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Research Article
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Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Qui presentiamo un protocollo per la costruzione di una pompa a siringa a pressione controllata per essere utilizzato nelle applicazioni di microfluidica. Questa pompa a siringa fatta da un additivo fabbricato corpo, hardware COTS ed elettronica open-source. Il sistema risultante è a basso costo, semplice da costruire ed eroga ben regolato flusso del fluido per attivare la ricerca rapida microfluidica.
Microfluidica è diventato uno strumento fondamentale nella ricerca attraverso, chimica, scienze biologiche e fisiche. Una componente importante della sperimentazione di microfluidica è un sistema in grado di fornire con precisione una portata aspirata o la pressione di ingresso stabile per fluidi. Qui, abbiamo sviluppato un sistema di pompe siringa in grado di controllare e regolare la pressione del fluido di aspirazione consegnato a un dispositivo microfluidico. Questo sistema è stato progettato utilizzando materiali a basso costo e principi di produzione additiva, sfruttando la stampa tridimensionale (3D) di materiali termoplastici e componenti normalizzati quando possibile. Questo sistema è composto da tre componenti principali: una pompa a siringa, un trasduttore di pressione e un microcontrollore programmabile. All'interno di questa carta, abbiamo dettagliatamente una serie di protocolli di fabbricazione, assemblaggio e programmazione di questo sistema di pompa a siringa. Inoltre, abbiamo incluso i risultati rappresentativi che dimostrano ad alta fedeltà, controllo feedback della pressione di ingresso utilizzando questo sistema. Ci aspettiamo che questo protocollo permetterà ai ricercatori di fabbricare sistemi pompa siringa di basso costo, abbassando la barriera di ingresso per l'utilizzo della microfluidica in biomedica, chimica e ricerca dei materiali.
Strumenti di microfluidica sono diventati utili per scienziati nella ricerca biologica e chimica. Dovuto l'utilizzazione di basso volume, capacità di misurazione rapida, profili di flusso ben definiti, microfluidica ha guadagnato la trazione in genomica e proteomica ricerca, high throughput screening, diagnostica medica, nanotecnologia e cella singola analisi1,2,3,4. Inoltre, la flessibilità del design dei dispositivi microfluidici consente prontamente ricerca di scienza di base, ad esempio indagando la dinamica spazio-temporale di colonie batteriche colta5.
Molti tipi di sistemi di iniezione di fluido sono stati sviluppati per fornire con precisione il flusso di dispositivi microfluidici. Esempi di tali sistemi di iniezione peristaltiche e pompe di ricircolo6, regolatore di pressione sistemi7e pompe a siringa8. Questi sistemi di iniezione, tra cui pompe a siringa, sono spesso composti da componenti costosi precisione costruita. Aumentando questi sistemi con controllo di feedback a circuito chiuso della pressione nel flusso di uscita aumenta il costo di questi sistemi. In risposta, abbiamo precedentemente sviluppato un sistema di pompa siringa robusto, a basso costo che utilizza il controllo di feedback a circuito chiuso per regolare la pressione di flusso di output. Utilizzando il controllo di pressione del circuito chiuso, la necessità di costosi componenti di altissima precisione è abrogato9.
La combinazione di conveniente stampa 3D hardware e una crescita significativa in associato software open-source ha fatto la progettazione e la fabbricazione di dispositivi microfluidici sempre più accessibile ai ricercatori da una varietà di discipline10. Tuttavia, i sistemi utilizzati per fluido in auto attraverso questi dispositivi rimangono costosi. Per soddisfare questa esigenza per un sistema di controllo fluidi di basso costo, abbiamo sviluppato un design che possa essere fabbricato dai ricercatori in laboratorio, che richiedono solo un piccolo numero di fasi dell'assemblaggio. Nonostante il suo basso costo e semplice montaggio, questo sistema può fornire un controllo di flusso preciso e fornisce un'alternativa ai sistemi a pompa siringa commercialmente disponibili, ciclo chiuso, che può essere proibitivo.
Qui, forniamo i protocolli per la costruzione e l'utilizzo del ciclo chiuso controllato siringa sistema pompa abbiamo sviluppato (Figura 1). Il fluido sistema di gestione è composto da una pompa a siringa fisico ispirata da un precedente studio11, un microcontrollore e un sensore di pressione piezoresistivo. Quando montato e programmato con un regolatore di proporzionale-integrale-derivato (PID), il sistema è in grado di erogare un flusso ben regolato, pressione-driven per dispositivi microfluidici. Questo fornisce un'alternativa di basso costo e flessibile ai prodotti commerciali ad alto costo, consentendo un più ampio gruppo di ricercatori di utilizzare microfluidica nel loro lavoro.
1. stampa 3D e montaggio della pompa a siringa
2. preparazione del dispositivo microfluidico
3. siringa feedback-controllato sistema di pompaggio
4. Taratura sensore di pressione
Nota: Basata sull'amplificatore selezionato in questa carta, la formula per calcolare il guadagno è G = 5 + (G200k/R) con RG = R1 e G = guadagno dell'amplificatore. Il guadagno dell'amplificatore qui è circa 606. Questo valore può essere modificato cambiando la resistenza utilizzata per R1. Inoltre, il livello di logica della scheda microcontroller è 5 V e la strumentazione è alimentata con 10 V, un circuito semplice partitore di tensione, R2 e R3, viene utilizzato per salvaguardare il segnale di uscita di essere non più di 5 V.
5. acquisizione di immagini dal dispositivo microfluidico
6. controllo pressione pompe a siringa
7. ottimizzare i parametri del regolatore PID
Nota: I valori dei parametri del controllore ideale può variare a seconda dell'applicazione e la geometria del dispositivo microfluidico. Ad esempio, per studi a lungo termine di (ore), una bassa costante proporzionale (Kp) può essere preferibile per ridurre al minimo superamento a scapito del tempo di risposta. Questi compromessi è dipendono da obiettivi e condizioni sperimentali.
Qui, presentiamo un protocollo per la costruzione di una siringa di feedback controllato sistema di pompaggio e dimostrare i suoi usi potenziali per applicazioni di microfluidica. La figura 1 Mostra il sistema collegato della pompa a siringa, sensore di pressione, dispositivo microfluidico, microcontrollore, circuito del sensore di pressione e driver del motore passo a passo. Dettagliate didascalie per l'assemblaggio di pompa siringa sono mostrate in Figura 2 e il circuito elettronico schematico per rilevamento della pressione è presentato nella Figura 3. Il processo di ottimizzazione dei parametri di controllo è mostrato nella Figura 4. Infine, un risultato rappresentativo di controllo della pressione di ingresso a un dispositivo di due-ingresso a forma di Y microfluidica è illustrato nella Figura 5.

Figura 1: installazione del sistema pompa siringa feedback controllato. Questa immagine mostra la configurazione del sistema pompa siringa. La siringa contiene la soluzione iniettabile ed è azionata da pompa a siringa 3D-stampato. Come A. il sensore di pressione piezoresistivo è collegato con B. la pompa a siringa e C. il dispositivo di microfluidica, la pressione dal dispositivo viene rilevato e convertito in un segnale elettrico a D. il circuito del sensore di pressione con amplificatore per strumentazione una volta il liquido viene consegnato attraverso il tubo. Il segnale del sensore di pressione viene letto da E. il microcontrollore open source a bordo che poi trasmette il segnale necessario alla F. il driver del motore passo a passo per controllare l'azionamento della pompa a siringa. G. un alimentatore e H. un computer portatile è necessarie per utilizzare e programmare il sistema. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: foto di Assembly per la pompa a siringa 3D-stampato. Questa figura mostra le istruzioni dettagliate per l'assemblaggio di pompa siringa 3D-stampato, con le foto corrispondenti alla procedura nel passaggio 1.2 del protocollo. R. questa immagine mostra i materiali per l'assemblaggio di pompa siringa. B. questa immagine mostra come il motore passo-passo è collegato alla barra filettata (punto 1.2.1). C. questa immagine mostra come la parte dal punto 1.2.1 del protocollo è collegata alla parte dal punto 1.2.2 del protocollo (punto 1.2.3). d Questa immagine mostra il montaggio del pezzo push viaggiatore (punto 1.2.5). E. questa immagine mostra come il fine corsa è collegato (passo 1.2.10). F. questa immagine mostra come il pezzo di connettore femmina pistone siringa è collegato a componenti assemblati (passo 1.2.11). G. questa immagine mostra il montaggio della parte di connettore maschio pistone siringa (passo 1.2.13). H. questa immagine mostra come è collegato il morsetto siringa (passo 1.2.14). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 3: illustrazione per il circuito del sensore pressione e microcontrollore. Il circuito permette la scheda a microcontrollore misurare i segnali di pressione amplificato dal sensore di pressione. R. questa è la foto di assemblaggio per il circuito. B. questa figura mostra il layout del circuito. I fili esposti dal sensore di pressione sono colorati e deve essere collegati come segue: rosso dovrebbe collegarsi al V +, nero dovrebbe collegarsi al V-, verde dovrebbe connettersi al segnale + e bianco dovrebbe connettersi al segnale-. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 4: ottimizzazione dei parametri di controllo. Il regolatore PID utilizzato per regolare la pressione del fluido pompa siringa può essere sintonizzato modificando il proporzionale (Kp), integrale (Ki) e differenziale (Kd) parametri. Qui, indichiamo come sintonizzazione (utilizzando Kp) contribuirà a ridurre il tempo di risposta. Ulteriore ottimizzazione (con Ki e Kd) può contribuire a garantire una stabilità di setpoint e ridurre la sovraelongazione. In questo protocollo, controller sono principalmente sintonizzati usando un metodo di prova-e-errore manuale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 5: controllo della pressione in entrata per un dispositivo microfluidico flusso laminare. Un dispositivo a forma di Y microfluidica è fabbricato seguendo la procedura descritta nel passaggio 2 del presente protocollo. Il dispositivo è dotato di due porte di ingresso e una bocca di mandata. Due sistemi di pompa siringa vengono assemblati per controllare le pressioni di ingresso. Una delle siringhe è caricata con un colorante blu e l'altro viene caricato con acqua. R. queste immagini del flusso del fluido dovute alla stessa pressione fornita da entrambe le pompe vengono acquisite utilizzando l'approccio dettagliato al punto 6 del presente protocollo. B. questa figura mostra come le pressioni di ingresso sono monitorate e controllati tramite il regolatore di PID sintonizzato nella Figura 4. Stretta aderenza al set point può essere osservato. Più breve (s) e più a lungo (h) esperimenti hanno dimostrato risultati simili. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Qui presentiamo un protocollo per la costruzione di una pompa a siringa a pressione controllata per essere utilizzato nelle applicazioni di microfluidica. Questa pompa a siringa fatta da un additivo fabbricato corpo, hardware COTS ed elettronica open-source. Il sistema risultante è a basso costo, semplice da costruire ed eroga ben regolato flusso del fluido per attivare la ricerca rapida microfluidica.
Gli autori riconoscono supporto dall'Office of Naval Research awards N00014-17-12306 e N00014-15-1-2502, come pure da Air Force Office of Scientific Research award FA9550-13-1-0108 e la National Science Foundation Grant n. 1709238.
| Arduino | IDE Arduino.org | Arduino Uno R3 | |
| , 2 posizioni | Digi-Key | WM4000-ND | |
| connettore per intestazione, 3 posizioni | Digi-Key | WM4001-ND | |
| connettore per basetta, 4 posizioni | Digi-Key | WM4002-ND | |
| cavo di collegamento, calibro 22, nero | Digi-Key | 1528-1752-ND | |
| Cavo di collegamento, calibro 22, cavo di | collegamentoDigi-Key | 1528-1757-ND | blu |
| , calibro 22, cavo di | collegamentoDigi-Key | 1528-1750-ND | rosso |
| , calibro 22, cavo di | collegamentoDigi-Key | 1528-1768-ND | bianco |
| , calibro 22, | Digi-Key | 1528-1751-ND | |
| Amplificatore per strumentazione | gialloTexas Instruments | INA122P | |
| Microcontrollore, Arduino Uno R3 | Arduino.org | A000066 | |
| Mini Breadboard | Amazon | B01IMS0II0 | |
| Alimentatore | BK Precision | 1550 | |
| Sensore di pressione | PendoTech | PRESS-S-000 | |
| Connettori rettangolari, custodie | Digi-Key | WM2802-ND | |
| Rettangolare Connettori, | resistori maschioDigi-Key | WM2565CT-ND | |
| , 10k Ohm | Resistori Digi-Key | 1135-1174-1-ND | |
| , 330 Ohm | Digi-Key | 330ADCT-ND | |
| Driver Driver per motori passo-passo, EasyDriver | Digi-Key | 1568-1108-ND | |
| Cavo USB 2.0, da A-maschio a B-maschio | Amazon | PC045 | |
| Materiale stampato in 3D, Z-ABS  | Zortrax | Sono disponibili una varietà di colori | |
| Stampante 3D | Zortrax | M200 | Stampa dei componenti della pompa a siringa |
| Cuscinetto a sfere, 17x6x6mm | Amazon | B008X18NWK | |
| Viti esagonali a macchina, M3x16mm | Viti | a macchina esagonali Amazon B00W97MTII | |
| , M3x35mm | Dado | esagonaleAmazon B00W97N2UW | |
| , M3 0.5 | Dado | esagonaleAmazon B012U6PKMO | |
| , M5 | Tornio B012T3C8YQ | Amazon | |
| Asta tonda | Amazon | B00AUB73HW | Cuscinetto lineare a sfere Amazon B01IDKG1WO|
| Accoppiatore flessibile lineare | Amazon | B010MZ8SQU | |
| Dado di bloccaggio in acciaio, motore passo-passo M3 0,5 | Amazon | B000NBKLOQ | |
| , NEMA-17, 1,8o/passo | Digi-Key | 1568-1105-ND | |
| Siringa, 10mL, punta Luer-Lok | BD | 309604 | |
| barra filettata | Amazon | B01MA5XREY | |
| 1H,1H,2H,2H-Perfluoroottiltriclorosilano | Modulo fotocamera FisherScientific | AAL1660609 | |
| Raspberry Pi Foundation | V2 | ||
| Forno compatto | FisherScientific | PR305220G | Miscela di pre-polimero PDMS per cottura e il dispositivo |
| Ago di erogazione, 22 Gauge | McMaster-Carr | 75165A682 | |
| Ago di erogazione, 23 Gauge | McMaster-Carr | 75165A684 | |
| Fisherbrand Premium Cover Glasses | FisherScientific | 12-548-5C | |
| Piastra di Petri per coltura in vetro, 130x25mm | American Educational Products | 7-1500-5 | |
| Plasma Cleaner | Harrick Plasma | PDC-32G | Legatura del vetro di copertura con il dispositivo PDMS |
| Lame di rasoio | FisherScientific | 7071A141 | |
| Scotch Magic Tape | Amazon | B00RB1YAL6 | |
| Computer a scheda singola | Raspberry Pi Foundation | Raspberry Pi 2 modello B | |
| Smart Spatola | FisherScientific | EW-06265-12 | |
| Sylgard 184 Kit elastomero siliconico | FisherScientific | NC9644388 | |
| Filtri per siringa | Thermo Scientific | 7252520 | |
| Tygon Tubing | ColeParmer | EW-06419-01 | |
| Essiccatore sottovuoto | FisherScientific | 08-594-15C | Degasaggio della miscela pre-polimero PDMS e rivestimento di fluorosilano sullo stampo principale |
| Piatti di pesatura | FisherScientific | S67090A |