Vi presentiamo un approccio dettagliato dell'esecuzione di raccolta della saliva, compreso il tracheostomy murino ed all'isolamento di tre ghiandole salivari maggiori.
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Articolo metodologico
Valutazione funzionale salivare murina attraverso dopo stimolazione Pilocarpina frazionato radiazione
In questo articolo
Sommario
Abstract
Hyposalivation è osservata comunemente nella reazione autoimmune di sindrome di Sjögren o seguente lesione da radiazioni alla ghiandole salivarie principali. In questi casi, domande rimangono per quanto riguarda la patogenesi della malattia e interventi efficaci. Una tecnica ottimizzata che consente la valutazione funzionale delle ghiandole salivari è preziosa per indagare terapeutica, la disfunzione e la biologia della ghiandola exocrine. Qui, presentiamo un approccio passo per passo all'esecuzione di Pilocarpina ha stimolato la secrezione di saliva, compreso il tracheostomy ed la dissezione delle tre principali ghiandole salivari murine. Dettagliamo anche l'appropriato anatomia di testa e collo di murino letta durante queste tecniche. Questo approccio è scalabile, che consente più topi da elaborare simultaneamente, migliorando così l'efficienza del flusso di lavoro. Puntiamo a migliorare la riproducibilità di questi metodi, ognuno dei quali ha ulteriori applicazioni all'interno del campo. Oltre alla raccolta della saliva, discutiamo metriche per quantificare e normalizzare la capacità funzionale di questi tessuti. Dati rappresentativi sono inclusi da ghiandole sottomandibolari con funzione della ghiandola salivaria depresso 2 settimane che seguono la radiazione frazionata (4 dosi di 6.85 Gy).
Introduzione
Ghiandola salivare disturbi includono le sindromi di dysregulated o secrezione alterata che conduce alla sovrapproduzione (scialorrea) o sottoproduzione (xerostomia e hyposalivation) di saliva1. In entrambi i casi, c'è un interesse nel migliorare la nostra comprensione della biologia della ghiandola salivaria verso l'obiettivo finale di sviluppo terapeutico2.
Le ghiandole salivari sono organi altamente radiosensibili e spesso sono danneggiate durante la radioterapia cancro testa e del collo, che porta a permanente secchezza delle fauci (xerostomia)3,
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Protocollo
Tutte le procedure in vivo descritte di seguito sono state approvate dal Comitato Università sulle risorse animali presso l'Università di Rochester, Rochester. NY.
1. preparazione
- Utilizzando una bilancia analitica, pesano 20 mg di pilocarpina. Scioglierli in 2 mL di soluzione fisiologica sterile in una microcentrifuga.
Nota: Poiché Pilocarpina è sensibile alla luce e perde l'attività nel corso del tempo, questa soluzione dovrebbe essere preparata il giorno dell'iniezione e al riparo dalla luce fino a quando somministrato. - Utilizzando una bilancia analitica, pesare e identificare tutte le provette per il prel....
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Risultati
Quando eseguire Pilocarpina dose elevata stimolato raccolta della saliva, è importante mantenere le vie respiratorie per impedire l'aspirazione o soffocamento dalle secrezioni nella cavità orale. Lo schema del tracheostomy è fornito (Figura 1). A seguito di incisione tracheale, lo stoma deve rimanere chiaro dei tessuti e dei fluidi.
Per migliorare l'azione capillare durante la raccolta della saliva,.......
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Discussione
Presentiamo un metodo multistep per valutare la funzione della ghiandola salivaria, che può essere applicata a studiare terapeutica e lesioni della ghiandola. La nostra procedura prevede tracheostomia, raccolta di saliva e la dissezione della ghiandola, ognuno dei quali ha applicazioni sperimentali che possono supportare uno studio integrato di biologia della ghiandola salivaria. Ad esempio, tracheostomy murino è stato utilizzato per la gestione generale delle vie aeree durante le procedure che ostruisce la cavità orale........
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Ricerca riportata in questa pubblicazione è stata sostenuta dal National Institute of Dental e Craniofacial Research (NIDCR) e il National Cancer Institute (NCI) dei National Institutes of Health, sotto Premio numero R56 DE025098, UG3 DE027695 e F30 CA206296. Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiale del National Institutes of Health. Quest'opera fu appoggiata anche dalla NSF DMR 1206219 e l'innovazione di IADR in Oral Care Award (2016).
Vorremmo ringraziare il Dr. Eri Maruyama e Andrew Hollomon per la loro assistenza con raccolta di saliva. Vorremmo ringraziare W....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Pilocarpina cloridrato | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpina |
| Studente Vannas Forbici a molla | Fine Science Tools | 91500-9 | Forbici a molla per tracheostomia |
| Soluzione salina sterile | Medline | RDI30296H | Soluzione salina |
| Dumont #7 Pinze | le scienze fini | 11274-20 | Pinze curve |
| Dumont #5 Pinze | Fine Science Tools | 11251-10 | Pinze dritte |
| Pinze standard Fine | Science Tools | 11000-12 | Forcipe smussata |
| Forbici fini - Carburo di tungsteno | Fine Science Tools | 14568-09 | Forbici da dissezione |
| Microematocrito Tubi capillari eparinizzati | Fisher Scientific | 22362566 | Tubi capillari |
| Lubrificante Unguento | per gli occhiRefresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat policlonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Anticorpo |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindo, Dicloridrato) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Software statistico |
| Applicatore con punta in cotone | Medline | MDS202000 | Applicatore per unguento oculare |
| Siringa da insulina da 0,5 cc, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Siringa per iniezione intraperitoneale |
Riferimenti
- Bradley, P., O'Hara, J. Diseases of the salivary glands. Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).
- Fox, P. C. Salivary enhancement therapies. Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).
- Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A.
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Ristampe e permessi
