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Articolo metodologico

Tecniche chirurgiche per la disposizione del catetere e 5/6 di nefrectomia nei modelli murini di dialisi peritoneale

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DOI:

10.3791/56746

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19 luglio 2018

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In questo articolo

Sommario

Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico in topi di un catetere intraperitoneale collegata a una porta di accesso che è posizionata nella parte posteriore dell'animale. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia assomigliare lo stato uremico di pazienti del Palladio.

Abstract

La dialisi peritoneale (PD) è una terapia di sostituzione renale coerenza sulla gestione e recupero posteriore di un fluido iperosmotico nella cavità peritoneale per drenare acqua e tossici dei metaboliti che funzionalmente insufficienti reni non sono in grado di eliminare. Purtroppo, questa procedura si deteriora il peritoneo. Danno tissutale innesca l'inizio di infiammazione per guarire la ferita. Se la lesione persiste e l'infiammazione diventa cronica, può portare alla fibrosi, che è un evento comune in molte malattie. Nel PD, infiammazione cronica e fibrosi, insieme ad altri processi specifici relazionati a queste ultime, provocare un deterioramento capacità di ultrafiltrazione, che significa il fallimento e la conseguente cessazione della tecnica. Lavorare con campioni umani fornisce informazioni su questo deterioramento ma presenta limiti tecnici ed etici per ottenere biopsie. Modelli animali sono essenziali per studiare questo deterioramento in quanto essi superare queste carenze.

Un modello di infusione cronica del mouse è stato sviluppato nel 2008, che beneficia della vasta gamma di topi geneticamente modificati, aprendo la possibilità di studiare i meccanismi coinvolti. Questo modello si avvale di un dispositivo su misura progettato per topi, che consiste di un catetere collegato a una porta di accesso che viene inserita per via sottocutanea nella parte posteriore dell'animale. Questa procedura evita il continua puntura del peritoneum durante gli esperimenti a lungo termine, riducendo le infezioni e l'infiammazione a causa di iniezioni. Grazie a questo modello, il danno peritoneale indotto tramite l'esposizione cronica di fluido del PD è stato caratterizzato e modulato. Questa tecnica permette l'infusione di grandi volumi di fluidi e poteva essere utilizzata per lo studio di altre malattie in cui è necessario l'inoculazione di farmaci o altre sostanze per lunghi periodi di tempo.

Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico del catetere in topi. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia simulare lo stato di insufficienza renale presente nei pazienti del Palladio.

Introduzione

Funzione del rene e malattie renali

I reni sono organi essenziali coinvolti nell'omeostasi, filtrazione del sangue e la produzione dell'ormone. Ci sono diverse condizioni che portano ad insufficienza renale e alla successiva comparsa dell'uremia, che è stato definito come il gruppo di sintomi sistemici dovuti all'accumulo di rifiuti prodotti nel sangue conservato a causa di disordini del rene funzione1. Inoltre, poiché la capacità omeostatica viene influenzata anche quando c'è un'insufficienza renale, ipertensione a causa di sovraccarico di volume può verificarsi, che è anche pericoloso in quanto può portare a insuffici....

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Protocollo

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal comitato di uso di biologia molecolare centro Severo Ochoa (Madrid, Spagna) e istituzionali Animal Care.

Nota: Sono stati utilizzati topi femminili C57BL/6J 12 a 14 settimane di età e peso di circa 20 grammi all'inizio dello studio. Tutti gli animali sono stati alloggiati in condizioni standard e ci hanno dato acqua e cibo ad libitum. Condizioni di salute sono state controllate tutti i giorni. Il materiale necessario, come guanti, drappeggio, catetere, sutura e aghi deve essere sterile.

1. Posizionare il catetere

Nota: Se i r....

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Risultati

La figura 1 Mostra tutti i materiali necessari per seguire le procedure descritte nella sezione protocollo. In questo esempio, topi sottoposti o non a nefrectomia (8 animali per gruppo) (Figura 2) sono stati esposti durante 40 giorni (due iniezioni al giorno, in attesa di almeno 2 ore tra i due) ad una miscela di due diversi file PDF, comunemente usati nella pratica clinica: Extraneal (PDF basati su icodestrina) e Dianeal (PDF ba.......

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Discussione

I primi dati pubblicati analizzando le alterazioni PD utilizzando una tecnica di "chiudere il sistema" è stati effettuati nel 200929 . Questo sistema vicino significa che l'intero dispositivo è situato all'interno del corpo e liquido viene iniettato con un ago attraverso una porta di accesso. Il problema tecnico più importante nei modelli animali a lungo termine dell'infusione di fluidi attraverso un catetere è l'avvenimento dell'ostruzione. Le opzioni disponibili sono per eseguire omentectomia o .......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Autori ringraziano Ferrantelli E. e G. Liappas per il loro supporto impostazione del protocollo di 5/6 di nefrectomia, R. Sánchez-Díaz e P. Martín per l'assistenza con valutazioni di azoto ureico e Hevia E. e F. Núñez per l'assistenza con cura di topi. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni SAF2016-80648R dal "Ministerio de Economía y Competitividad" / Fondo Europeo de Desarrollo Regional (MINECO/FEDER) di Manuel López-Cabrera e PI 15/00598 da Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)-fondi FEDER, a Abelardo Aguilera.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Minute Mouse Port 4French con perline di ritenzione e fori trasversaliTecnologie di accessoMMP-4S-061108A
Aghi a punta Posi-Grip Huber calibro 25 x 1/2&acuto; e acuto;  Tecnologie di accessoPG25-500
Kit per cauzione ad alta temperaturaBovie18010-00
ForaneabbVie880393.4 HO
sutura non assorbibile 6/0Laboratorio Agaró6121
Forbici Fine Science Tools14079-10
pinzaFine Science Tools11002-12
morsettoFine Science Tools13002-10
Buprenorfina 0,3 mg/mlprodotto farmaceutico
tamponiprodotto farmaceutico
Dalsy (Ibuprofene) 20mg/mL sospensione oraleAbbVie  S.R.L.prodotto farmaceutico
di cotone

Riferimenti

  1. Meyer, T. W., Hostetter, T. H. Uremia. New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).
  2. Pyper, R. A. Peritoneal Dialysis. Ulster Medical Journal. 17 (2), 179-187 (1948).
  3. Chaimovitz, C. Peritoneal dialysis. Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).
  4. <....

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