Protocolli per la gestione temporanea di pupal periodi e misurazione della pigmentazione ala della Drosophila guttifera sono descritti. Staging e quantificazione della pigmentazione forniscono una solida base per lo studio di meccanismi di tratti di adulti e consentire interspecifico confronto tra lo sviluppo del tratto.
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Articolo metodologico
Metodi per la gestione temporanea Pupal periodi e misura di ala pigmentazione della Drosophila guttifera
In questo articolo
Sommario
Abstract
Diversificato specie di Drosophila (moscerino della frutta) offrono l'opportunità di studiare i meccanismi di sviluppo e cambiamenti genetici responsabili di cambiamenti evolutivi. In particolare, la fase adulta è una fonte ricca di tratti morfologici per confronto interspecifico, compreso il raffronto di pigmentazione di ala. Per studiare le differenze di sviluppo tra specie, osservazione dettagliata e gestione temporanea appropriata sono necessari per confronto preciso. Qui descriviamo i protocolli per la stadiazione dei periodi pupal e quantificazione della pigmentazione di ala a pois moscerino della frutta, Drosophila guttifera. In primo luogo, descriviamo il metodo di osservazione morfologica dettagliata e definizione di fasi pupal basato sulle morfologie. Questo metodo include una tecnica per la rimozione del pupario, che è il caso di chitinoso esterno della pupa, per consentire l'osservazione dettagliata delle morfologie pupale. In secondo luogo, descriviamo il metodo per misurare la durata delle fasi di pupal definite. Infine, descriviamo il metodo per la quantificazione della pigmentazione di ala sulla base di analisi di immagine utilizzando immagini digitali e software ImageJ. Con questi metodi, possiamo stabilire una solida base per il confronto di processi di sviluppo dei tratti adulti durante fasi pupal.
Introduzione
Alcune delle caratteristiche morfologiche di Drosophila sono diversificate tra specie1,2,3,4,5. Noi possiamo affrontare la questione della diversità come morfologica si pone confrontando i meccanismi di generazione di queste morfologie. Esempi di tali morfologie sono larvale Tricomi, sesso adulto pettini, apparato genitale esterno, pigmentazione addominale e ala pigmentazione6,7,8,
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Protocollo
1. volare stock
- Utilizzare Drosophila guttifera per tutti i protocolli seguenti.
- Utilizzare fiale di plastica (diametro 25 mm x altezza 96 mm) e spine di cellulosa (diametro 23 mm x altezza 26 mm) per la manutenzione d'archivio. Utilizzare un cibo di farina di mais/zucchero/lievito/agar standard e seguire una pubblicazione descritto tre altre ricette alternative per questa specie2.
Nota: d. guttifera (numero di azioni 15130-1971.10) è fornito da drosofila specie Stock Center presso la University of California, San Diego. Anche se d. guttifera appartiene il immigrans-tripunctata....
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Risultati
Il periodo pupa di d. guttifera è diviso in 17 tappe (P1 - P15(ii); immagini del rappresentante tre fasi (P1, P5 - 6, P10) sono mostrati nella figura 3e 17 tutte le fasi sono illustrate nella Figura 4). Anche Bainbridge e Bownes17 riconosciuto 20 tappe in d. melanogaster, alcune di queste fasi non poteva essere applicata a d. guttifera. L'ordine di due eventi inerenti allo svilup.......
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Discussione
Descriviamo qui i protocolli per la definizione delle fasi pupal, rimuovendo il pupario per osservazione dettagliata, misurano la durate delle fasi pupal e misurazione dell'intensità delle macchie nere su un'ala a d. guttifera. Questi protocolli possono essere applicati per molti Drosophila e relative specie volare, soprattutto con la pigmentazione di ala.
Descrizione degli eventi inerenti allo sviluppo più dettagliati e approfondita osservazione consentirebbe ulteriore suddi.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Ringraziamo Sean B. Carroll e Thomas Werner per fornire scorte volare, Naoyuki fusibile per attrezzature, Byung Seok Jin per la sua assistenza nella contaminazione, Kiyokazu Agata per tutoraggio ed Elizabeth Nakajima per l'editing di inglese. Questo lavoro è stato supportato da KAKENHI 17K 19427 e Takeda Science Foundation.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Drosophila guttifera | The Drosophila Species Stock Center presso l'U.C. San Diego | 15130-1971.10 | Drosophila guttifera, una specie di moscerino della frutta utilizzata in questo articolo |
| Fiala di plastica | Hightech | MKC-30 | Fiala di plastica, per il mantenimento delle mosche |
| Buzz plugs, fiale e chiusure per flaconi per fiale di vetro | Fisher Scientific | AS-271 | Tappo di cellulosa, per la manutenzione del bestiame volante |
| Zucchero morbido bianco | Mitsui Sugar | J-500g | Zucchero morbido bianco, per alimenti standard di farina di mais/zucchero/lievito/agar Farina di |
| mais | Nippon Flour Mills | F | Farina di mais, per alimenti standard di farina di mais/zucchero/lievito/agar |
| Semola di mais - C | Nippon Flour Mills | GC | Semola di mais - C, per farina di mais/zucchero/lievito/agar standard Polvere |
| di agarMatsuki Kanten Sangyo | No.602 | Agar in polvere, per farina di mais/zucchero/lievito/agar standard | |
| Lievito di birra secco | Asahi Food & Healthcare | Y2A | Lievito di birra secco, per alimenti standard a base di farina di mais/zucchero/lievito/agar |
| Butile p-idrossibenzoato | Nacalai Tesque | 06327-02 | Butile p-idrossibenzoato, per alimenti standard a base di farina di mais/zucchero/lievito/agar |
| Etanolo | Wako | 057-00456 | Etanolo, per alimenti standard a base di farina di mais/zucchero/lievito/agar |
| Microprovetta a fondo piatto | Microprovetta Ina Optica | CF-0150 | da 1,5 mL, per raccolta di pupe |
| CAPSULEFUGE | Tomy | PMC-060 | Mini microcentrifuga, per la raccolta di pupe |
| Sterilizzato Schale NB | Sansei Medical | 01-013 | Piastra di Petri in plastica (diametro 90 mm x altezza 15 mm) |
| Rack per provette di siero | Iwaki | 9796-050 | Utilizzato come camera umida, per l'osservazione di pupe |
| Corning Falcon Easy-Grip piatto per coltura tissutale | Corning | 353001 | Piastra di Petri in plastica (diametro 35 mm x altezza 10 mm) |
| Piastra per coltura tissutale standard Falcon | Corning | 353002 | Piastra di Petri in plastica (diametro 60 mm x altezza 15 mm) |
| Puntina | Kokuyo | 51233709 | Push-pin, per la realizzazione di fori di spillo sul coperchio del microtubo |
| Stereomicroscopio | Olympus | SZX16 | Stereomicroscopio, per l'osservazione |
| morfologica Fotocamera digitale | Olympus | DSE-330-A | Fotocamera digitale, per l'imaging |
| Nastro biadesivo NICETACK | Nichiban | NW-15SF | Nastro biadesivo, per la rimozione del pupario |
| Dumont #5 Pinze | Fine Science Tools | 11252-20 | Pinze, per la rimozione del pupario |
| Van Gogh VISUAL Pennello | Talens Japan | GWVR-#5/0 | Pennello, per la rimozione del pupario |
| Greiner CELLSTAR Piastra per colture cellulari a 12 pozzetti | Merck | 665-180 | Piastra per colture cellulari a 12 pozzetti, per la misurazione della durata dei periodi pupali |
| NaCl | Wako | 191-01665 | NaCl, per PBS |
| KCl | Nacalai Tesque | 285-14 | KCl, per PBS |
| Na2HPO4· 12H2O | Wako | 196-02835 | Na2HPO4· 12H2O, per PBS |
| KH2PO4 | Nacalai Tesque | 28721-55 | KH2PO4, per filtro a |
| densità neutra (ND) a gradini PBS 0,04 - 3,0 | Edmund Optics | 64-384 | Filtro a densità graduale, per la calibrazione della misurazione della pigmentazione |
| Software | ImageJ NIH | 1.8.0-101 | Software ImageJ, per la misurazione dell'intensità delle macchie nere su un'ala (https://imagej.nih.gov) |
| Vetrino FINE FROST | Matsunami Glass Ind | FF-001 | Vetrino in vetro, per la misurazione dell'intensità delle macchie nere su un'ala |
| Vetro di copertura per microscopio quadrato 18 x 18 | Matsunami Glass Ind | C018181 | Vetrino coprioggetti, per la misurazione dell'intensità delle macchie nere su un'ala |
Riferimenti
- Carson, H. L., Hardy, D. E., Spieth, H. T., Stone, W. S. The evolutionary biology of the Hawaiian Drosophilidae. Essays in evolution and genetics in honor of Theodosius Dobzhansky. Hecht, M. K., Steere, W. C. , Springer (Meredith Corporation). New York. 437-543 (1970).
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. Drosophila: a guide to species id....
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Ristampe e permessi
