La preparazione e il trapianto di tessuto adiposo derivato della cellula formativa (ASC) fogli sul insufficientemente suturate anastomosi colorettale in un modello del ratto è presentata. Questa applicazione romanzo mostra che fogli di ASC possono ridurre le perdite di anastomosi colorettale.
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Articolo metodologico
Trapianto di cellule staminali di tessuto adiposo-derivato foglio per ridurre le perdite dopo la colectomia parziale in un modello del ratto
In questo articolo
Sommario
Abstract
Anastomotiche è una complicazione disastrosa dopo la chirurgia del colon-retto. Sebbene metodi correnti per la prevenzione di perdite hanno diversi livelli di efficacia clinica, sono fino a questo momento imperfette soluzioni. Terapia con cellule staminali utilizzando fogli di ASC potrebbe fornire una soluzione a questo problema. ASC sono considerati come promettenti candidati per la promozione del tessuto di guarigione a causa delle loro proprietà trofiche e immunomodulatori. Qui, mettiamo a disposizione metodi per produrre fogli ASC ad alta densità, che vengono trapiantate su un'anastomosi colorettale in un modello del ratto per ridurre la perdita. ASC formano strati delle cellule in piastre di coltura termo-sensibile che potrebbero essere facilmente smontati. Il giorno del trapianto, è stata eseguita una colectomia parziale con un'anastomosi colorettale 5-sutura. Gli animali sono stati trapiantati immediatamente con 1 foglio ASC per ratto. Fogli di ASC aderito spontaneamente all'anastomosi senza alcun collante, sutura o qualsiasi biomateriale. Gruppi di animali sono stati sacrificati 3 e 7 giorni postoperatorio. Confrontato agli animali trapiantati, l'incidenza degli ascessi anastomotic e perdita era maggiore negli animali di controllo. Nel nostro modello, il trapianto di fogli ASC dopo l'anastomosi colorettale è stata associata con un tasso di perdite inferiore e di successo.
Introduzione
Colectomia parziale con un'anastomosi primaria è un intervento chirurgico comunemente effettuato che può essere fatto per molte malattie che colpiscono il colon come cancro colorettale, morbo di Crohn e diverticolite1,2. Il più temuto complicazione dopo l'anastomosi colorettale è anastomotiche3. Sebbene siano stati identificati diversi fattori di rischio connessi con perdite anastomotiche, soluzioni per prevenire perdite rimangono unkown4,5.
Delle cellule stromali derivate da tessuto adiposo (ASCs) so....
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Protocollo
Il tessuto adiposo sottocutaneo addominale è stato ottenuto da donatori umani con approvazione della Commissione etica medica (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Paesi Bassi. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato etico della sperimentazione animale, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Paesi Bassi (133-14-01).
1. umani ASCs isolamento e coltura
- Preparare 3 mL di terreno di isolamento per 1 g di tessuto adiposo. Mix basso glucosio Dulbecco di medie dell'Aquila per volta (LG-DMEM) con 10 g/L Bovine Serum Albumin (BSA) e della collagenosi 1 g/L di tipo 1. ....
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Risultati
Un diagramma di flusso di questo studio raffigurante sia cultura foglio ASC e la procedura di resezione del colon e l'anastomosi è illustrato nella Figura 1. La figura 2 Mostra la morfologia microscopica foglio ASC e l'apparenza macroscopica del foglio ASC durante e dopo la separazione. La figura 3 Mostra le diverse fasi di distacco del foglio ASC e trapianto. La figura 4
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Discussione
Anastomotiche è l'evento avverso più grave a seguito di resezione del colon con un'anastomosi primaria. Tecniche ottimali per prevenire perdita e rottura anastomotic sono ancora carenti. Applicazione locale di una matrice di biomateriali è stata condotta, con diversi risultati25,26,27. L'obiettivo delle terapie di cellula è quello di facilitare la riparazione dei tessuti da sostituzione di tessuto o la stimolazione della guarigi.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano che la ricerca è stata condotta in assenza di qualsiasi rapporto commerciale o finanziario che potrebbe essere interpretato come un potenziale conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati al Dr. s.e.r. Hovius, Dr. M.A.M. Mureau e tutti i chirurghi del reparto di chirurgia plastica per la raccolta del tessuto adiposo sottocutaneo. P. Sukho è sostenuta da una sovvenzione dal programma The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), durante lo svolgimento dello studio. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens è supportato da sovvenzioni da olandese Arthritis Foundation (LP11).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | Isolamento e coltura ASC |
| Collagenasi tipo I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
| Albumina sierica bovina | Sigma-Aldrich | A9418 | Isolamento ASC |
| Siero fetale bovino | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, Isolamento e coltura ASC |
| 3% acetico acido con blu di metilene | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolamento |
| Gentamicina | Gibco, Life technologies | 15750-037 | Isolamento e coltura ASC |
| Anfotricicina B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | Isolamento ASC e agitatore di coltura |
| (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
| Centrifuga | Hettichlab | Rotina380 | Isolamento e coltura di ASC |
| Soluzione salina tampone fosfato | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, Isolamento e coltura di ASC |
| Acido ascorbico-2-fosfato | Sigma-Aldrich | A8960 | Isolamento e coltura di ASC |
| Fattore di crescita dei fibroblasti ricombinanti umani 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, isolamento e coltura di ASC |
| Tripsina EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | Coltura ASC |
| Dimetil solfossido | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, congelamento ASC |
| Piastre di coltura termoreattive | Nunc Thermo scientific | 174904 | preparazione del foglio ASC |
| Seta intrecciata 4/0 | B Braun | 21151042 chirurgia | |
| Monofilamento non assorbibile poliammide 8/0 | B Braun | G1118170 | chirurgia |
| Acido poliglicolico intrecciato riassorbibile 5/0 | B Braun | C1048207 | chirurgia |
Riferimenti
- Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
- Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....
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Ristampe e permessi
