Puntura-indotta di Neovascularization dell'iride come un modello murino di Rubeosis Iridis

Sommario

Neovascularization dell'iride, una complicazione comune della malattia della retina ischemica, può portare ad avvistare-minaccioso il glaucoma neovascular. Qui, descriviamo un protocollo murino per indurre il neovascularization iris sperimentali che possono essere utilizzati per la valutazione non invasiva delle sostanze l'angiogenesi di modulazione.

Abstract

Descriviamo un modello del neovascularization dell'iride indotta da puntura come un modello generale per la valutazione non invasiva dell'angiogenesi. Il modello è anche rilevante per il targeting glaucoma neovascolare, una complicazione avvistare-minacciosa di retinopatia diabetica. Questo metodo si basa sull'induzione della risposta vascolare iris da una serie di forature autosigillante uveale su topi BALB/c e sfrutta la maturazione post-partum del vasculature oculare del mouse. Cuccioli di mouse subiscono uveale forature da giorno postnatale 12.5, naturalmente quando i cuccioli aprono i loro occhi, fino al giorno postnatale 24,5. Grazie alla trasparenza della cornea, sistema vascolare iride può essere analizzato facilmente attraverso il tempo con metodi non invasiva in vivo . Inoltre, l'iride semitrasparente di topi BALB/c può essere flatmounted per l'analisi dettagliata immunohistologic con la colorazione di fondo minimo non specifici. In questo modello, l'angiogenesi è determinata essenzialmente dall'infiammatorio e sistemi di attivazione del plasminogeno. Il modello indotta da puntura è il primo per indurre il neovascularization dell'iride in piccoli roditori e ha il vantaggio di consentire analisi diretta non invasiva in vivo del processo angiogenico. Inoltre, il modello può essere abbinato angiogenici modulante sostanze, che evidenzia il suo potenziale nello studio dell'angiogenesi con una prospettiva in vivo .

Introduzione

L'iride, insieme con il corpo ciliare e coroide, comprende dell'uvea, che è il tessuto più vascolarizzato dell'occhio. Sistema vascolare Iris è essenziale nel mantenimento dell'omeostasi nell'alloggiamento anteriore dell'occhio. A seguito di abbondanti connessioni anastomotiche tra le arterie e le vene, i vasi sanguigni di iris fornire nutrienti e apporto di ossigeno non solo per l'iride stessa, ma per l'intero segmento anteriore dell' occhio¹.

La formazione di nuovi vasi sanguigni, o l'angiogenesi da quelle pre-esistenti, è fondamentale nei processi fisiologici, quali sviluppo e²di guarigione....

Protocollo

Cuccioli di topo BALB/c di entrambi i sessi sono stati utilizzati secondo l'istruzione per l'uso degli animali in oftalmologica e Vision Research, e i protocolli sono stati approvati dal comitato di Stoccolma per la ricerca etica animale. Topi sono stati alloggiati in cucciolate, insieme a madre durante l'allattamento, con un ciclo giorno/notte di 12 h, libero accesso a cibo e acqua e monitorati giornalmente.

Nota: Per la procedura chirurgica, topi sono stati tenuti sotto anestesia con isoflurano volatile. Pomate oculari sono sconsigliati durante procedure oculari, come potrebbero interferire con i trattamenti e sostanze utilizzate. Se nece....

Risultati

Cuccioli di topo BALB/c Albino alle p 12.5 sono stati sottoposti a forature uveale, ripetute ogni quarto giorno (sperimentale giorno 0, 4, 8, 12), fino al P24.5. A P27.5, topi sono stati eutanasizzati e iridi attentamente sezionato (sperimentale giorno 15). Foto degli occhi del mouse sono state scattate con una videocamera fissata ad uno stereoscopio chirurgico prima di ogni serie di puntura in ogni giorno sperimentale per valutare la valutazione non invasiva della risposta vascolare iris.......

Discussione

Nel presente protocollo, è presentato un nuovo metodo per l'induzione della risposta vascolare iris dalla puntura uveal. La puntura innesca meccanismi di guarigione della ferita e promuove le risposte vascolari nei iris^10,11. Questo è in accordo con patologie oculari, quali PDR e NVG, dove risposte angiogeniche esacerbato dalla retina nel segmento posteriore dell'occhio culminano con lo stato clinico di rubeosis iridis, una maggiore vascolarizzazione dell'iride

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Forbici per gli occhi di Bonn	Bausch & Lomb	23060
Clayman-Vannas forbici curve	Bausch & Lomb	E3383 C
Clayman-Vannas forbici dritte	Bausch & Lomb	E3383 S
Adattatore obiettivo per fotocamera	Realizzato a mano	N/A	O qualsiasi sistema che consenta di adattare una fotocamera al microscopio
Termoforo 100-110 watt	Non applicabile	N/A	Disponibile nei negozi di animali domestici/veterinari
Ago smussato ipodermico 30g	KDM GmBH germania	911914
Iphone 4S		Apple Non applicabile	O altro dispositivo di acquisizione di immagini ad alta risoluzione
Isoflurano	Baxter	KDG 9623
Pinza da legatura McPherson	Bausch & Lomb	E1815 S
Pinza per micro legatura	Bausch & Lomb	63140
Minimo tetracaina cloridrato	Bausch & Lomb	N/A	1 % (p/v) Collirio
Formalina tamponata neutra	Bioreagens	0018-40
Soluzione salina normale	Fresenius Kabi	210352	0,9 % (p/v) NaCl in acqua iniettabile
Soluzione salina tamponata con fosfato	ThermoFisher Scientific	10010023	PBS bilanciato e tamponato pH 7,4
Piastra di Petri 10 cm	Starstedt	83.3902
Piastra Petri 3 cm	Starstedt	83.3900
Tubo a tenuta sicura 2,0 mL	Starstedt	72.685.200	O qualsiasi provetta stile eppendorf
Piastra TC a 96 pozzetti	Starstedt	83.3924
Pipetta di trasferimento 3,5 mL	Starstedt	86.1171	O qualsiasi altra pipetta Pasteur
Unità per anestesia Univentor 400	Univentor Limited	N/A	O regolatore di flusso equivalente con camera di induzione e maschera per anestesia volatile
Microscopio operatorio Wild M650	Wild Heerbrugg	N/A	O altro stereoscopio chirurgico o di ingrandimento