Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spettroscopia di correlazione di immagine

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

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Articolo metodologico

Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spettroscopia di correlazione di immagine

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DOI:

10.3791/57164

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2 agosto 2018

Adam C. Parslow¹^,² , Andrew H.A. Clayton³ , Peter Lock⁴ , Andrew M. Scott¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Tumour Targeting Laboratory, Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine, La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology, Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre, Austin Health, ⁶Department of Medicine, University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy, Austin Health

In questo articolo

Sommario

Gli anticorpi che si legano ai recettori bersaglio sulla superficie delle cellule possono conferire conformazione e alterazioni clustering. Questi cambiamenti dinamici hanno implicazioni per caratterizzare lo sviluppo di farmaci nelle cellule bersaglio. Questo protocollo utilizza la microscopia confocale e spettroscopia di correlazione di immagine attraverso ImageJ/FIJI per quantificare l'entità del recettore sulla superficie cellulare di clustering.

Abstract

Microscopia confocale fornisce una metodologia accessibile per catturare subcellulare interazioni critiche per la caratterizzazione e l'ulteriore sviluppo di pre-clinici agenti etichettati con sonde fluorescenti. Con gli avanzamenti recenti nella droga citotossica anticorpo basato su sistemi di consegna, comprendere le alterazioni indotte da questi agenti all'interno del Regno di aggregazione del recettore e di interiorizzazione è di importanza critica. Questo protocollo sfrutta la metodologia consolidata di immunocytochemistry fluorescente e la distribuzione di FIJI di open source di ImageJ, con la sua autocorrelazione integrato e funzioni matematiche di immagine, per eseguire la correlazione di immagine spaziale spettroscopia (ICS). Questo protocollo quantitates l'intensità di fluorescenza dei recettori con etichettati in funzione della zona di fascio del microscopio confocale. Questo fornisce una misura quantitativa dello stato di aggregazione della molecola bersaglio sulla superficie delle cellule. Questa metodologia è focalizzata sulla caratterizzazione di celle statiche con potenziale di espandersi in indagini temporale dell'aggregazione del recettore. Questo protocollo presenta una metodologia accessibile per fornire quantificazione degli eventi che si verificano alla superficie delle cellule, utilizzando ben stabilito non specializzati imaging apparato e tecniche di clustering.

Introduzione

Lo sviluppo di anticorpi terapeutici ha dimostrato notevole successo nel trattamento del tumore più tipi¹. I recenti progressi dei coniugati di anticorpo-farmaco (ADC) come meccanismi di consegna per composti citotossici ha ampliato i requisiti per comprendere le dinamiche delle interazioni anticorpo: recettore dalla cella di superficie². Dopo il successo di targeting di un anticorpo per il recettore di superficie delle cellule, questi complessi possono indurre modelli di aggregazione simili a quelle osservate nel ligando: anticorpo interazioni³. Alterazioni nell'aggregazione del recettore possono....