Articolo metodologico

Trombosi venosa profonda indotta dalla stasi in topi monitorati dall'ecografia ad alta frequenza

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DOI:

10.3791/57392

13 aprile 2018

In questo articolo

Sommario

Il presente protocollo descrive la procedura per ottenere la trombosi venosa utilizzando un modello di stasi. Inoltre, stiamo utilizzando un metodo non invasivo per misurare la formazione dell'embolo e risoluzione nel tempo.

Abstract

La trombosi venosa è una condizione comune che colpisce 1-2% della popolazione, con un'incidenza annuale di 1 su 500. Trombosi venosa profonda può condurre alla morte attraverso l'embolia polmonare o risultati nella sindrome post-trombotica, caratterizzata da dolore cronico alla gamba, il gonfiamento e l'ulcerazione, o nell'ipertensione polmonare cronica conseguente significativo cronica delle vie respiratorie compromesso. Questa è la più comune malattia cardiovascolare dopo infarto miocardico e ictus ischemico ed è una sfida clinica per tutte le discipline mediche, come può complicare il corso di altre malattie come il cancro, la malattia sistematica, chirurgia e trauma principale.

Modelli sperimentali sono necessari per lo studio di questi meccanismi. Il modello di stasi induce embolo coerente dimensione e una quantità quantificabile dell'embolo. Tuttavia, è necessario sistematicamente lega i rami laterali della vena cava inferiore per evitare la variabilità nelle dimensioni dell'embolo e qualsiasi interpretazione di dati errati. Abbiamo sviluppato una tecnica non invasiva per misurare la dimensione dell'embolo usando l'ecografia. Utilizzando questa tecnica, che possiamo valutare lo sviluppo dell'embolo e risoluzione nel tempo dello stesso animale. Questo approccio limita il numero di topi necessaria per la quantificazione di coerenza con il principio di sostituzione, riduzione e perfezionamento degli animali nella ricerca di trombosi venosa. Abbiamo dimostrato che il peso dell'embolo e l'analisi istologica di embolo dimensione correlano con la misura ottenuta con l'ecografia. Pertanto, lo studio corrente descrive come indurre trombosi profonda della vena in topi utilizzando il modello di stasi della vena cava inferiore e come monitorare utilizzando ultrasuoni ad alta frequenza.

Introduzione

Tromboembolismo venoso (TEV), che è composto di trombosi venosa profonda (TVP) ed embolia polmonare, è la terza causa di morte cardiovascolare dopo infarto miocardico e ictus. È una condizione comune che colpisce 1-2% della popolazione, con un'incidenza annuale di 1 su 5001. VTE può portare a: 1) morte attraverso embolia polmonare; 2) post-trombotica sindrome, caratterizzata da dolore cronico alla gamba, il gonfiamento e l'ulcerazione; o 3) ipertensione polmonare cronica conseguente compromesso respiratorio cronico significativo. TEV è una malattia multi-fattoriale e può derivare da stasi del flusso sanguigno, danni alle pareti del vaso, e/o st....

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Protocollo

Tutte le procedure sono state approvate dal istituzionale animale cura Comitato della McGill University Montreal, QC, Canada. Tutte le attrezzature necessarie sono elencata nella tabella I.

1. murino (C57BL/6J) IVC stasi protocollo

  1. Preparazione all'intervento
    Nota: Questo è un intervento chirurgico di sopravvivenza e di conseguenza, un'adeguata tecnica asettica deve essere seguita in ogni momento. Questo include assicurandosi che tutti i materiali sono a portata di mano, la pulizia e sterilizzazione degli strumenti prima e tra uso e che designa una zona sterile sulla superficie di lavoro per tutto il materiale ....

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Risultati

Modello di trombosi venosa stasi

Nel modello di stasi, topi sono anestetizzati e un'incisione è fatta per esporre la vena cava inferiore (IVC). L'incisione è fatta sul lato sinistro o destro del mouse invece di una laparotomia mediana in un modo che non avrebbe interferito con la sonda di ultrasuono. I muscoli addominali e la pelle si piega indietro per esporre il IVC (Figura 1). In.......

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Discussione

Ci sono diversi passaggi critici per la formazione del trombo venoso successo utilizzando il modello di stasi. Induzione di trombosi della vena è più impegnativo in vecchi topi dovuta all'accumulo di grasso che circonda la vena cava inferiore e l'aorta. Idealmente, i topi sottoposti a questa procedura dovrebbero essere 8 - 10 settimane fa. Dovrebbe prestare molta attenzione a non indurre danno endoteliale nell'IVC durante la dissezione smussa e la legatura. Inoltre, è fondamentale per mantenere l'animale in un'incubatric.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato da una sovvenzione dal cuore e Stroke Foundation of Canada e da The Morris e Bella Fainman Family Foundation. Gli autori vorrei ringraziare Veronique Michaud per il suo aiuto tecnico con il sistema di imaging ad ultrasuoni VEVO770.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
6-0 sutura di seta a mano permanenteEthicon706G
forbici chirurgichestrumenti di scienze fini20830-00
pinza per legatura di suturastrumenti di scienze fini20830-00
pinza smussata (diritta e curva)strumenti di scienze fini20830-00
cacciavite per aghistrumenti di scienze fini13002-10
Moria Forbici a mollaStrumenti per la scienza fine15396-00
Siringhe da 1 ml BDBiosciences
26G aghiBecton Dickinson & Co.
VEVO 770 Sistema di imaging ad alta risoluzioneVisualsonicsNon più venduto
SR BuprenorfinaZooPharmDonato a LDI da Veterinaria
Chirurgia MicroscopiaLeicaLeica M651
Systan unguento per gli occhiAlcon288/28062-0
2x2 garza sterileCDMV#104148
punta di cotone Applicatorida JGH
Transpore nastro chirurgico ipoallergenicoCDMV#7411
Gel per ultrasuoni (Aquasonic-100)Dufort & Lavigne#AKEN4061
Incubatoreda JGH
IsofluranoDispomed
Camera anestetica, tubi flessibili e attrezzature per l'amministrazioneDispomed
Hair RemoverNair
Cuscinetto duro riscaldato ad acquaBraintree Scientific, Inc.#HHP-2
Pompa dell'acqua di riscaldamento Gaymar TP500MATVET Inc.#R-500305
Lampada riscaldante a infrarossielectrimat inc.#1R175R-PAR
Temperatura rettale di topo propeemkaTECHNOLOGIES
Acquada JGH
sterile

Riferimenti

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes b....

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Vena cava inferioreModello di stasiUltrasuoni ad alta frequenzaFormazione del tromboRisoluzione del tromboLegatura chirurgicaMonitoraggio ecograficoModello murinoTrombosi venosa

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