilizzando nastro mediale e successivamente fissare il nastro con quattro puntine da disegno. Disinfettare la pelle con alcool al 70% una volta e iodofori tre volte.

6. donatore operazione

  1. Esporre il campo operatorio
    1. Tagliare una piccola incisione trasversa sull'addome superiore al transetto i vasi epigastrici inferiori bilaterali utilizzando un Coagulatore elettrico.
    2. Estendere l'incisione trasversale vicino al margine costa sulla parte superiore dell'addome utilizzando forbici chirurgiche.
    3. Invertire e fissare la parete superiore dell'addome e il processo xifoideo, rispettivamente, al lato cranico.
    4. Spostare l'intestino fuori della cavità addominale con due bastoncini di cotone bagnato. Coprire l'intestino utilizzando un pezzo di garza bagnato.
  2. Tagliare i legamenti e la rifilatura vena cava suprahepatic (SHVC)
    1. Tagliare il legamento falciformal, legamento coronario e del legamento triangolare in sequenza.
    2. Gratis la vena diaframmatica sinistra dal diaframma utilizzando micro-forcipe. Quindi, doppio legare utilizzando suture seta 6-0.
      Nota: Non dividere questa vena in questo passaggio.
    3. Tagliare il legamento gastroepatico utilizzando micro-forbici per liberare il lobo caudate inferiore e l'arteria e il legamento hepatoesophageal.
  3. Che occlude il rifornimento di sangue del LLL e ML prima di resezione (Figura 2)
    1. In primo luogo, utilizzare forcipe curvo per sezionare con cura la parete posteriore del tronco comune del PV che fornisce il LLL e lobo mediano sinistro (LML) dal parenchima. In secondo luogo, doppio legare e dividerlo insieme con il corrispondente dei dotti biliari e dell'arteria epatica.
    2. Sezionare e dividere il PV di RML delicatamente perché questa vena aderisce strettamente al parenchima del fegato.
      Nota: sono consigliabile 14 ingrandimenti. Non ferire il PV del lobo superiore di destra, che si trova vicino il PV di RML.
    3. Identificare l'arteria epatica e il dotto biliare di RML si trova tra il PVs di RML e amo la mia vita. Doppio legare e dividere l'arteria epatica e il dotto biliare di RML utilizzando suture seta 6-0.
      Nota: Un cambiamento nel colore del LLL e ML da rosso scuro è un indicatore della riuscita occlusione del rifornimento di anima. Conoscenza approfondita dell'anatomia vascolare è essenziale per identificare e sezionare i vasi corrispondenti. Uno studio precedente nel ratto illustrato chiaramente l'anatomia epatica da corrosione calchi10.
  4. Resecando la LLL
    1. Legare il pedicle del LLL utilizzando un circonferenziale sutura seta 3-0 per occludere il flusso sanguigno della vena epatica laterale sinistra. Utilizzando micro-forbici, tagliare il fegato immediatamente sopra la legatura per rimuovere la massa del fegato.
  5. Resecando l'amore la mia vita
    1. Bloccare la vena epatica mediana sinistra di pinze emostatiche zanzara collocate lungo la fenditura mediana (Figura 3A). Rimuovi tutto del parenchima del fegato dell'amore mia vita immediatamente sopra il forcipe utilizzando micro-forbici.
    2. Posto una sutura penetrante che penetra il parenchima del fegato immediatamente sotto le pinze che circonda la mediana sinistra epatica della vena. Quindi, fare un nodo quadrato per lega i prima di rilasciare il forcipe.
    3. Posizionare un altro due suture piercing sotto le pinze per circondare il resto dell'incisione aperta dell'amore la mia vita. Poi, legare due nodi quadrati per chiudere il resto dell'incisione. Rilasciare le pinze emostatiche di zanzara per controllare lo spurgo.
  6. Resecando RML (Figura 4)
    1. Posizionare la pinza emostatica mosquito per circondano la base del RML ad una distanza di 0,5 cm per SHVC (Figura 4B). Quindi, Croce-morsetto della base utilizzando le pinze emostatiche di zanzara per occludere la vena epatica destra mediana.
    2. Utilizzando micro-forbici, rimuovere tutti del parenchima del fegato di RML lungo la superficie superiore delle pinze. Essere sicuri di lavorare molto vicino alla superficie delle pinze, lasciando un moncone di piano e sottile della ML.
    3. Posto la prima sutura piercing penetrando il parenchima del fegato sotto il forcipe per circondare la mediana centrale epatica della vena. Quindi, fare un nodo quadrato per legare la vena epatica mediana centrale. Posto la seconda sutura piercing per legare la vena epatica destra mediana utilizzando lo stesso metodo. Posizionare un altro due suture piercing vicino al resto dell'incisione segue la descrizione in 6.5.2.
  7. Taglio della vena cava di infrahepatic (IHVC)
    1. Tagliare il retroperitoneum per esporre il IHVC. Utilizzare micro-pinzetta per liberare l'IHVC e la vena renale di destra dal tessuto circostante. Sezionare e legare la vena adrenale di destra, che drena nel IHVC dalla parte posteriore.
    2. Eseguire un giusto nephrectomy dopo la legatura della vena renale destra e dell'arteria renale di destra per salvare una lunghezza sufficiente vascolare per installare il bracciale sul IHVC in un passaggio successivo.
  8. Installare lo stent biliare
    1. Mobilitare il dotto biliare comune (CBD) dal primo ilo epatico utilizzando micro-forcipe. Legare il CBD al punto croce della vena pilorica e CBD utilizzando una sutura in seta 6-0.
    2. Tagliare un'incisione trasversale sulla parete anteriore del CBD sul lato prossimale della legatura. Inserire uno stent biliare, costituito da un catetere endovenoso di calibro 22, nel lumen del CBD via l'incisione. Fissare lo stent biliare con un circonferenziale sutura seta 6-0. Transetto CBD tra le due suture di seta 6-0.
  9. Il PV di cantu
    1. Legare la vena pilorica utilizzando una sutura in seta 6-0 distale al fotovoltaico. Successivamente, legare la vena pilorica utilizzando una sutura in polipropilene 7-0 il PV. Transetto la vena pilorica tra questi due legature. Doppio legare e dividere la vena splenica nello stesso modo.
      Nota: Utilizzare una sutura in polipropilene 7-0 per legare la nave per fare un nodo di legatura più piccolo rispetto a quello della sutura seta 6-0. Un grande nodo può interferire con l'installazione di polsino nell'ultimo passaggio. La parete vascolare della vena pilorica e vena splenica è sottile, così dolci manipolazioni sono essenziali durante la dissezione. Un articolo pubblicato in precedenza con più tecniche descrizioni e illustrazioni sul dissezione e dividendo la vena pilorica e la vena splenica dovrebbe essere letto prima operazione17.
  10. Tagliare l'arteria epatica comune (CHA)
    1. Gratis con attenzione il CHA e suoi due biforcazioni, il PHA e l'arteria gastroduodenale (GDA), dal tessuto circostante utilizzando due micro-forcipe. Doppio legare il GDA utilizzando suture seta 6-0 alla biforcazione di CHA di GDA.
  11. Heparinizing e che irrora l'innesto del fegato
    1. Iniettare 50 UI di eparina in 1 mL di soluzione fisiologica tramite la vena del pene. Attendere 5 min raggiungere eparinizzazione sistemica.
    2. Morsetto a croce il PV, IHVC e CHA utilizzando tre micro-serrefines curvo per occludere il flusso sanguigno epatico. Eseguire una piccola incisione sulla parete anteriore del PV per inserire un catetere di calibro 22. Irrorare l'innesto parziale del fegato con soluzione fisiologica a 4 ° C tramite il catetere sotto una pressione di 20 cmH2O.
    3. Rapidamente tagliare aprire la cavità toracica e intratoracica della vena cava, utilizzando forbici chirurgiche per drenare il sangue e il perfusato. Non interrompere la perfusione fino a quando il colore dell'innesto del fegato parziale intero diventa uniformemente giallo.
  12. Explanting innesto del fegato parziale
    1. Transetto vena diaframmatica sinistra tra le due legature (descritto in 6.2.2) utilizzando micro-forbici.
    2. Successivamente, transetto SHVC vicino il diaframma per mantenere la lunghezza vascolare più a lungo possibile. Transetto il PV a livello della vena splenica utilizzando micro-forbici. Dividere il GDA tra le doppie legature e transetto CHA vicino al tronco celiaco.
    3. Transetto i vasi adrenali dal lato distale del 6-0 legatura seta collocata in 6.7.2. Transetto la IHVC a livello della vena renale sinistra utilizzando forbici chirurgiche.
    4. Accise e trasferimento al fegato parziale di un piatto di retro-tabella (piastra di coltura 30mm) riempito con soluzione fisiologica a 4 ° C.

7. tabella back operazione (preparazione dell'innesto)

  1. Installare i polsini vascolari (Figura 5)
    1. Tirare il PV attraverso il lume di un bracciale realizzato con un catetere endovenoso di calibro 12 utilizzando micro-forcipe. Fissare temporaneamente il polsino manico e PV insieme utilizzando una pinza di nave. Parete del vaso Evert il PV per coprire la superficie esterna del bracciale. Fissare la parete del vaso e polsino in posizione con una sutura in seta della circonferenza 6-0.
      Nota: Non ruotare la nave. La maniglia di polsino dovrebbe essere tenuta la direzione di 12.
    2. Installare il bracciale IHVC seguendo le descrizioni in 7.1.1.
  2. Preimpostazione le suture due soggiorno sul SHVC
    1. Penetrare la parete del vaso del SHVC da fuori a dentro utilizzando due polipropilene 7-0 suture lungo il 3 e 9 direzioni, rispettivamente.
      Nota: Non fare un nodo.
  3. Preservare l'innesto
    1. Immergere l'innesto parziale del fegato in salino a 4 ° C per la conservazione dopo l'operazione di back-tabella.

8. destinatario operazione

  1. Ripetere le procedure descritte in 6.1-6.2 e 6.7, fatta eccezione per il giusto nephrectomy, nel destinatario per esporre il campo operatorio, transetto i legamenti e tagliare i vasi.
  2. Preparare il IHVC, dotto biliare, dell'arteria epatica e della vena portale nel destinatario
    1. In primo luogo, mobilitare la sezione di IHVC giù per la vena renale di destra. In secondo luogo, legare i vasi adrenali di destra utilizzando una sutura in seta 6-0. In terzo luogo, mobilitare il CBD da ilo epatico prima utilizzando micro-forcipe.
      Nota: Non tagliare il tessuto adiposo intorno al CBD.
    2. Transetto CBD alla prima biforcazione nel hilum epatico dopo la doppia legatura utilizzando una sutura in seta 6-0. Quindi, transetto PHA utilizzando micro-forbici successivamente la doppia legatura usando una sutura seta 6-0. Mobilitare la sezione del PV da ilo epatico alla vena pilorica.
  3. Mobilitare la parte posteriore del fegato
    1. Ritrarre il destinatario del fegato sul lato sinistro utilizzando due bastoncini di cotone. Quindi, tagliare il legamento nella parte posteriore del fegato dal SHVC alla vena adrenale di destra come descritto in un precedente articolo visualizzato18. Dopo questo, introdurre un elastico attraverso lo spazio posteriore della SHVC.
  4. Preparare gli strumenti e i materiali durante la fase anhepatic
    1. Ricontrollare la disponibilità di tutti gli strumenti e materiali necessari nella fase di anhepatic, ad esempio una siringa da 5 mL con un ago curvo, micro-forbici, micro-ago titolare, micro-forcipe, due micro-emostatici forcipe, suture in polipropilene due 7-0 e 6-0 materiale di sutura seta.
      Nota: La ricerca di materiali o strumenti può prolungare la fase anhepatic.
  5. Asportare il fegato nel destinatario
    1. Morsetto a croce la IHVC immediatamente sopra la vena renale mediante una fascetta di nave e il PV immediatamente sopra la vena pilorica. Registrare la durata della fase anhepatic da questo momento fino a quando non viene rilasciato il morsetto sul PV.
    2. Ridurre la concentrazione di isoflurano allo 0,5% immediatamente.
    3. Tirare il SHVC e il diaframma verso il basso dalla banda di gomma preselezionata. Fissare le parti del diaframma insieme con la vena cava intratoracico utilizzando una pinza Bulldog, mantenendo una distanza di 0,5 cm per il SHVC.
      Nota: Non stringere il polmone del topo.
    4. Utilizzando micro-forbici, tagliare la parete del vaso di SHVC accuratamente lungo il bordo superiore del parenchima del fegato per mantenere la parete vascolare più a lungo possibile.
    5. Transetto il PV alla prima biforcazione nel hilum epatico utilizzando micro-forbici. Quindi, transetto la vena cava inferiore nel parenchima del lobo inferiore di destra, piuttosto che nella parete del vaso, lasciando il parenchima del fegato della circonferenza intorno alla vena cava. Tenere il bordo di taglio nel lobo inferiore di destra ad una distanza di 4 mm per il IHVC. Dopo sezionare i vasi, spostare l'intero fegato fuori della cavità addominale.
  6. Ricostruendo il SHVC
    1. Posizionare l'innesto parziale del fegato in orthotopically la cavità addominale. Forare la parete del vaso di SHVC da dentro a fuori lungo le direzioni 3 e 9 con due punti di sutura soggiorno preimpostati. Tirare le suture di due soggiorno a destra e a sinistra dopo che sono legate in un nodo con i propri fini.
    2. Perforare SHVC parete del vaso da fuori a dentro vicino il nodo nella direzione 3 per introdurre l'ago di sutura giusto soggiorno nel lume vascolare.
    3. Anastomotizzare parete posteriore della SHVC da una sutura in esecuzione all'interno del lume vascolare da 3 direzione alla direzione 9.
    4. All'angolo di direzione 9, forare il muro nave da dentro a fuori vicino al nodo di introdurre l'ago dalla lumen vascolare.
    5. Utilizzare questa sutura per anastomotizzare parete anteriore utilizzando una sutura in esecuzione di fuori del lume vascolare dalla direzione 9 a 3 il punto di direzione. Infine, legare la sutura con la propria fine 3 volte (Figura 6).
      Nota: Iniettare 3-5 mL di soluzione fisiologica nel lume dei ricostruito SHVC per espellere le bolle d'aria prima dell'ultimo 2-3 punti. Una descrizione più dettagliata dell'anastomosi SHVC può essere trovata nell'articolo da Delriviere et al. 19.
  7. Ricostruendo il PV
    1. Posizionare due suture in polipropilene soggiorno di 7-0 alla fine del PV del destinatario seguendo la descrizione al punto 7.2. Tirare due soggiorno suture in direzione opposta per estendere la parete del vaso. Difficoltà due suture di soggiorno utilizzando due pinze emostatiche micro-zanzara.
    2. Iniettare circa 1 mL di soluzione fisiologica nel lume vascolare del PV nel destinatario per espellere le bolle d'aria. Inserire rapidamente il bracciale della vena portale in lumen vascolare del PV nel destinatario per forzare quando viene aperto utilizzando micro-forcipe. Fissare l'anastomosi di polsino utilizzando una sutura in seta della circonferenza 6-0. Cross-clamp il CHA.
  8. Riperfusione a innesto del fegato
    1. Sbloccare i morsetti sulla SHVC e PV in sequenza per rifluisca innesto del fegato. Registrare il tempo della fase anhepatic. Verifica per spurgo dell'anastomosi. Aumentare la concentrazione di isoflurane per 1-2% secondo la reazione del ratto per la stimolazione di dolore.
  9. Ricostruire il IHVC
    1. Iniettare 1 mL di soluzione fisiologica nel lume vascolare di IHVC nel destinatario per espellere le bolle d'aria. Inserire il manicotto cilindrico lumen vascolare di IHVC, che è sostenuto dal parenchima del fegato della circonferenza (Figura 7). Introdurre una sutura seta 6 / 0 attraverso lo spazio posteriore della IHVC. Rapidamente Proteggi l'anastomosi di polsino utilizzando una sutura in seta 6-0.
    2. Rilascio della nave due morsetti in IHVC per riavviare la perfusione. Tagliare il parenchima del fegato circostante con attenzione sopra la sutura di seta della circonferenza utilizzando micro-forbici.
  10. Ricostruzione dell'arteria epatica
    1. Penetrare la parete del vaso di CHA a innesto del fegato da fuori a dentro utilizzando due 11-0 polipropilene suture in 3 e 9, rispettivamente. Occludere il flusso di sangue della CHA e GDA nel destinatario utilizzando due curve micro-serrefines.
    2. Transetto PHA del destinatario alla radice per esporre il lumen vascolare utilizzando micro-forbici. Ingrandire il lumen vascolare di PHA nel destinatario da parte di taglio della parete del vaso in senso longitudinale per ospitare il diametro di CHA il trapianto del fegato.
    3. Anastomotizzare CHA dell'innesto del fegato per il PHA allargata in maniera fine--lato utilizzando la tecnica di sutura in esecuzione descritta per l'anastomosi SHVC (8.6.2-8.6.7).
      Nota: Illustrazioni dettagliate possono essere trovati nell'articolo di Huang et al.14.
  11. Ricostruendo il CBD
    1. Riportare l'intestino nella cavità addominale per ridurre la distanza tra le due estremità del dotto biliare. Eseguire un'incisione trasversale sulla parete anteriore del dotto biliare nel destinatario.
    2. Tirare lo stent biliare nell'innesto del fegato parziale verso il basso per inserirla nel lume del dotto biliare nel destinatario via l'incisione trasversa. Fissare lo stent utilizzando una sutura di seta della circonferenza di 6-0.
    3. Legare le due suture seta della circonferenza di 6-0 nel dotto biliare a vicenda per ridurre la tensione dell'anastomosi.
  12. Chiusura dell'addome
    1. Chiudere l'addome in due strati con sutura seta 3-0 nel modello corrente di sutura.

9. postoperatori trattamenti (Analgesia e antibiotici)

  1. Trattare tutti i destinatari con buprenorfina 0,1 mg/kg per via sottocutanea. Somministrare per via sottocutanea cefuroxima (16 mg/kg) oltre il farmaco analgesico. Offrono acqua del rubinetto e standard del laboratorio animale chow per i ratti ad libitum.

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Risultati

In totale, 31 casi di ratto arterialized syngeneic PLTx sono stati completati utilizzando questo protocollo. Tutti i destinatari sono sopravvissuti fino alla fine del tempo di osservazione. Il peso corporeo dei destinatari ha cominciato a recuperare dopo giorno postoperatorio (baccello) 4. La pendenza del peso corporeo era vicino a quello di un topo normale di Lewis dopo 6 POD (Figura 8), che indirettamente implicava il recupero del destinatario. Istologicame...

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Discussione

Ratto PLTx è una sofisticata procedura microchirurgica con un programma di formazione che è alta in costo e lunga durata20. La complessità del ratto PLTx protocollo ha impedito i ricercatori utilizzando questo modello animale. Rispetto al full-size ratto LTx, ratto PLTx presenta il Microchirurgo non solo con la sfida di una procedura di trapianto, ma anche con la sfida di resezione del fegato in un piccolo animale. Pertanto, un protocollo microsurgical visualizzato in quel momento che descrive tut...

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Dichiarazioni

Tutti gli autori non hanno nessun conflitto di interessi di divulgare.

Ringraziamenti

Questa ricerca è stata sostenuta dalla Fondazione nazionale di scienze naturali della Cina (Grant No. 81501382) e Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (Grant No. LQ13H100003 e LQ16H100002).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Microscopio operatorioMö ller-Wedel, Germania654359
Sorgente luminosaOSRAM (Cina) Lighting Co., Ltd64627
Vaporizzatore di isofluranoMIDMARK CorporationVIP3000
IsofluranoBaxter Healthcare Corporation40032609Per anestesia per inalazione
salina normaleZhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd.
Soluzione di iodio povidoneH33021567 HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICALPer la disinfezione
Pinze emostaticheShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdJ31020
Forbici chirurgicheShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdJC2116
Porta aghiShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdJ32030
Pinze per medicazioneShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdJ42020
Pinze emostatiche per zanzareShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdW40340Per resezione epatica; Per ritrarre le suture di soggiorno.
Micro-forbiciShanghai Medical Instruments(Gruppo) LtdWA1040
Micro porta-aghiShanghai Medical Instruments(Gruppo) LtdWA2060
Pinza curva per microtipizzazioneShanghai Medical Instruments(Gruppo) LtdWA3061
Pinza per micro tipizzazione dirittaShanghai Medical Instruments(Gruppo) LtdWA3060
Micro pinza emostaticaShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdWA3020
Bulldog morsettoShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdXEC350
Morsetti per vasiShanghai Medical Instruments (Gruppo) LtdW40160
Micro Serrefine-curvo  Strumenti di scienza fine, Inc18055-05
DacryosyrinxShi Zhuo strumenti medici Co., Ltd.5# curvaUtilizzare come ago curvo per espellere le bolle d'aria nel lume vascolare
Tamponi di garza sterilizzatiFuqing Health & Siringa Integral Medical20230R
5mLZhejiang Yusheng Medical Instrument Co., Ltd811932416
aghi 18GShanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd01-014Per il fissaggio della parete superiore dell'addome
Catetere intraveous Intima II 22GBecton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd.383207yPer la realizzazione di stent biliari; Per l'infusione
di suture in polipropilene perfusato 7-0Ningbo Medical Needle Co., Ltd151026Per l'anastomesi SHVC
6-0 sutura di setaShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd2650182Per la legatura
Piatto di coltura (100 mm)Corning Incorporated430165utilizzato nel tavolo posteriore per la conservazione del ghiaccio. Il piatto del tavolo posteriore è stato posizionato su di esso.
Piatto di coltura (30 mm)Corning Incorporated3296Come recipiente per la conservazione degli organi
Catetere endovenoso Angiocath 12GBecton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd.382277Per realizzare una cuffia IHVC
Catetere endovenoso Angiocath 14GBecton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd.382269Per fare un bracciale PV
Buprenorfina (cloridrato)Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., LtdH12020275Per analgesico
Cefuroxima sodica per iniezioneEsseti FarmaceuticiS.r.lH20160013Come antibiotici
Soluzione 716092103

Riferimenti

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