Articolo metodologico

Caratterizzazione di polimeri sintetici tramite matrice assistita Laser desorbimento ionizzazione tempo di spettrometria di massa (MALDI-TOF) di volo

DOI:

10.3791/57174

⸱

10 giugno 2018

 , 
1Department of Chemistry, Tulane University

In questo articolo

Sommario

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Un protocollo per la volta di ionizzazione matrix-assisted laser desorption di caratterizzazione di spettrometria di massa (MALDI-TOF MS) dei polimeri sintetici è descritto compreso l'ottimizzazione dell'acquisizione spettrale, preparazione del campione e l'analisi dei dati di volo.

Abstract

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Ci sono molte tecniche che possono essere impiegati nella caratterizzazione di omopolimeri sintetici, ma pochi forniscono utili informazioni per l'analisi di gruppo fine come tempo di ionizzazione matrix-assisted laser desorption volo della spettrometria di massa (MALDI-TOF MS). Questo tutorial illustra i metodi per l'ottimizzazione della preparazione del campione, acquisizione spettrale, e analisi dei dati dei polimeri sintetici utilizzando i parametri critici di MALDI-TOF MS. durante la preparazione del campione includono la selezione della matrice, identificazione di un sale di cationizzazione appropriato e messa a punto le proporzioni relative di matrice, catione e analita. I parametri di acquisizione, ad esempio la modalità (lineare o riflettore), polarizzazione (positivo o negativo), tensione di accelerazione e tempo di ritardo, sono anche importanti. Dato qualche conoscenza della chimica coinvolta sintetizzare il polimero e ottimizzando i parametri di acquisizione di dati e le condizioni di preparazione del campione, spettri dovrebbero essere ottenuti con sufficiente risoluzione e accuratezza di massa per consentire l'inequivocabile determinazione dei gruppi fine della maggior parte omopolimeri (masse inferiori a 10.000) oltre all'unità di ripetizione di massa e la distribuzione di peso molecolare complessiva. Anche se ha dimostrato su un insieme limitato di polimeri, queste tecniche generali sono applicabili a una più vasta gamma di polimeri sintetici per determinare la distribuzione di massa, anche se fine gruppo determinazione è possibile solo per gli omopolimeri con strette dispersità.

Introduzione

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Con i miglioramenti nella vita di tecniche di polimerizzazione, polimeri di precisione con gruppi terminali quantitativamente funzionalizzati sono sempre più disponibili1. Lo sviluppo simultaneo di azide-alchino e thiolene fare clic su componenti chimici ha permesso l'accoppiamento quasi quantitativa delle macromolecole di altre parti, fornendo accesso a una gamma di materiali ibridi2,,3,4 . Tuttavia, sono necessarie tecniche analitiche precisi per caratterizzare i materiali e i prodotti di queste reazioni di coniugazione di polimero partenza. Tempo di desorbimento/ionizzazione laser assistito da matrice volo della spettrometria di massa (MALDI-TOF MS) è una tecnica analitica di ionizzazione morbida prezioso per la caratterizzazione di polimeri perché può generare ioni di polimero in uno stato di singola carica con il minimo frammentazione5,6. MALDI-TOF MS ha importanti vantaggi su altri metodi di caratterizzazione dei polimeri convenzionali perché può fornire spettri di massa con risoluzione del n-mers individuali all'interno della distribuzione di massa di polimero. Di conseguenza, tali spettri di massa può fornire informazioni precise circa il peso molecolare medio, ripetere unità di massa e peso molecolare dispersità7, che a sua volta può delucidare concorrenti meccanismi di polimerizzazione come trasferimento di catena8 . Tuttavia, MALDI-TOF MS è particolarmente potente a fornire informazioni su polimero fine gruppi9,10, che può essere utilizzato per confermare la fine gruppo modifiche10,11 e altri trasformazioni12 come polimero cyclizations11,13. Altrettanto importante, la relativamente piccola quantità di analita (sub-microgrammi) necessaria per la spettrometria di massa analisi rende questa tecnica utile per la caratterizzazione quando siano disponibili solo traccia quantità di materiale.

L'analisi MALDI-TOF MS Polimeri può essere diviso in quattro distinte fasi: preparazione, calibrazione dello strumento, spettrale acquisizione e analisi dei dati di esempio. Preparazione del campione è il passo più essenziale per la generazione ottimizzata di spettri di massa MALDI-TOF e si verifica prima che il campione è stato introdotto in strumento14,15. La selezione di una matrice appropriata con parametri di solubilità simili come il polimero dell'analita è fondamentale per ottenere spettri di massa MALDI-TOF di alta qualità e linee guida per la selezione della matrice sono state segnalate altrove14,15, 16,17. Un database di polimero MALDI "ricette" per la preparazione del campione è stato anche pubblicato online18. Per i nuovi polimeri, selezione della matrice può essere affrontato prima comprendere la solubilità del polimero e selezionando una matrice con simili solubilità parametri14,19. Polimeri con affinità protonica alta possono essere protonata dalla maggior parte delle matrici14 (che spesso contengono gruppi carbossilici), ma per altri polimeri, un agente di cationizzazione è richiesto14. Ioni alcalini adducono bene con ossigeno-contenere specie (ad es. poliesteri e polieteri), mentre gli idrocarburi insaturi (es. polistirolo) addotto con metalli di transizione quali gli ioni argento e rame14, 19. perché i campioni di polimero in questo esperimento contenevano atomi di ossigeno nella spina dorsale, sodio o potassio trifluoroacetato (TFA) sono stati usati come l'agente di cationizzazione. Dopo aver selezionati gli agenti di matrix e cationizzazione, le proporzioni relative di analita, agente cationico e matrice devono essere attentamente ottimizzate per garantire alto segnale/disturbo. In questa procedura, i parametri per la preparazione del campione sono già stati ottimizzati, tuttavia una procedura di ottimizzazione empirica campione (passo 1.4.1., Figura 1) che varia sistematicamente le concentrazioni dei tre componenti (analita, cazione e matrice) è efficace per la rapida determinazione loro rapporti ottimali.

Acquisizione dati richiede anche l'ottimizzazione di un numero di parametri. I parametri più importanti includono la modalità ioni positivi o negativi dello spettrometro, la modalità di funzionamento dello strumento (lineare rispetto al riflettore), la tensione di accelerazione e il tempo di ritardo di estrazione. Un altro modo che la risoluzione può essere aumentata è attraverso l'utilizzo di "reflectron" modalità20,21,22,23. Modalità reflectron essenzialmente raddoppia la traiettoria di volo degli ioni al rilevatore riflettendo gli ioni all'estremità del tubo di volo indietro verso un rilevatore nei pressi della sorgente mentre rifocalizzazione ioni con diversi momenti, e quindi aumentando la risoluzione però diminuendo la potenza del segnale. Inoltre, gli spettri ad alta risoluzione più alti ottenibile facendo diminuire la potenza del laser che riduce al minimo il rapporto segnale-rumore facendo diminuire il numero e l'energia delle collisioni e quindi riducendo la frammentazione e la disomogeneità cinetica24. Sintonizzando tutti questi parametri, gli ioni possono essere focalizzati per minimizzare l'effetto di eventuali disomogeneità nella posizione iniziale o la velocità che si verifica durante il processo di desorbimento laser. Quando i parametri di acquisizione sono ottimizzati, isotopici risoluzione spesso possa essere raggiunti per ioni con masse superiori a 10.000 Da, anche se questo dipende anche la lunghezza del tubo di volo e il design dello strumento. Più organici composti che contengono almeno un eteroatomo sono inclini a complessante con cationi alcalini quali litio, sodio e potassio. Molti dei metalli dell'alcali sono monoisotopes o degli isotopi limitati e pertanto non amplino la distribuzione.

Mentre i parametri dello strumento possono essere regolati per ottimizzare la precisione di dati, precisione dei dati avviene solo con un' appropriata calibrazione11. Proteine e peptidi erano originariamente utilizzati come calibranti grazie alla loro monodispersity e disponibilità, ma soffrono di stabilità variabile e la prevalenza di impurità25. Alternative più conveniente e stabile hanno incluso i cluster inorganici e polidispersi polimeri26,27,28,29. Purtroppo, queste funzionalità alternative disperdere le masse, che complicano le assegnazioni di massa, come pure le più piccole masse in generale, che li rende utili solo per tarature riportate Da 10.000. Per combattere questi problemi, Grayson et al. 25 ha sviluppato un sistema di calibrazione di MS Dendrimero-based, poliestere monodispersi, che vanta sia vasta matrice e solvente compatibilità, stabilità di durata (> 8 anni) e minor costo di produzione. Basato sui punti di forza di questo sistema, è stato selezionato come il calibratore per questi esperimenti.

Ci sono due tipi principali di calibrazione: interne ed esterne30. Effettuare la calibrazione esternamente, standard con le masse che staffa che dell'analita sono disposto sul piatto di destinazione MALDI in un campione diverso rispetto l'analita per generare uno spettro di massa separato da cui può essere generato un file di calibrazione. D'altra parte, una maggiore precisione può essere realizzata spesso con una calibrazione interna, che coinvolge il calibratore di miscelazione con l'analita per ottenere uno spettro ibrido con segnali calibratore sia dell'analita. Nella procedura descritta di seguito, è stata implementata una calibrazione esterna. Dopo la corretta calibrazione della bilancia massa, dati di massa accurati analita possono essere acquisiti. Per garantire la più accurata calibrazione, è importante che l'acquisizione dei dati si verifica subito dopo la calibrazione.

Infine, una volta calibrato l'ottimizzata, insiemi di dati sono stati acquisiti e i dati sono stati analizzati per fornire informazioni strutturali sui campioni di polimero. La spaziatura tra n-mers all'interno della distribuzione di polimeri in grado di fornire misure accurate dell'unità ripetitiva massa. Il peso molecolare medio numerico (Mn) e altri calcoli di distribuzione di massa (ad es., Mw (peso molecolare medio ponderale) e Đ (dispersità)) può essere determinata anche dalla distribuzione segnale nel (spettri di massa fase 4.2 per i calcoli). Forse in modo più univoco, nel caso di omopolimeri, la somma delle masse di gruppo fine può essere confermata determinando l'offset della distribuzione polimero per quanto riguarda la massa delle unità ripetuta da solo. Gli spettri di massa MALDI-TOF ricco di informazioni forniscono dati di caratterizzazione prezioso che sono complementari alle più tradizionali tecniche di caratterizzazione di polimeri come cromatografia di esclusione di formato, spettroscopia infrarossa-trasformata di Fourier, e risonanza magnetica nucleare.

Protocollo

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Attenzione: Tutte le reazioni sono state eseguite in una cappa aspirante. Si prega di leggere tutti i materiale sicurezza (MSDS) per qualsiasi prodotto chimico utilizzato e prendere le opportune precauzioni.

1. preparazione del campione

  1. Preparazione delle soluzioni stock matrice
    1. Sciogliere 20 mg di acido α-ciano-4-idrossicinnamico (HCCA) in 1 mL di tetraidrofurano-Urotropine non (THF) e agitare fino a completa dissoluzione.
    2. Sciogliere 20 mg di acido 2,5-dihydroxybenzoic (DHB) in 1 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
  2. Preparazione della soluzione stock cationi alcalini
    1. Sciogliere 2 mg di sodio trifluoroacetato (NaTFA) in 1 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
    2. Sciogliere 2 mg di potassio trifluoroacetato (KTFA) in 1 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
  3. Preparazione delle soluzioni madri analita
    1. Esempio 1: Sciogliere 2 mg di acido poli (glicol etilenico) 2-amminoetil etere acetico (Mn = 5000) in 0,5 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
    2. Esempio 2: Sciogliere 2 mg di bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) in 0,5 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
    3. Esempio 3: Sciogliere 2 mg di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) in 0,5 mL di THF e agitare fino a completa dissoluzione.
  4. Preparazione di miscele campione per analisi
    1. Preparare una serie di soluzioni con matrix, analita e catione soluzione pur variando le proporzioni relative dei componenti tale che miscele di nove campioni unici sono realizzate. Ad esempio, conservazione della quantità di costante di matrice aggiunta soluzione stock (ad es.., 10 µ l), variare la quantità di analita soluzione di un fattore tre (ad es., 45, 15 e 5 µ l), pur anche variando la quantità di soluzione cazione di un fattore tre (ad es. ., 9, 3 e 1 µ l). Questi campioni resa efficacemente una 3x3 griglia di campioni con le due variabili di concentrazione differente su x e y assi (Figura 1).
    2. Per l'esempio rappresentativo, combinare 15 µ l della soluzione poly(L-lactide), con 15 µ l della soluzione DHB e 1 µ l della soluzione NaTFA.
    3. Aggiungere 1 μL di ogni composto di soluzione su un singolo campione bene sulla piastra MALDI (Figura 2). Aggiungere i campioni in modo incrementale in piccole porzioni per impedire che il campione che scorre fuori del pozzo di campione, permettendo ogni aliquota di evaporare a secchezza prima di aggiungere ulteriori esempi.
      Nota: Per più alto punto di ebollizione solventi, un fucile ad aria compressa può essere necessario per accelerare l'evaporazione del solvente, anche se deve essere usata cautela per evitare di riscaldare il piatto del campione, che potrebbe causare la piastra a deformarsi.
  5. Preparazione di campioni standard per la calibrazione
    1. Preparare gli standard di calibrazione utilizzando il protocollo suggerito fornitore.
      Nota: Dendrimero calibranti sono stati selezionati per questo studio e sono disponibili come i dendrimeri puro o premiscelate con matrix, calibratore e catione a rapporti ottimizzati.

2. dati acquisizione ottimizzazione

  1. Avvio di acquisizione dati
    1. Aprire il software di acquisizione dati "FlexControl".
    2. Espellere la piattaforma per consentire il caricamento della piastra bersaglio premendo il "figure-protocol-1" pulsante.
    3. Posizionare delicatamente la piastra con i campioni di calibratore e analita caricati sulla piattaforma con l'orientamento appropriato.
    4. Utilizzare il software di acquisizione per iniettare la piastra sulla piattaforma premendo il "figure-protocol-2" di nuovo il pulsante.
    5. Selezionare un metodo di acquisizione di dati appropriati (modalità positiva acquisizione metodo) premendo File | Selezionare il metodo.
      Nota: Per la maggior parte dei campioni di polimero, tra cui il nostro rappresentante analiti, ionizzazione è previsto tramite complessazione con un catione e, pertanto, un metodo di acquisizione di modalità positiva è più appropriato. A seconda dello strumento, per intervalli di massa inferiori (500-10.000 Da) o quando è richiesta maggiore risoluzione, selezionare un file di metodo modalità riflettore. Per più alto peso molecolare campioni o quando maggiore sensibilità del segnale è necessaria e bassa risoluzione è accettabile, selezionare un modalità lineare metodo file.
    6. Prima dell'acquisizione dei dati, assicurarsi di un'opportuna serie di massa per la raccolta dati è selezionato-idealmente che la gamma massa metà della massa minima includerà la distribuzione prevista nonché doppia la massa più alta nella distribuzione prevista. Controllare questo facendo clic sulla scheda rilevazione e visualizzazione Gamma di massa.
      Nota: Questo aiuta ad per assicurare che il segnale da frammenti di degradazione di peso molecolare più bassi o più alto peso molecolare aggregati (dimero) che possono essere presenti nel campione sono incluse nel set di dati. Si noti inoltre che oligomeri di matrice sono notati frequentemente con alte intensità del segnale nella maggior parte dei spettri di massa MALDI-TOF, fornendo il rumore ad alta intensità con masse alte come Da 1.000, che complica analisi sotto questa massa. Anche se la taratura è necessario prima di ottenere un set di dati finale, un file di calibrazione accurata possa essere acquisito solo se vengono utilizzati parametri di acquisizione identici come quelli ottimizzati per l'analita in particolare. Di conseguenza, un preliminare ottimizzazione dello spettro di massa di analita è necessaria prima della calibrazione, seguita dalla riacquisizione di uno spettro di massa di analita calibrato.
  2. Acquisizione dati preliminari
    1. Il software di acquisizione, selezionare la posizione sulla piastra di destinazione che corrisponde all'analita desiderata.
    2. Avviare la raccolta dei dati mentre si sposta l'obiettivo laser intorno al campione per massimizzare il segnale. Per avviare la raccolta dei dati, premere il tasto Start.
      Nota: Il laser può esaurire la matrice in una determinata posizione dopo ripetuti campionamenti.
    3. Utilizzando la barra di scorrimento sul lato sinistro della finestra di fotocamera, regolare la potenza del laser, tale che la potenza minima necessaria per ottenere una risoluzione isotopica è raggiunto.
      Nota: Quando si analizzano campioni multipli per confermare il rapporto ottimale di analita, catione e matrice, utilizzare la stessa potenza del laser su ciascuno dei campioni dell'analita per determinare quale campione presenta il miglior rapporto segnale/rumore per quei parametri di acquisizione. Continua ottimizzazione futura acquisizione con l'esempio che sembra mostrare il miglior rapporto segnale-rumore.
  3. Ottimizzazione di acquisizione dati
    1. Zoomando su un singolo picco nel mezzo della gamma massa di interesse, ottimizzare la risoluzione regolando la differenza nelle tensioni di accelerazione (per gli strumenti in questo studio, ciò comporta la regolazione del valore di "IS2"), che è in spettrometro scheda.
      Nota: Questo è più rapidamente ottimizzato variando il valore di IS2 a grandi passi, prendendo nota di cui valore genera la migliore risoluzione (cioè., il più piccolo grande ampiezza di picco a metà intensità massima del segnale) e quindi ottimizzando ulteriormente a piccoli passi di il valore di IS2. In genere, il valore ottimale di IS2 è superiore (più vicino a IS1) per polimeri di massa basse, inferiore e per i polimeri di massa elevati.
    2. Se lo si desidera, aumentare la risoluzione utilizzando la modalità reflectron.
      Nota: Modalità Reflectron consente la compensazione delle discrepanze nella velocità iniziale di ioni della stessa m/z forzando gli ioni di velocità più elevati dello stesso valore m/z in un percorso più lungo al rivelatore. Questo aumento nel percorso verso il rivelatore consente gli ioni più lenti dello stesso valore m/z per arrivare al rivelatore simultaneamente, concentrandosi in modo efficace gli ioni per una maggiore risoluzione. Anche se la modalità reflectron in genere migliora la risoluzione del segnale, per campioni con intensità di segnale debole, modalità lineare potrebbe essere necessario al fine di visualizzare i dati.
    3. Infine, ottimizzare la potenza del laser riducendo la potenza del laser più bassa possibile mentre ancora generando un ragionevole rapporto segnale-rumore (ad es., segnale di rumore di circa 10).
      Nota: Perché potenze laser superiori generalmente riducono la risoluzione e possono indurre la frammentazione, spettri di massa con migliore qualità vengono acquisiti utilizzando la potenza del laser ridotta ma un maggior numero di scansioni.
    4. Una volta ottimizzati i parametri di acquisizione, è possibile salvare gli spettri di massa non calibrati selezionando il File e quindi Salvare lo spettro di File come. Per calibrazione esterna, una nuova acquisizione del calibratore sotto questi parametri identici, ottimizzati deve essere eseguito prima che inizi una nuova acquisizione per generare lo spettro di massa calibrato dell'analita.

3. MALDI calibrazione

  1. Acquisizione di spettro di massa di calibrazione
    1. Utilizzando i parametri di acquisizione già ottimizzati per l'analita, acquisire uno spettro di massa ottimizzato del campione di massa standard.
      Nota: Idealmente, il set di calibrazione dovrebbe includere uno standard sopra la gamma di interesse, uno sotto e almeno uno nell'intervallo di interesse. La precisione della taratura è meglio se tutti i parametri di acquisizione sono identici per entrambi i campioni.
  2. Creare un file di calibrazione
    1. Assicurarsi che qualsiasi calibrazione esistente viene annullata o in grado di essere sovrascritti premendo Invalidare calibrazione sotto lo spettrometro tab.
    2. Utilizzando gli stessi parametri di acquisizione (ad es., laser di potenza, tensione IS2), spostare il laser verso il pozzo di campione contenente il calibratore (ad es., Dendrimero standard, peptide) selezionando il corrispondente bene con il cursore e acquisire una spettro premendo Start.
  3. Una volta acquisita sufficiente segnale, premere il tasto Start per terminare l'acquisizione dei dati.
  4. Una volta che uno spettro di massa del calibratore è stato acquisito, selezionare il menu a discesa Elenco di controllo di massa nella scheda calibrazione che corrisponde a quella standard di calibrazione. L'elenco di controllo di massa appropriato avrà le masse di riferimento del calibratore selezionato con il catione appropriato.
    Nota: Questi dovrebbero essere disponibili direttamente dall'offerente calibratore e assicurarsi di utilizzare i valori di massa monoisotopic quando risoluzione isotopica è realizzata (ad es., modalità di reflector sotto m/z = 5000), e una massa media i valori quando risoluzione isotopica non possono essere realizzati (ad esempio, modalità lineare sopra m/z = 5000),
  5. Prima corrispondenza il picco di riferimento corrispondente ad ogni picco di calibratore selezionato, assicurarsi che un picco appropriato scegliere protocollo viene utilizzato selezionando la scheda elaborazione .
    Nota: Protocolli di raccolta di picco possono variare in base su risoluzione spettrale. Per un calcolo medio di massa, il software dovrebbe prendere la massa media attraverso tutta la serie di picchi isotopici. Per un calcolo massa monoisotopic, il software dovrebbe essere impostato per calcolare la massa esatta del solo primo picco isotopico.
  6. Applicare la massa di riferimento dall'elenco di controllo di massa per il segnale corrispondente per lo spettro di massa del calibratore selezionando l'area a sinistra del picco di interesse e quindi facendo clic sulla massa corrispondente nell'elenco di controllo da applicare. Continuare il processo per i picchi di calibratore rimanenti.
    Nota: Per la calibrazione più accurata e precisa, impiattare i campioni dell'analita e calibratore ravvicinati come possibile destinazione, perché sottili variazioni in altezza della piastra di destinazione possono influenzare la precisione della calibrazione.
  7. Una volta che la scala di massa per i parametri di acquisizione ottimizzate sono stati calibrati, riacquisire lo spettro dell'analita.

4. dati analisi e interpretazione

  1. Picco di prelievo
    1. Aprire lo spettro dell'analita nel software di analisi dati (FlexAnalysis).
    2. Zoomare su un picco a identificare se risoluzione isotopica è stato realizzato selezionando il pulsante Zoom in intervallo-X .
    3. Premere massa elenco | Trovare per selezionare vette. Se il picco di monoisotopic viene risolto, è possibile selezionare questo primo picco nella distribuzione isotopica per determinare la sua massa utilizza un protocollo di picco-picking monoisotopic. Se il picco di monoisotopic non viene risolto, utilizzare un picco medio di massa raccolta protocollo e determinare la massa media di tutta la distribuzione isotopica.
    4. Continuare questo picco raccolta processo per ogni n-mer nella distribuzione polimero.
  2. Calcoli di analisi gruppo polimero caratterizzazione e fine
    Nota: Se usato correttamente, MALDI-TOF MS può fornire preziosi dati accurati per i calcoli di distribuzione di massa dei polimeri. Si noti che i dati di distribuzione di massa sono accurati solo quando dispersità del campione di polimero è relativamente basso (ad es., circa Đ= 1.3 o qui sotto).
    1. Calcolare il peso molecolare medio numerico, la massa media per quanto riguarda il numero di moli di ogni frazione di massa, utilizzando la formula:
      figure-protocol-3
      dove Nho = numero di molecole di peso molecolare specifico e Mio = il peso molecolare specifico di tali molecole.
    2. Calcolare il peso molecolare medio di peso, la massa media per quanto riguarda il peso di ogni frazione di massa, utilizzando la formula:
      figure-protocol-4
      dove N ho = numero di molecole di peso molecolare specifico e M io = il peso molecolare specifico di tali molecole.
    3. Una volta che sono stati calcolati sia il Mw e Mn , quantificare l'ampiezza della distribuzione del peso molecolare usando il rapporto Mw/mn che si chiama dispersità, Đ.
    4. La caratteristica più unica e potente di analisi dei dati di MALDI-TOF MS è la capacità di determinare o confermare i gruppi terminali di omopolimeri. Determinare il gruppo di fine riorganizzando la seguente formula per la massa osservata di un n-mer nello spettro di massa (Mn-mer):
      Mn-mer = n (MRU ) + MEG1 + MEG2 Mdello ione
      dove n = grado di polimerizzazione,
      MEG1 = massa del gruppo α-fine,
      MEG2 = massa del gruppo ω-fine,
      MRU = massa dell'unità ripetitiva del polimero,
      e Mdello ione = massa dello ione che complessi con il polimero.

Risultati

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Esempio 1: Un esempio di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) (Figura 3) è stata analizzata utilizzando trifluoroacetato di potassio come un agente di cationizzazione con HCCA come la matrice. Lo spettro ha esibito l'atteso K+ addotti così come quelli osservati da residuo Na+.

MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione (Figura 3) di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000). Poiché il picco di monoisotopic (che comprende esclusivamente gli isotopi elementali più abbondanti, vale a dire 12C, 1H 16O e 14N) non è sufficientemente risolto per consentire la sua identificazione, viene utilizzato un protocollo di un picco di prelevamento che determina la massa media attraverso l'intera distribuzione isotopica per ogni picco di n-mer. Allo stesso modo, tutti i calcoli teorici sono determinati utilizzando media, anziché monoisotopic, masse per ogni elemento. Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, software di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche di distribuzione della massa di polimero: Mn: 4700, Mw: 4710, Đ: 1.00.

Al fine di confermare l'identità dei gruppi fine, un singolo n-mer (104) è stato selezionato per ulteriori analisi (Figura 4). Come con i calcoli di distribuzione di massa, perché non è possibile risolvere il picco di monoisotopic, valori medi di massa sono stati usati per i calcoli successivi. Il valore della massa teorico del 104-mer di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido è composta la massa dell'unità di ripetizione (44.0530 × 104) più la massa del gruppo fine α-amminico (+ 16.02300) e la massa del gruppo fine ω-carbossilico (+ 59.0440) oltre che le massa del catione potassio (+ 39.09775) che produce una massa totale 104-mer di 4695.67675. Il valore di massa osservato per il 104-mer + K+ è 4695.5 che corrisponde al valore teorico, dato la precisione dei calcoli di massa media. La serie di più piccoli, offset picchi nello spettro corrisponde al polimero ionizzanti con sodio dove il valore di massa teorico del 104-mer è composta la massa dell'unità di ripetizione (44.0530 × 104) più la massa del gruppo fine α-amminico (+ 16.02300) oltre che le massa di gruppo fine ω-carbossilico (+ 59.0440) e alla massa del catione sodio (+ 22.98922) dando una massa totale 104-mer di 4679.56822. Il valore di massa osservato per il 104-mer + Na+ è 4679.4 che è solo 0,2 Da diverso dal valore teorico. Più accurate determinazioni di fine gruppo massa può essere determinata misurando la media attraverso picchi multipli è stato discusso altrove11.

L'acido acetico di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere (Mn = 5000) campione mantenuto la sua distribuzione stretta quando selettivamente funzionalizzati di reazione (Figura 5) con 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) (Figura 6). Il sodio spettro ha esibito addotti e usato HCCA come la matrice.

MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione (Figura 6) di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) quando modificato con DNFB. Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, software di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche di distribuzione della massa di polimero: Mn: 4940, Mw: 4950 Đ: 1.00.

Al fine di determinare se completa funzionalizzazione di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) era accaduto con DNFB, un singolo n-mer della distribuzione è stata selezionata per l'analisi (Figura 7). La massa teorica del 104-mer funzionalizzati di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido ha reagito con 2,4-dinitrofluorobenzene è composto di 44.0530 × 104 (la massa delle unità di ripetizione) + 182.115 (massa del gruppo α-amminico ha reagito con 2,4 - dinitrofluorobenzene) + 59.044 (massa del gruppo carbossilico) + 22.98922 (massa del catione sodio) = 4845.66022. Il valore di massa osservato per n = 104 è 4845.8 che è di -0,1 Da diverso dal valore teorico. Questo accordo stretto tra i valori teorici e osservati è indicativo di una modifica completa della materia prima al prodotto, ma più significativamente, la mancanza di segnali associati con il materiale di partenza, 4811.72722 e 4855.78022 per questo intervallo di massa, o eventuali ulteriori sottoprodotti conferma la funzionalizzazione selettiva quantitativa dell'ammina. Un secondo picco si osserva a 4823.8 che corrisponde al 103-mer del polimero funzionalizzato, ma con la perdita del protone sull'acido carbossilico fine gruppo che complessi con un altro ione sodio con una massa teorica di 4823.58899 che ha differenza-0,2 Da.

Esempio 2: Un campione di bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) (Figura 8) è stata analizzata utilizzando sodio trifluoroacetato come un agente di cationizzazione e HCCA come la matrice e solo ha esibito l'atteso Na+ addotti.

A causa della risoluzione raggiunta in questa gamma di massa inferiore, le cime di monoisotopic per ciascuna delle n-mers potrebbero facilmente essere risolto, e così un picco di monoisotopic raccogliendo il protocollo è stato selezionato (in media solo il segnale di massa del primo picco nella distribuzione isotopica ) e tutti i relativi calcoli utilizzati le masse di monoisotopic di ogni elemento. MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione (Figura 8) di bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000). Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, software di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche di distribuzione della massa di polimero: Mn: 1940, Mw: 1950, Đ: 1.01.

Al fine di confermare la fine della funzionalizzazione di gruppo, è stato selezionato un singolo n-mer (42) (Figura 9). Come con le distribuzioni di massa determinata sopra, masse monoisotopic sono state utilizzate perché le cime di monoisotopic sono stati ben risolte in distribuzione isotopica di ogni n-mer. Il valore della massa teorico del 42-mer di poliossietilene bis(azide) corrisponde a 44.02621 × 42 (la massa delle unità di ripetizione), 42.00922 (massa del gruppo azido fine) + 70.04052 (massa del gruppo di fine azidoethyl) + 22.98922 (massa del catione sodio) = 1984.13978. Il valore di massa osservato per n = 42 è 1983.95 che è Da 0,19 diverso dal valore teorico. Dovrebbe essere notato che soprattutto alle potenze laser superiori, la funzionalità di azide può esibire metastabili frammenti; Tuttavia, questo non è stato osservato in questo specifico caso31.

Il bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) campione mantenuto sua distribuzione stretta quando selettivamente funzionalizzati da una reazione di cicloaddizione catalizzata rame azide-alchino (Figura 10) con 1-Etinil-4-fluorobenzene(EFB) (Nella figura 11) per produrre un gruppo di 4-fluorophenyltriazolyl (FPT). Gli spettri hanno esibito l'atteso Na+ addotti da utilizzando sodio trifluoroacetato come un agente di cationizzazione e HCCA come la matrice.

MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione (Figura 11) di bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) dopo la funzionalizzazione con EFB. Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, software di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche del polimero: Mn: 2240, Mw: 2250, Đ: 1.00.

Per confermare la completa funzionalizzazione del campione, masse di monoisotopic sono state utilizzate per analizzare un singolo selezionato n-mer (42) (Figura 12). Il valore della massa teorico del 42-mer di poliossietilene bis(azide) ha reagito con 1-Etinil-4-fluorobenzene corrisponde ad 44.02621 × 42 (la massa delle unità di ripetizione), 162.04675 (massa del gruppo fine FPT) + 190.07805 (massa del gruppo FPT etilico fine con 1-Etinil-4-fluorobenzene) + 22.98922 (massa del catione sodio) = 2224.21484. Il valore di massa osservato per n = 42 è 2224.16 che è 0,05 Da diverso dal valore teorico.

Esempio 3: Un campione di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) (Figura 13) è stata analizzata utilizzando sodio trifluoroacetato come un agente di cationizzazione e solo ha esibito l'atteso Na+ addotti e DHB sotto forma di matrice.

MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) (Figura 13). Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, il programma di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche del polimero: Mn: 2310 Mw: 2360, Đ: 1.02.

Per confermare la completa funzionalizzazione del campione, masse di monoisotopic sono state utilizzate per analizzare un singolo selezionato n-mer (26) (Figura 14). Il valore della massa teorico del 26-mer di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) corrisponde a 72.02113 × 26 (la massa delle unità di ripetizione), 17.00274 (massa del gruppo dell'idrossile) + 61.0112 (massa del gruppo end ω-tiolo) + 22.98922 (massa del sodio cazione) = 1973.55254. Il valore di massa osservato per n = 26 è 1973.62 che è -0,07 Da diverso dal valore teorico. Un segnale inferiore è osservato a 2045.74 che corrisponde a 72.02113 × 27 (la massa delle unità di ripetizione), 17.00274 (massa del gruppo idrossilico fine) + 61.0112 (massa del gruppo end ω-tiolo) + 22.98922 (massa del catione sodio). La massa teorica è 2045.57367 che è una differenza di 0,17 dalla massa osservata. Questa piccola intensità, dispari ripetere unità è indicativo di transesterificazione durante la polimerizzazione di acido lattico di apertura dell'anello. Un terzo picco molto minore è osservato a 2057.73. Si tratta di -0,14 Da diversi rispetto alla massa teorica di un poly(L-lactide) con un gruppo di fine di acido carbossilico (piuttosto che il gruppo di fine del tiolo) con una massa teorica di 72.02113 × 27 (la massa delle unità di ripetizione) + 17.00274 (massa del gruppo idrossilico fine) + 73.02895 (massa dell'acido carbossilico) + 22.98922 (massa del catione sodio) = 2057.59142. Questo ulteriori impurità minore è probabilmente la conseguenza dell'iniziazione dall'acqua durante la polimerizzazione del monomero lattide di apertura dell'anello.

Poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) campione mantenuto sua distribuzione stretta quando selettivamente funzionalizzati da una reazione tiolo-ene (Figura 15) con maleimide (Figura 16). Gli spettri hanno esibito l'atteso Na+ addotti da utilizzando sodio trifluoroacetato come un agente di cationizzazione e DHB come la matrice.

MALDI-TOF MS conferma la stretta distribuzione di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) dopo una reazione di tiolo-ene con maleimide (Figura 16). Utilizzando le equazioni dal passaggio 4, software di analisi è stato utilizzato per calcolare le seguenti caratteristiche del polimero: Mn: 2310 Mw: 2340, Đ: 1.01. Si deve osservare che la diminuzione di Mn e Mw rispetto al materiale di partenza è a causa di pregiudizi di ionizzazione (una delle carenze del MALDI-TOF MS). Quando la modifica per il materiale di partenza è relativamente piccolo (~ 97 Da in questa particolare modifica) e il dispersità diminuisce post- modificazione, MALDI-TOF MS calcoli di peso molecolare medio possono diventare meno accurati.

Per confermare la completa funzionalizzazione della poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) con maleimide via una reazione tiolo-ene, masse di monoisotopic sono state usate per analizzare un singolo selezionato n-mer (26) (Figura 17). Il valore della massa teorico del 26-mer di poly(L-lactide) tiolo terminato corrisponde a 72.02113 × 26 (la massa delle unità di ripetizione), 17.00274 (massa del gruppo idrossilico fine) + 158.02757 (massa di ω-tiolo fine gruppo legato a maleimide) + 22.98922 (massa della catione sodio) = 2070.56891. Il valore di massa osservato per n = 26 è 2070.54 che è 0,03 Da diverso dal valore teorico. La stessa specie ionizzanti con potassio inoltre è osservato alle 2086.49, che corrisponde ad una forma di differenza Da 0,05 la massa teorica. Un picco molto piccolo è osservato a 2167.58 che corrisponde a 72.02113 × 28 (la massa delle unità di ripetizione), 22.98922 (massa del catione sodio) + 17.00274 (massa del gruppo idrossilico fine) + 72.02168 (massa dell'anione carbossilato) + 38.96371 (massa del catione potassio). La massa teorica è 2167.56844 che è un -0,01 differenza dalla massa osservata ed è indicativo della stessa impurità traccia da iniziazione di acqua che è stata osservata nel materiale di partenza. Questo polimero esibisce ionizzazione con un equivalente di sodio, uno di potassio e la perdita di un protone. La perdita del protone acido carbossilico e complessazione con due cationi è un modo comune di ionizzazione per polimeri funzionalizzati acidi monocarbossilici. È importante notare che lo stesso spostamento in massa che è osservato per i prodotti di reazione tiolo-ene non accadere per questo composto acido carbossilico terminazione che indica ulteriormente che mancava il gruppo end tiolo per subire la reazione di funzionalizzazione.

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Figura 1:3 x 3 griglia per la determinazione del rapporto di esempio. Utilizzando una 3x3 griglia di campioni, le concentrazioni relative di cationizzazione agente-analita-matrice possono essere sistematicamente variate per determinare empiricamente una preparazione del campione ottimizzato. Questo è in genere fatto tenendo una delle tre variabili costanti (15 µ l di soluzione di analita) aumentando la quantità di altri due (agente di cationizzazione (asse y) e matrix (asse x)) componenti di set multipli (3 volte nell'esempio raffigurato). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 2: piastra MALDI-TOF MS. La piastra di destinazione MALDI-TOF MS è una placca di metallo che tiene i campioni di MALD-TOF MS nei singoli pozzetti per l'analisi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 3: spettro di massa MALDI-TOF di campione 1. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn= 5000) ionizzato con Na+ e K+. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 4: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di campione 1. Questo spettro mostra una singola unità di ripetizione di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) per l'analisi di gruppo fine. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 5: schema di reazione per la modifica dell'esempio 1. Per confermare i gruppi terminali del materiale di partenza, poly(ethylene glycol) 2-amminoetil etere acetico acido è stato reagito con 2,4-dinitrofluorobenzene (noto anche come reagente di Sanger). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 6: spettro di massa MALDI-TOF di modificazione dell'esempio 1. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) funzionalizzati con 2,4-dinitrofluorobenzene. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 7: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di esempio 1modification. Al fine di confermare la fine gruppo funzionalizzazione, questo spettro mostra una singola unità di ripetizione di poli (etilene glicole) 2-amminoetil etere acetico acido (Mn = 5000) dopo la reazione con 2,4-dinitrofluorobenzene. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 8: spettro di massa MALDI-TOF di campione 2. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva dei bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) ionizzato con Na+ addotti. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 9: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di campione 2. Questo spettro mostra un'unità ripetitiva di poliossietilene bis-azide (Mn = 2000) al fine di confermare i gruppi terminali Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 10: schema di reazione per la modifica del campione 2. Per confermare i gruppi terminali di materiale, partenza poliossietilene bis-azide (Mn = 2000) è stato reagito con 1-Etinil-4-fluorobenzene tramite una cicloaddizione di rame-catalizzata azide-alchino (CuAAC). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 11: spettro di massa MALDI-TOF di modificazione del campione 2. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva dei bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) funzionalizzati con 1-Etinil-4-fluorobenzene. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 12: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di modificazione del campione 2. Questo spettro mostra una singola unità di ripetizione di bis(azide) di poliossietilene (Mn = 2000) ha reagito con 1-Etinil-4-fluorobenzene via cicloaddizione catalizzata rame azide-alchino per confermare la fine gruppo funzionalizzazione. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 13: spettro di massa MALDI-TOF di campione 3. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva dei poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 14: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di campione 3. Lo spettro mostra una singola unità di ripetizione di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) per confermare i gruppi terminali. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 15: schema di reazione per la modifica del campione 3. Per confermare i gruppi terminali del materiale di partenza, poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) è stato reagito con maleimide tramite un accoppiamento di tiolo-ene. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 16: spettro di massa MALDI-TOF di modificazione del campione 3. Questo spettro completo Mostra la distribuzione complessiva del prodotto della reazione tra poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) e maleimide. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 17: spettro di massa MALDI-TOF di una singola unità di ripetizione di modificazione del campione 3. Al fine di confermare la fine gruppo funzionalizzazione, questo spettro mostra una singola unità di ripetizione di poly(L-lactide), tiolo terminato (Mn = 2500) dopo la reazione di tiolo-ene con maleimide. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Spettrometria di massa MALDI-TOF è un prezioso strumento analitico per la caratterizzazione dei polimeri a causa della sua capacità di generare ioni polimero nello stato singolarmente caricato e con frammentazione minima. Questa tecnica di ionizzazione soft utilizza impulsi laser corti per desorbimento campioni allo stato solido dell'analita polimero incorporati in una matrice composta per generare ioni di polimero in fase gassosa. Le macromolecole sono in genere ionizzate di complessazione con i cationi che vengono aggiunti alla matrice per consentire la loro analisi mediante spettrometria di massa. Questi ioni macromolecolari quindi vengono accelerati da una tensione di estrazione per portarli nell'area di campo-libero del tubo di volo che può consentire loro m/z deve essere determinato basato sul loro tempo di volo tra la sorgente di ioni e il rivelatore5 , 32.

Rispetto ad altre tecniche di caratterizzazione di polimeri, qualità di spettri MALDI-TOF MS è fortemente dipendente da parametri di acquisizione dati e preparazione del campione. Anche se non c'è alcuna formula set per la preparazione del campione, comprendere la funzione di ogni componente della preparazione del campione consente più rapida ottimizzazione empirica. Il fattore più importante nella preparazione del campione MALDI è selezione della matrice poiché compatibilità della matrice con l'analita di polimero è fondamentale per permettendo matrice eccitato generare singoli, desorbiti macromolecole in un stato ionizzato5, 15,17,19. Dopo aver selezionati gli agenti di matrix e cationizzazione adatti, il corretto rapporto dell'analita, di matrice e di cationizzazione agente deve essere determinato. Ciò sarà possibile empiricamente creando una griglia bidimensionale di campioni (Figura 1) sulla piastra bersaglio MALDI-TOF MS (Figura 2) con l'aumento di concentrazione di matrice su un asse e aumentando la concentrazione di sostanza di cationizzazione sul altri.

Simile alla preparazione del campione MALDI, non c'è nessuna formula fissa per la determinazione dei parametri di acquisizione dati; Tuttavia, certe tendenze dovrebbero essere considerate per accelerare ottimizzazione spettrale. Modalità reflectron, che aumenta la risoluzione, ma diminuisce il segnale complessivo, viene in genere scelto per gamme più basse di massa (in questi esempi, seguito Da 4.000) dove si può ottenere una risoluzione isotopica. In questi casi, i calcoli di massa monoisotopic e picco raccolta metodi sono stati usati. Per campioni di polimero con masse sopra Da 4.000, modalità lineare è stato usato con i calcoli di massa medio e picco metodi di prelievo. Per migliorare la risoluzione del segnale, le tensioni di origine dello ione devono essere regolate in piccoli incrementi con la tendenza generale dei polimeri di massa più grandi con maggiore tensione differenziale (IS1 contro IS2).

Po ottimizzato preparazione del campione e acquisizione parametri in grado di fornire precisione, accuratezza di massa può essere raggiunto solo attraverso taratura efficace. Il tempo di volo per una data massa può variare leggermente rispetto ai parametri di acquisizione variabile e piastra anche posizioni, pertanto una taratura dovrebbe essere effettuata per ogni set di parametri di acquisizione ottimizzate per ottenere massa accurata determinazioni5,30. Una volta che sono stati ottimizzati i parametri di acquisizione e preparazione dei campioni, gli spettri devono essere tarati usando queste stesse condizioni esatte.

A causa dell'eccezionale risoluzione e accuratezza di massa osservata negli spettri di massa MALDI-TOF ottimizzati dei polimeri, questa tecnica è diventata un valido strumento gratuito per la determinazione dei dati di distribuzione di massa di polimero. Tuttavia, la capacità di risolvere le singole unità di ripetizione all'interno della distribuzione di massa di polimero fornisce un vantaggio particolare per l'analisi di gruppo fine relativo altro polimero tecniche di caratterizzazione come la cromatografia a permeazione di gel (GPC) e nucleare risonanza magnetica (NMR). Questo è particolarmente utile per determinare la fedeltà delle reazioni di funzionalizzazione gruppo fine e la natura quantitativa delle reazioni di fine gruppo coniugazioni. Questo manoscritto ha dimostrato la capacità di risolvere la massa dell'unità di ripetizione di singoli polimero con fino a due punti decimali di accuratezza di massa, consentendo la conferma delle modifiche gruppo fine con un elevato livello di fiducia. Con i notevoli progressi che sono stati fatti recentemente nel campo della sintesi del polimero di precisione, MALDI-TOF MS sta diventando uno strumento sempre più importante per determinare la struttura macromolecolare e funzionalità.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori hanno interesse finanziario relativo ai calibranti sferica utilizzato in questo studio.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori riconoscono che il Consorzio Smart Design di materiali, analisi ed elaborazione (SMATDAP) finanziato dalla National Science Foundation sotto un accordo cooperativo IIA-1430280 e LA Consiglio dei reggenti per un Istituto europeo di Oncologia (MEP). Campioni di polimero per questi esperimenti sono stati forniti da MilliporeSigma (Sigma-Aldrich).  Pubblicazione di accesso aperta di questo articolo è sponsorizzato da MilliporeSigma.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
poliossietilene bis(azide) (Mn=2000)MilliporeSigma (Aldrich)689696http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/689696?lang=en®ion=US
acido acetico 2-ammino-etiletere (Mn= 5000)MilliporeSigma (Aldrich)757918http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/757918?lang=en®ion=US
poli(L-lattide), tiolo terminato (Mn=2500)MilliporeSigma (Aldrich)747386http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/747386?lang=en®ion=US
SpheriCal®   peptide bassoMilliporeSigma (Sigma-Aldrich)PFS20http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs20?lang=en®ion=US
SpheriCal®   terreno peptidicoMilliporeSigma (Sigma-Aldrich)PFS21http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs21?lang=en®ion=US
SpheriCal®   peptide altoMilliporeSigma (Sigma-Aldrich)PFS22http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs22?lang=en®ion=US
2,4 dinitrofluorobenzeneTCIA5512
maleimmideMilliporeSigma (Aldrich)129585http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/129585?lang=en®ion=US
1-etinilfluorobenzene Fisher Scientific766-98-3
trietilamminaMilliporeSigma (Sigma-Aldrich)471283
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/471283?lang=en®ion=US N,N,N',N",N",N"-pentametildietilentriamminaMilliporeSigma (Aldrich)369497http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/369497?lang=en®ion=US
Bromuro di rame(I)MilliporeSigma (Aldrich)254185http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/254185?lang=en®ion=US
acido acetico glacialeFisher ScientificA38212
metabisolfito di sodioMilliporeSigma (Sigma-Aldrich)13459http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/13459?lang=en®ion=US
trifluoroacetato di potassioMilliporeSigma (Aldrich)281883http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/281883?lang=en®ion=US
trans-2-[3-(terz-butilfenil)-2-metil-2-proerilidene]malononitrileMilliporeSigma (Aldrich)727881 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/727881?lang=en®ion=US
acido a-ciano-4-idrossicinnamicoMilliporeSigma (Sigma)C8982http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c8982?lang=en®ion=US
tetraidrofuranoFisher ScientificT425-1
diclorometanoVWR analiticoBDH1113-4LG

Riferimenti

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