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Articolo metodologico

Utilizzando il t-labirinto modificate per valutare i risultati funzionali di memoria dopo arresto cardiaco

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DOI:

10.3791/56694

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5 gennaio 2018

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In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive l'uso di un t-labirinto modificato per valutare l'apprendimento/memoria funzionale nell'ischemia cerebrale indotta da arresto cardiaco di asfissia.

Abstract

Priorità bassa: Valutazione da lieve a moderata danno conoscitivo in un modello di ischemia cerebrale globale (cioè arresto cardiaco) può essere difficile dovuto povera locomozione dopo la chirurgia. Ad esempio, ratti che subiscono le procedure chirurgiche e sono sottoposti a labirinto dell'acqua di Morris non possono essere in grado di nuotare, quindi invalidare l'esperimento.

Nuovo metodo: Abbiamo stabilito un test t-labirinto di alternanza spontanea del comportamento modificato. Il principale vantaggio del protocollo t-labirinto modificato è il suo design relativamente semplice che è abbastanza potente per valutare la memoria/apprendimento funzionale dopo ischemia. Inoltre, l'analisi dei dati è semplice e lineare. Abbiamo usato il t-labirinto per determinare i deficit di memoria e apprendimento dei ratti sia in presenza o assenza di lieve a moderata (6 min) arresto cardiaco asphyxial (ACA). Ratti hanno una naturale tendenza per esplorazione ed esploreranno le braccia alternative in t-il labirinto, mentre ratti hippocampal-lesi tendono ad adottare un lato-preferenza con conseguente rapporti di alternanza spontanea in diminuzione, rivelando il hippocampal-correlate memoria/apprendimento funzionale in presenza o assenza di ACA.

Risultati: ACA gruppi hanno maggiori rapporti di preferenza di lato e alternanze inferiore rispetto al controllo.

Confronto con metodi esistenti: The Morris acqua e labirinto di Barnes sono più prominenti per valutare le funzioni di memoria e apprendimento. Tuttavia, il labirinto di acqua di Morris è più stressante di altri labirinti. Il labirinto di Barnes è ampiamente usato per misurare la memoria di riferimento (lungo termine), mentre i deficit neurocognitivi ACA-indotta sono più strettamente connesse all'utilizzo di memoria (a breve termine).

CONCLUSIONI: Abbiamo sviluppato una strategia semplice, ma efficace per delineare la memoria (a breve termine) tramite il t-labirinto di lavoro nel nostro modello di ischemia cerebrale globale (ACA).

Introduzione

Secondo l'American Heart Association (2017), arresto cardiaco (CA)-indotto mortalità si verifica ogni quattro minuti e colpisce oltre 400.000 persone all'anno in Stati Uniti d'America1. È ben documentato che CA può causare lesioni di un neurone del cervello a seguito di sangue insufficiente perfusione2,3,4. Lesione cerebrale indotta da CA si verifica nella regione CA1 ischemia-sensibile del ippocampo5,6,7, che interessa i neuroni che sono fondamentali per appr....

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Protocollo

Tutte le procedure sperimentali sono state condotte in conformità con le linee guida del National Institutes of Health e approvate dal comitato di uso (LSU Health Sciences Center-Shreveport) e istituzionali Animal Care per l'utilizzo del maschio (di ratti Sprague Dawley 300-350 g, 9-10 settimane). Ratti sono stati tenuti a digiuno durante la notte prima dell'intervento ACA.

1. t-labirinto apparato design e ambiente

Nota: Basare la progettazione di t-labirinto il diacono e il 'Rawlins 2006 modello31.

  1. La struttura 3D del labirinto che utilizzano SketchUp32. ....

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Risultati

ACA (ischemia cerebrale globale) provoca soprattutto lavorando (a breve termine) memoria deficit28,29. Per valutare la funzione di apprendimento e memoria dopo ACA, abbiamo usato il test modificate alternanza spontanea per valutare lavorando (a breve termine) memoria30. I risultati di test di alternanza spontanea suggeriscono che il tasso di alternanza da tre giorni consecutivi nel gruppo ACA (26,19 ± 4,96%.......

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Discussione

Nello studio presente rispetto al diacono e 'Rawlins protocollo31sono state apportate modifiche. La stampante 3D è stata utilizzata per costruire il t-labirinto. La stampa 3D fornisce alternative economica e remunerativa per commercializzato t-labirinto. Per ridurre l'ansia dei ratti durante la prova, il t-labirinto è stato effettuato in camera oscura con illuminazione minima. Una volta che il topo inserito uno dei bracci di obiettivo, abbiamo bloccato delicatamente il braccio opposto. Questo evit.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato dall'istituti di salute nazionale Istituto nazionale di disturbi neurologici e colpo concedere 1R01NS096225-01A1, l'American Heart Association concede AHA-13SDG1395001413, 17GRNT33660336 AHA, AHA-17POST33660174, il Louisiana State University Grant nel Consiglio di ricerca di aiuto, la compagnia ricerca cardiovascolare Malcolm Feist ed Evelyn F. McKnight Brain Institute.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Stampante 3DMakerBotReplicatorFilamento
stampante 3DHatchboxPLA, diametro del filamento da 1,75 mm
200 Proof Pure EthanolKoptecV1005SG
Sani-ChipsPJ Murphy-Forest Dimensioni dei prodotti: da 8 a 20 mesh; 2,2 piedi cubi/confezione; sacchetti autoclavabili
RatCharles River LaboratoriesSprague-Dawley
Vecuronio bromuro SunPharmaceutical47335-931-4010 mg
EpinefrinaPar Pharmaceutical42023-103-01Soluzione di cloruro di adrenalina 1 mg/mL, 1:1000
Buprenorfina cloridrato per iniezionePfizer00409-2012-320,3 mg/mL
SketchUpTrimble Inc.Software di modellazione 3D
Ventilatore per piccoli animali VentEliteHarvard Apparatus55-7040Animali di dimensioni che vanno dal topo al porcellino d'India (da 10 g a 1 kg)
PowerLab 8/35AdinstrumentsPL35088 canali di ingresso analogici, 4 dei quali possono essere utilizzati in modalità differenziale.
IlBio Amp è un bioamplificatore differenziale ad alte prestazioni isolato galvanicamente, ottimizzato per la misurazione di un'ampia varietà di segnali biologici come registrazioni ECG, EMG ed EEG.
AdinstrumentsFE224Un amplificatore a ponte a quattro canali, non isolato, progettato per consentire al PowerLab di connettersi alla maggior parte dei trasduttori a ponte CC.
LabChart 8Adinstruments
ABL80 FLEX CO-OX analizzatore di gas ematiciRadiometropH / p CO2 / p O2
SURFLO Catetere per flebo in teflonTerumosc-361556Utilizzare solo il catetere flessibile a parete sottile (lunghezza 49 mm)
Ago per pipetta/infusioneHamilton7748-03Calibro 17; 93 mm di lunghezza;
Vaporizzatore Classic T3SurgiVetVCT302T3 Isoflurano Riempimento a imbuto
ENVIRO-PURE Contenitore di carboneSurgiVet32373B10Progettato per assorbire il gas anestetico di scarto
O2 flussometro singoloSurgiVet32375B10-1000 mL
N2O FlussometroVetEquip4017210-4LPM
Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter (sterile)Becton Dickinson42756523 gauge
Micro ForcepsBlack e Black surgicalB3FRC-18 RM-87 1/4" (18 cm), 8 mm RH, contrappeso con perno guida 2 mm, piattaforma 6 x 0,3 mm, curvo.
Halstead Mosquito ForcelleRobozRS-7111Curvo; 5" Lunghezza, 1,3 mm di diametro della punta, 2,1 mm di larghezza della ganascia
Mixter PinzeRobozRS-72915,25" Curvo Extra Delicato, punte da 1,1 mm
Castroviejo Micro Dissecting Spring ScissorsRobozRS-5650Punte dritte e affilate; 9 mm di tagliente; 0,15 mm di larghezza della punta; 3 1/2" di lunghezza totale
Mayo-Stille ForbiciRobozRS-68915.5" Round Curvele
Dumont #5 PinzeRobozRS-505845 gradi Dumoxel Dimensione .10 x .06 mm
Olsen-Hegar Combinazione Forbice e porta ago RobozRS-7884a dentellatura incrociata; 5.5" Lunghezza
Moloney PinzeRobozRS-8254seghettate; leggera curva; Lunghezza 4,5"
per di quinta generazione con angolo di 10 gradi Classic Punta

Riferimenti

  1. Writing Group, M., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133, e38-e360 (2016).
  2. Beuret, P., et al. Cardiac arrest: prognostic factors and outcome at one year. R....

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Ristampe e permessi

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