L'obiettivo generale di questa procedura è quello di fornire una tecnica altamente riproducibile per la valutazione in vivo della perturbazione barriera emato - encefalica nei modelli del ratto del colpo ischemico.
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Articolo metodologico
Una valutazione In Vivo di rottura della barriera emato - encefalica in un modello del ratto del colpo ischemico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Ictus ischemico conduce a edema cerebrale di vasogenic e successive cranico primario, che è mediata attraverso la distruzione della barriera sangue - cervello (BBB). Ratti con il colpo ischemico indotto sono stati stabiliti e usati come modelli in vivo per studiare l'integrità funzionale della BBB. Rilevazione spettrofotometrica di blu di Evans (EB) nei campioni di cervello con lesione ischemica potrebbe fornire giustificazione affidabile per la ricerca e lo sviluppo delle modalità terapeutiche novelle. Questo metodo genera risultati riproducibili ed è applicabile in qualsiasi laboratorio senza necessità di attrezzature speciali. Qui, presentiamo una guida di riferimento tecnico e visualizzato sulla rilevazione di stravaso di EB dopo induzione del colpo ischemico in ratti.
Introduzione
L'edema vasogenic cervello dovuto rottura della barriera emato - encefalica (BBB) rimane una complicazione importante dell'ictus ischemico e un elemento determinante del tasso di sopravvivenza in pazienti ictus1,2. L'emato - encefalica (BBB), che è formata da cellule endoteliali dei capillari del cervello (BCECs) e composto da componenti distinti neurovascular (ad es., giunzioni strette tra BCECs, periciti, astroglial e cellule neuronali3), fornisce un specializzata e dinamica interfaccia tra il sistema nervoso centrale (SNC) e la circolazione del sangue periferico
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Protocollo
Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con le linee guida di Ardabil University of Medical Sciences Research Council per lo svolgimento di studi sugli animali (numero ordine etico: IR ARUMS. REC.1394.08). In questo studio visualizzato in quel momento, abbiamo usato ratti Sprague-Dawley maschio adulto (300-350 g) ottenuti da pascolo Institute (Teheran, Iran).
1. anestesia e flussometria
- Inducono anestesia utilizzando 4% isoflurane e mantenerla con isoflurano (1-1,5%) in una miscela di protossido di azoto (70% v/v) e ossigeno (30% v/v) per la durata dell'intervento chirurgico.
- Posizionare un animale anestetiz....
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Risultati
Non c'era differenza significativa nei livelli EB nell'emisfero destro rispetto all'emisfero sinistro dei ratti falsità-azionati (1,06 ± 0.1 µ g/g e 1,1 ± 0.09 µ g/g, rispettivamente). Come mostrato nelle figure 2A-2B, induzione di ischemia transitoria (90 min di ischemia / riperfusione 24 h) ha causato una differenza significativa nei livelli di EB (10,41 ± 0.84 µ g/g, p < 0,001) nell'emisfero sinistro di ratti ischemici, rispetto al rispettivo emisfero nei r.......
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Discussione
Finora, vari metodi come l'autoradiografia e rilevamento dei traccianti radioattivi24,25, microscopia di immunofluorescenza26,27ed EB stravaso tecnica20, 23 sono stati usati per valutare il danno della barriera emato - encefalica. Tintura EB è fortemente in grado di legarsi all'albumina del siero e viene utilizzata come tracciante per la rilevazi.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati al Vice Cancelliere per la ricerca della Ardabil University of Medical Sciences (Ardabil, Iran) per il sostegno finanziario (concedere No: 9607).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Isoflurano | Piramal | AWN 34041100 | 20 - 25 gradi C |
| 2,3,5-Trifeniltetrazolio cloruro (TTC) | Molekula | 31216368 | 4 anni |
| Sprague– Topi Dawley | Pasture Institute (Teheran, Iran) | 300-350g | |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
| Acido tricloroacetico | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | 2 anni |
| Bupivacaine HCl (0,5%) | Delpharm Tours | sotto 25 ° C | |
| Bupernorfina | Exir (Iran) | ||
| Carbonato di sodio | Sigma-Aldrich | 497-19-8 | |
| Cloruro di sodio | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Di- Sodio idrogeno fosfato | EMD Milliporo | 231-448-7 | |
| Cloruro di potassio | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
| Etanolo | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | |
| silicone (Xantopren) | Heraeus | EN ISO 4823 | |
| Attivatore universale plus | Heraeus | 66037445 | |
| Pinze per micro-dissezione | Stoelting | 52100-41 | |
| Forbice a molla | Stoelting | 52130-00 | |
| Operativo Forbici | Roboz | 52140-70 | |
| Matrice cerebrale | Stoelting | 51390 | |
| Macchina per anestesia per piccoli animali | | Kent Scientific | SS-01 | |
| Sistema da laboratorio di potenza | AD Instruments | ML880 | |
| Misuratore di portata laser Doppler | AD Instruments | ML191 | |
| Sistema di feedback riscaldante | Harvard Appratus | 72-7560 | |
| Micro morsetto vascolare | FineScience Tools | 18055-03 | |
| Filo di sutura Silk 5-0 | Ethicon | 682G | |
| Filo di sutura Ethilon 4-0 | Ethicon | EH6740G |
Riferimenti
- Jin, G., et al. Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia. Stroke. 39 (9), 2538-2543 (2008).
- Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. Mecha....
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Ristampe e permessi
