Valutazione di sperma di pesce utilizzando Software e dispositivi di raffreddamento

Summary

Il presente protocollo descrive una procedura di valutazione di sperma di pesce mediante analisi computerizzata dello sperma e dispositivi di raffreddamento. Il software dà un rapido, accurato e l'analisi quantitativa della qualità dello sperma di pesce basata sulla motilità degli spermatozoi, che può essere un utile strumento nel settore dell'acquacoltura per migliorare il successo di riproduzione.

Abstract

Per la valutazione della qualità dei gameti, esistono tecniche innovative, rapide e quantitative che possono fornire dati utili per l'acquacoltura. Sistemi computerizzati per l'analisi dello sperma sono stati sviluppati per misurare diversi parametri e uno dei più comunemente misurato è la motilità degli spermatozoi.

Inizialmente, questa tecnologia informatica è stata progettata per specie di mammiferi, anche se può anche essere utilizzato per l'analisi dello sperma dei pesci. I pesci hanno caratteristiche specifiche che possono influenzare la sperma valutazione come un momento di breve motilità dopo l'attivazione e, in alcuni casi, adattamento a temperature più basse. Pertanto, è necessario modificare i componenti hardware e software per analisi di motilità più efficiente per l'analisi dello sperma dei pesci. Per gli spermatozoi dei mammiferi, la piastra di riscaldamento viene utilizzata per mantenere la temperatura ottima di spermatozoi. Tuttavia, per alcune specie di pesci, è vantaggioso utilizzare una temperatura più bassa per prolungare la durata della motilità, dato che gli spermatozoi rimangono attivi per meno di 2 min. Di conseguenza, dispositivi di raffreddamento sono necessari per refrigerare i campioni a temperatura costante sopra il tempo di analisi, tra cui il microscopio ottico. Questo protocollo descrive l'analisi di motilità dello sperma di pesce utilizzando il software per l'analisi dello sperma e nuovi dispositivi per ottimizzare i risultati di raffreddamento.

Introduction

L'efficacia di riproduzione dipende dalla qualità dei due gameti (uova e spermatozoi)^1,2. Questo è il fattore principale che contribuisce alla fecondazione, permettendo lo sviluppo di prole vitale^3,4. Il conveniente valutazione della qualità dei gameti è lo strumento migliore per definire il potenziale di fertilità di un esemplare.

Miscelazione di sperma da più maschi è una pratica comune nella produzione di molte specie acquatiche commerciali⁴. Tuttavia, la variabilità di sperma tra maschi può portar....

Protocol

Procedure che coinvolge soggetti animali sono stati approvati (2015/VSC/pisello/00064) dalla direzione generale della produzione agricola e del bestiame presso la Universitat Politècnica de València.

1. raccogliere lo sperma da anguille adulte europee in cattività

Nota: Maschi di anguilla europea uso mantenuti in vasche con acqua di mare e un sistema di ricircolo a temperatura costante (20 ° C). Trattare con gli ormoni attraverso iniezione intraperitoneale settimanale (gonadotropina corionica umana (hCG); 1,5 IU / g del peso corporeo di pesce). Acclimatare pesci gradualmente, cominciando con 3 giorni in acqua dolce....

Results

Analisi dell'effetto tempo sulla motilità dello sperma

Nel caso l'anguilla europea, la percentuale degli spermatozoi statici aumentato da 15 s a 120 s dopo l'attivazione (dal 24,4% al 40,7%) e la percentuale di spermatozoi mobili progressivi è diminuito (da 36,9% al 20,9%) (Figura 1A e 1B). Basato su velocità, le cellule degli spermatozoi hanno mostrato una diminuzi.......

Discussion

Il software di analisi dello sperma utilizzato in questo protocollo è stato utilizzato dai ricercatori in tutto il mondo per le diverse specie, tra cui pesce. Tuttavia, i pesci hanno alcune caratteristiche specifiche che possono influenzare la valutazione di sperma. Spermatozoi di pesce ha mostrati ad alta velocità al momento dell'attivazione che declina rapidamente e conduce ad un a breve termine della motilità dopo l'attivazione. Inoltre, la temperatura della riproduzione è specie-dipendente e, in alcuni casi, potrebbe.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gonadotropina corionica umana	Argent Chemical Laboratories	ormone hCG
benzocaina	Merck	E1501 Sigma	Anesthesia
bicarbonato di sodio	Merck	S5761 Sigma	P1 medio
cloruro di sodio	Merck	1.06406 EMD Millipore	P1 cloruro di
magnesio	Merck	1374248 USP	P1 cloruro di
potassio	Merck	P3911-500G	P1 cloruro di
calcio	Merck	C7902-500G	P1
sale commerciale	Aqua Medic	Soluzione Meersalz	Activator
Soluzione BSA	Merck	05470 Sigma	Activator
Provette Falcon 15 ml	Merck	T1943-1000EA
Supporto provette Falcon	Merck	R5651-5EA
Eppendorfs	Merck	T9661-1000EA
Micropipet 20 &; l	Gilson	PIPETMAN®
10 & micro; l	Merck	Z683787-1EA
Punte per micropipette 20 &; micro; l	Merck	Z740030-1000EA
Punte per micropipette 10 &; l	Merck	Z740028-2000EA
Spermtrack	PROiSER	Camera
TruMorph	PROiSER	TruMorph
Microscopio UB 200i Serie	PROiSER	Microscopio Piastra
di raffreddamento	PROiSER Prototipo PROiSER
di raffreddamento	PROiSER		Prototipo
ISAS v1	Software PROiSER	ISAS