Questo articolo descrive una metodologia dettagliata per ottenere sezioni appiattite tangenziale da cortecce dei mammiferi e visualizzare moduli corticali usando istochimiche e immunohistochemical metodi.
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Articolo metodologico
Visualizzazione dei moduli corticali nelle cortecce dei mammiferi appiattite
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La corteccia del cervello dei mammiferi è parcellated in sottostrutture distinte o moduli. Moduli corticali in genere siano parallele al foglio corticale e possono essere delineate da alcuni metodi istochimici e immunohistochemical. In questo studio, segnaliamo un metodo per isolare la corteccia dai cervelli dei mammiferi e appiattirli per ottenere parallelo di sezioni al foglio corticale. Abbiamo ulteriormente evidenziare selezionato istochimiche e immunohistochemical metodi per elaborare questi appiattito tangenziale sezioni per visualizzare moduli corticale. Nella corteccia somatosensory di vari mammiferi, eseguiamo la citocromo ossidasi istochimica per rivelare il corpo mappe o corticale moduli che rappresenta diverse parti del corpo dell'animale. Nella corteccia entorinale mediale, un'area dove vengono generate le celle della griglia, utilizziamo metodi di immunohistochemical per evidenziare i moduli dei neuroni geneticamente determinati, che sono organizzati in un modello di griglia nel foglio di corticale attraverso le diverse specie. Nel complesso, mettiamo a disposizione un framework per isolare e preparare layer-wise appiattito sezioni corticale e la visualizzazione di corticale moduli utilizzando istochimiche e immunohistochemical metodi in un'ampia varietà dei cervelli dei mammiferi.
Introduzione
Alcuni dei più significativi cambiamenti nella struttura del cervello attraverso la filogenesi può essere osservata nella corteccia cerebrale. Nonostante le differenze significative, la corteccia degli animali segue uno schema comune e possa essere suddivisi in due modi distinti, di strati e zone1. Strati corticali siano parallele alla superficie del cervello e variano in numero da 3 strati in cortecce rettile2 a 6 strati in cortecce dei mammiferi1. Aree corticali sono invece distinte regioni della corteccia che corrispondono in gran parte alle funzionalità distinte, ad esempio, la cortec....
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Protocollo
Tutte le procedure sperimentali sono state eseguite secondo le linee guida tedesche sul benessere degli animali sotto la supervisione dei comitati etici locali (LaGeSo). Umano e pipistrello cervello dati sono stati derivati da Naumann et al. 5 la procedura riportata di seguito viene eseguita su un ratto adulto maschio di Wistar (ceppo: RJHan:WI).
1. aspersione ed estrazione del cervello
Nota: Al fine di ottenere un cervello omogeneamente fisso e privo di sangue, perfusione perfusione dell'animale è fortemente incoraggiata, come residui di sangue aumenta il segnale di fondo non speci....
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Risultati
Abbiamo ottenuto sezioni appiattite corticali della corteccia somatosensory in una varietà di cervelli ed elaborato li per la citocromo ossidasi istochimica visualizzare i moduli somatotopica che rappresenta diverse parti del corpo. Questo approccio comparativo permette di studiare le forze evolutive che corteccia forma, ad esempio, risultati altamente conservata rappresentazione delle vibrisse baffi in roditori e lagomorpha come botti21 (
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Discussione
Modularità nella corteccia cerebrale è stato identificato usando una varietà di tecniche. I primi studi in genere identificati corticale moduli o visualizzando delle cellule dense regioni, o un'assenza di fibre1. I metodi successivi hanno utilizzato la presenza di fasci dendritiche24, afferenze da una particolare regione25, o l'arricchimento di neurotrasmettitori26. Qui dimostriamo due tecniche, l'istochimica (i) del citocromo.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano che la ricerca è stata condotta in assenza di rapporti commerciali o finanziari che potrebbero essere interpretate come un potenziale conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da Humboldt Universität zu Berlin, il Bernstein Center for Computational Neuroscience Berlino, il centro tedesco per Malattie Neurodegenerative (DZNE), il Ministero federale tedesco dell'istruzione e ricerca (BMBF, Förderkennzeichen 01GQ1001A), NeuroCure e Gottfried Wilhelm Leibniz premio del DFG. Ringraziamo Shimpei Ishiyama per la progettazione grafica eccellente e Juliane Diederichs per l'eccellente assistenza tecnica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Colorazione con citocromo ossidasi | |||
| Citocromo c da cuore equino | Sigma-Aldrich | C2506 | |
| 3,3'Diaminobenzidina tetracloridrato idrato | Sigma-Aldrich | D5637 | |
| D(+)-Saccarosio | Carl Roth | 4621.1 | |
| Ammonio nichel (II) solfato esaidrato | Sigma-Aldrich | A1827 | |
| HEPES | Carl Roth | 9105.4 | |
| Name | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Recupero dell'antigene | |||
| Citrato trisodico diidrato | Sigma-Aldrich | S1804 | |
| Acido citrico monoidrato | Sigma-Aldrich | C1909 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffer/phosphate-buffered saline/prefix/PFA | |||
| Potassium dihydrogen phosphate | Carl | Roth 3904.2 | |
| Cloruro di sodio | Carl Roth | 9265.1 | |
| Di-Sodium idrogeno fosfato diidrato | Carl Roth | 4984.3 | |
| Paraformaldeide | Carl Roth | 0335.3 | |
| TRITON-X 100 | Carl Roth | 3051.3 | |
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Immunoistochimica | |||
| Calbindina D-28k purificata da intestino di pollo, Swant monoclonale di topo | RRID: AB_10000347 | ||
| Calbindina D-28k da calbindina D-28k di ratto ricombinante, Swant RRID policlonale di coniglio | : AB_10000340 | ||
| Frazione di albumina V, Carl senza biotina | Roth | 0163.4 | |
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Montaggio o congelamento dei mezzi | |||
| Fluoromount (immunofluorescenza) | Sigma-Aldrich | F4680 | |
| Eukitt ( istochimica) | Sigma-Aldrich | 03989 | |
| Mezzo di congelamento dei tessuti | Leica Biosystems | NC0696746 | |
| Name | Company | Numero di catalogo | Comments |
| Alcohol dehydration | |||
| Etanolo 100% | Carl Roth | 9065.3 | |
| Etanolo 96% | Carl Roth | P075.3 | |
| 2-Propanolo | Carl Roth | 6752.4 | |
| Sostituto dello xilene | Fluka | 78475 | |
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Dispositivi/strumenti | |||
| Microm HM 650V | Thermo Scientific | ||
| Jung RM2035 | Leica Biosystems | ||
| Dumont #55 Pinze - Inox | Fine Science Tools | 11255-20 | |
| Dumont #5 Pinze - Inox Biology Tip | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Dumont #5SF Ropeps - Inox Super Fine Tip | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Forbici per Ossa - 24 cm | Fine Science Tools | 16150-24 | |
| Friedman Rongeur | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Forbici smussate | Fine Science Tools | 14000-18 | |
| Forbici chirurgiche - Large Loops | Fine Science Tools | 14101-14 | |
| Forbici chirurgiche - Sharp-Blunt | Fine Science Tools | 14001-13 | |
| Forbici a iride fine | Strumenti per la scienza | 14094-11 |
Riferimenti
- Brodmann, K. Vergleichende Lokalisationslehre der Grosshirnrinde in ihren Prinzipien dargestellt auf Grund des Zellenbaues. , Barth. (1909).
- Naumann, R. K., et al. The reptilian brain. Curr Biol. 25 (8), R317-R321 (2015).
- Kaas, J. H.
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Ristampe e permessi
