In questo lavoro descriviamo un biotest acute, croniche e multigenerazionale per studiare gli effetti dei fattori di stress singoli che combinati sul turchese killifish Nothobranchius furzeri. Questo protocollo è progettato per studiare i tratti di storia di vita (mortalità, crescita, fecondità, peso) e critico massimo termico.
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Articolo metodologico
Protocollo per acuto e prove di ecotossicità cronica del turchese Killifish Nothobranchius furzeri
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il killifish Nothobranchius furzeri è un organismo modello emergenti nel campo dell'ecotossicologia e sua applicabilità nelle prove di ecotossicità acuta e cronica è stata dimostrata. Nel complesso, la sensibilità della specie di composti tossici è nella gamma con, o superiore, quello di altre specie di modello.
Questo lavoro descrive protocolli per analisi biologiche acute, croniche e multigenerazionale di effetti stressor singole e combinate il N. furzeri. Grazie alla sua breve stagionatura e ciclo di vita, questo modello vertebrato permette lo studio di endpoint come tempo di maturazione e fecondità entro quattro mesi. Prove di esposizione di transgenerazionale intero ciclo di vita possono essere eseguite in appena 8 mesi. Poiché questa specie produce uova che sono resistenti alla siccità e rimangono vitale per anni, la cultura in loco delle specie non è necessario, ma gli individui possono essere reclutati quando richiesto. I protocolli sono progettati a misura tratti di storia di vita (mortalità, crescita, fecondità, peso) e critico massimo termico.
Introduzione
Profili di sensibilità di una matrice di specie alle sostanze tossiche strategicamente selezionati sono stati descritti1 per la normativa europea REACH (registrazione, valutazione, autorizzazione e restrizione delle sostanze chimiche). Prove di tossicità acuta o a breve termine principalmente sono state usate per questo scopo in quanto danno una rapida indicazione di sensibilità di una specie. Tuttavia, nel loro ambiente naturale, gli organismi sono esposti per periodi molto più lunghi e cicli di vita completo o anche diverse generazioni potrebbero essere interessato2. Inoltre, organismi in ambienti inquinati in genere s....
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Protocollo
Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal comitato etico di KULeuven.
1. cova e manutenzione generale di N. furzeri
- Preparare pesce medio (pH 7) ad una temperatura di 14 ° C e aggiungere acqua purificata di tipo II, con aggiunto sali standardizzati, ad una conducibilità di 600 µS/cm (24 ° C).
- Selezionare uova dalla linea laboratorio GRZ (Gona-Rhe-Zhou) che sono stati conservati in condizioni standardizzate13. Selezionare uova nella fase DIII (cioè pronto a schiudersi), riconoscibile dalla presenza di occhi d'oro9 e delicatamente trasferirli con....
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Risultati
I risultati dell'esposizione acuta del N. furzeri a diverse concentrazioni di rame, calcolati come in 2.5.2, mostrano relazioni cleardose-risposta (Figura 1). C'è un aumento della mortalità con l'aumento di concentrazione tossico. LC50 i valori diminuiscono nel tempo, significa che con le concentrazioni in diminuzione, più tempo passa prima di 50% dello stampo replicati. Per i risultati dettagliati sull'esposizione acuta e cronica di N.......
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Discussione
Questo lavoro descrive un nuovo saggio biologico usando Nothobranchius furzeri, un organismo modello emergente, per studiare l'individuo e gli effetti a lungo termine di sostanze tossiche e altri fattori di stress combinati. I protocolli presentati sono stati applicati correttamente per misurare la sensibilità delle specie in una matrice di sostanze tossiche (rame, cadmio, 3,4-dicloroanilina e Clorpirifos). A causa del suo ciclo di vita veloce, questo modello di vertebrati consente per la valutazione di subletal.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Siamo grati al gruppo sfera dell'UAntwerpen e il dipartimento di protezione delle colture del Ugent per analisi di campioni di acqua. Supporto durante questo progetto è stato fornito dal centro di eccellenza ' Eco e dinamiche socio-evolutive (PF/10/007) del KU Leuven Research Fund. AFG (11Q0516N) ed ESJT (FWO-SB151323) sono stati finanziati come dottorato e TP (12F0716N) come borsista post-doc di Flanders FWO (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| acqua depurata Tipo 1 (milli Q) | Millipore | ||
| Sea | Salt Instant Ocean | ||
| 2L serbatoio in plastica | SAVIC | sempre separato per trattamenti di controllo e tossicità | |
| 1L serbatoio in plastica (spawning) | Avamoplast | Materiale sempre separato per il controllo e i trattamenti di tossicità | |
| reti Aqua | bilzen | Materiale sempre separato per i trattamenti di controllo e tossicità | |
| Vasi di vetro da 2 litri | Sepac-Flacover | Materiale sempre separato per i trattamenti di controllo e tossicità | |
| Vasi di vetro da 0,5 litri | Sepac-Flacover | Materiale sempre separato per i trattamenti di controllo e tossicità | |
| Uova di artemia | Ocean Nutrition | ||
| chironomus | Ocean Nutrition | congelato | |
| tricaina | Sigma aldrich | ||
| piastre di Petri | VWR | ||
| Parafilm | Pipette VWR | ||
| Pinzette | |||
| setaccio a maglie m | / | ||
| provetta per microcentrifuga autocostruita (2ml) | MARCA | Per conservare il pesce in | |
| fiale di vetro | per congelatore Sigma aldrich | Per l'analisi dell'acqua | |
| Pesa barca | MLS | ||
| Jiffy 7c pellet | Jiffy Jiffy | ||
| d'acqua | Gilac | per | |
| azoto liquido Ctmax | Termometro digitale per liquidi | ||
| Testo AG | testo 926 | ||
| HETO riscaldatore termico | Anker Schmitt | ||
| bilancia calibrata | Mettler-Toledo AG | ||
| telecamera | / | ||
| piattaforma per telecamera | / | kit multiparametrico autocostruito | |
| HACH | |||
| Congelatore (-80° C) | a bassissima temperatura Panasonic | ||
| Name | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Fysio | |||
| tampone di omogeneizzazione | VWR | 0,1 M TRIS– HCl, pH 8,5, 15 % polivinilpirrolidone, 153 µ M MgSO4 e 0,2% Triton X-100 | |
| cloroformio:metanolo | Sigma Aldrich | ||
| gliceril tripalmitato | Sigma Aldrich | ||
| A7420 | |||
| reagente per il dosaggio del glucosio | Sigma Aldrich | G3293 | |
| Colorante proteico | Biorad VWR | ||
| Piastra per microtitolazione a 96 pozzetti | Greiner Bio-one | ||
| 384 piastre per microtitolazione | Greiner Bio-one | ||
| Provette in vetro da 2 ml | Fiers | Per l'analisi dei grassi | |
| Provette Eppendorf da 2,5 ml | VWR | ||
| Fotospettrometro Ultra-turrax TP 18/10 | |||
| Riscaldatore Infinite M200 TECAN | |||
| per provette in vetro | Hach COD REACTOR | ||
| centrifuga | Eppendorf centrifuga 5415 R | ||
| incubatore | Bumako |
Riferimenti
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
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Ristampe e permessi
