Una procedura completa per valutare le prestazioni In Vitro del Hemangioblastoma Neovascularization putativo utilizzando la sferoide germogliatura Assay

Summary

Questa carta presenta una procedura completa per valutare in vitro in esistenza l'angiogenesi del tumore classico nel hemangioblastomas (HBs) e del suo ruolo in HBs. I risultati evidenziare la complessità della HB-neovascolarizzazione e suggeriscono che questa forma comune dell'angiogenesi è solo un meccanismo complementare in HB-neovascolarizzazione.

Abstract

L'inattivazione del gene soppressore del tumore del von Hippel-Lindau (VHL) svolge un ruolo cruciale nello sviluppo dei hemangioblastomas (HBs) entro l'umano sistema nervoso centrale (SNC). Tuttavia, sia l'origine citologica e il processo evolutivo di HBs (tra cui neovascolarizzazione) rimangono discutibili, e anti-angiogenesi per VHL-HBs, basato sul classico HB angiogenesi, hanno prodotto risultati deludenti in studi clinici. Uno dei principali ostacoli per il successo clinico di trattamento anti-vascolare è la mancanza di una conoscenza approfondita della neovascolarizzazione in questo tumore vascolare. In questo articolo, presentiamo una procedura completa per valutare in vitro se l'angiogenesi del tumore classico esiste in HBs, come pure il suo ruolo in HBs. Con questa procedura, i ricercatori possono accuratamente comprendere la complessità del neovascularization HB e identificare la funzione di questa forma comune dell'angiogenesi in HBs. Questi protocolli possono essere utilizzati per valutare la terapia anti-vascolare più promettente per i tumori, che ha alto potenziale traslazionale per trattamento di tumori o per aiutare nell'ottimizzazione del trattamento anti-angiogenico per HBs in futuro traduzioni. I risultati evidenziare la complessità della neovascolarizzazione HB e suggeriscono che questa comune forma l'angiogenesi è solo un meccanismo complementare in HB neovascolarizzazione.

Introduction

Hemangioblastomas (HBs) sono tumori vascolari benigni che si trovano esclusivamente nell'ambito umano sistema nervoso centrale (CNS). Si sviluppano in pazienti con malattia di von Hippel-Lindau (VHL) o lesioni sporadiche. VHL-HBs sono difficili da curare attraverso trattamento chirurgico a causa della frequente ricorrenza e lesioni multiple che derivano da questo genetico disturbo¹. Sebbene l'inattivazione del gene soppressore del tumore VHL è stata considerata la causa principale di tumorigenesis di VHL-HBs, l'origine citologica (tra cui neovascolarizzazione) e il processo evolutivo di HBs rimangono in gran parte controverso^2....

Protocol

Questo metodo è stato eseguito in conformità con le linee guida approvate e i regolamenti della ricerca etica Comitato di Huashan Hospital, Università di Fudan. Misure di sicurezza standard corrispondenti sono stati seguiti in ogni passo. Per una presentazione schematica, fare riferimento alla Figura 1.

1. cultura e costrutto plasmidico delle cellule

1. Gestire periodicamente delle cellule endoteliali di vena ombelicale umana (HUVEC) in Dulbecco s modified medium dell'Aquila (DMEM) supplementato con 10% siero bovino fetale (FBS), 100 unità/mL di penicillina e 100 µ g/mL di streptomicina in un 5% umidificata incubator....

Results

Immagini originali vengono prese dal microscopio ottico invertito. Le immagini tipiche del gruppo di controllo e del gruppo VHL sono mostrate nella Figura 2-A1 e Figura 2-A2. La lunghezza di germogliatura del gruppo di controllo è inferiore a quella del gruppo di VHL.

Dopo aver caricato le immagini, la piattaforma online fornisce dirett.......

Discussion

Recentemente, più campi di ricerca di biologia vascolare sono stati stimolati dallo studio dell' endotelio angiogenici¹⁵. In questo articolo, abbiamo sviluppato uno sferoide endoteliale germogliatura tecnica come modello sperimentale per studiare la formazione del vaso che proviene dalla perdita del gene VHL di funzione in cellule endoteliali manipolate identificare molecole candidate romanzo della cascata angiogenica. Al meglio della nostra conoscenza, questo è il primo rapporto per esaminare gli.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
cellula endoteliale della vena ombelicale umana	Fudan IBS Cell Center	FDCC-HXN180
dulbecco' s aquila modificata' s medio	Gibco	11995040
siero fetale bovino	Gibco
PLKO.1-puro vector	Addgene	#8453
plasmide di imballaggio psPAX2	Addgene	#12260
plasmide a busta pMD2.G	Addgene	#12259
Piastre 3D a fondo tondo a 96 pozzetti	S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
Opti-MEM medium	Gibco	31985-070	siero ridotto
piastra a 15 pozzetti	Ibidi	81501	Le bolle d'aria nel gel possono essere ridotte equilibrando il μ – Angiogenesi a vetrino prima dell'uso all'interno dell'incubatore durante la notte
per la crescita delle cellule endoteliali	Sciencell	#1052
Piatto di coltura da 10 cm	Corning	Scipu000813
Puromicina	Gibco	A1113802
tipo-EDTA	Gibco	25200056
Sistema automatizzato di conteggio delle cellule	Software
	Winmasis		http://mywim.wimasis.com