Method Article

ExCYT: Un'interfaccia utente grafica per semplificare l'analisi dei dati Cytometry alto-dimensionali

DOI:

10.3791/57473

January 16th, 2019

In This Article

Summary

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ExCYT è una base di MATLAB utente interfaccia grafica (GUI) che consente agli utenti di analizzare i dati di cytometry di flusso tramite comunemente impiegate tecniche analitiche per alto-dimensionali dati compresa la riduzione della dimensionalità via t-SNE, una varietà di manuali e automatiche clustering di metodi, heatmaps e flusso alto-dimensionali romanzo trame.

Abstract

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Con l'avvento dei citometri a flusso in grado di misurare un numero crescente di parametri, gli scienziati continuano a sviluppare pannelli più grandi per esplorare fenotipico caratteristiche dei loro campioni cellulari. Tuttavia, questi progressi tecnologici rendimento alto-dimensionali insiemi di dati che sono diventati sempre più difficili da analizzare obiettivamente all'interno dei tradizionali programmi gating basati su manuale. Al fine di meglio analizzare e presentare i dati, gli scienziati collaborano con bioinformatici con competenze in analisi dei dati alto-dimensionali per analizzare i dati di citometria a flusso. Mentre questi metodi hanno dimostrati di essere altamente utile nello studio della citometria a flusso, devono ancora essere incorporato in un pacchetto semplice e facile da usare per gli scienziati che non hanno competenze di programmazione o computazionale. Per soddisfare questa esigenza, abbiamo sviluppato ExCYT, una base di MATLAB utente interfaccia grafica (GUI) che semplifica l'analisi dei dati di cytometry di flusso alto-dimensionali implementando comunemente impiegate tecniche analitiche per l'inclusione di dati alto-dimensionali riduzione di dimensionalità di t-SNE, una varietà di metodi di clustering automatizzati e manuali, heatmaps e flusso alto-dimensionali romanzo trame. ExCYT fornisce inoltre opzioni Gate tradizionali delle popolazioni selezionate di interesse per ulteriore t-SNE e analisi, nonché la possibilità di applicare cancelli direttamente su t-SNE appezzamenti di clustering. Il software offre l'ulteriore vantaggio di lavorare con entrambi compensata o non compensata FCS file. Nel caso in cui è richiesta la compensazione post-acquisizione, l'utente può scegliere di fornire il programma in una directory di singole macchie e un campione senza macchia. Il programma rileva eventi positivi in tutti i canali e utilizza questi dati selezionare per calcolare più obiettivamente la matrice di compensazione. In sintesi, ExCYT fornisce una pipeline di analisi completa per prendere la citometria a flusso di dati sotto forma di file di FCS e consentire qualsiasi individuo, indipendentemente dalla formazione computazionale, di utilizzare i più recenti metodi algoritmici nella comprensione dei propri dati.

Introduction

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Progressi in citometria a flusso, nonché l'avvento di massa cytometry ha permesso ai medici e scienziati rapidamente identificare e caratterizzare fenotipicamente biologicamente e clinicamente interessanti campioni con nuovi livelli di risoluzione, creando grande insiemi di dati alto-dimensionali che sono informazioni ricchi1,2,3. Mentre i metodi convenzionali per l'analisi dei dati di cytometry di flusso quali gating manuale sono stati più semplici per gli esperimenti dove ci sono alcuni indicatori che tali marcatori hanno popolazioni visivamente percepibile, questo approcci....

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Protocol

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1. raccolta e preparazione dei dati Cytometry

  1. Inserire tutte le singole macchie in una cartella di se stessi e l'etichetta con il nome di canale (da fluoroforo, non marcatore).

2. pre-elaborazione & importazione dati

  1. Per mettere in pausa o salvare in tutta questa pipeline di analisi, utilizzare il pulsante Salva area di lavoro in basso a sinistra del programma per salvare l'area di lavoro come un '. MAT' file che successivamente possa essere caricati tramite il pulsante di Carico dell'area di lavoro . Non eseguire più istanze del programma alla volta. Pertanto, quando si carica una....

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Results

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Al fine di testare l'usabilità di ExCYT, abbiamo analizzato un set di dati a cura pubblicato da Chevrier et al. , intitolato 'An Immune Atlas di chiaro Carcinoma delle cellule renali' dove il gruppo ha condotto analisi CyTOF con un vasto pannello immune su campioni di tumore prelevati da 73 pazienti11. Due pannelli separati, un pannello mieloide e linfoide, sono stati usati per caratterizzare fenotipicamente il microambiente tumorale. L'obiettivo del nostr.......

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Discussion

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Qui vi presentiamo ExCYT, un'interfaccia di utente grafica romanzo che esegue algoritmi basati su MATLAB, per semplificare l'analisi dei dati di alto-dimensionali cytometry, permettendo che gli individui senza sfondo di programmazione per implementare le ultime in alto-dimensionali dati algoritmi di analisi. La disponibilità di questo software per la più ampia comunità scientifica permetterà agli scienziati di esplorare i dati di cytometry di flusso in un flusso di lavoro intuitivo e semplice. Attraverso lo svolgimento d.......

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Disclosures

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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Acknowledgements

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Gli autori non hanno nessun ringraziamenti.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DesktopSuperMicroCustom BuildComputer utilizzato per eseguire analisi
MATLABMathworksN/ASoftware utilizzato per sviluppare ExCYT

References

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Benoist, C., Hacohen, N. Flow cytometry, amped up. Science. 332 (6030), 677-678 (2011).
  2. Ornatsky, O., et al. Highly multiparametric analysis by mass cytometry. Journal of immunological methods. 361 (1), 1-20 (2010).
  3. Tanner, S. D., et al.

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High Dimensional CytometryFlow Cytometry Analysist SNE Dimensionality ReductionAutomated Clustering MethodsHeatmap VisualizationGraphical User InterfaceCompensation Matrix CalculationConventional Flow PlotsHigh Dimensional Flow PlotsCluster Analysis Thresholding

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