Il potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) nella regione sovraspinale è stato suggerito di svolgere alcuni ruoli nella funzione cerebrale. Descritto qui è un protocollo per l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatoxin per la desecizione trPV1 sovraspinale nei topi. Vengono inoltre presentate le procedure per alcuni esami del dolore.
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Articolo metodologico
Trattamento intracerebroventricolare con Resiniferatoxin e test del dolore nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1), un canale termosensibile, è noto per innescare dolore nei nervi periferici. Oltre alla sua funzione periferica, è stato suggerito anche il suo coinvolgimento nelle funzioni cerebrali. Resiniferatoxin (RTX), un agonista TRPV1 ultrapotente, è stato conosciuto per indurre la dese riesensibilità a lungo termine di TRPV1, e questa desesensibilità è stato un approccio alternativo per studiare la rilevanza fisiologica delle cellule che esprimono TRPV1. Qui descriviamo un protocollo per il trattamento intracerebroventricolare (i.c.v.) con RTX nei topi. Le procedure sono descritte per il test della stimolazione TRPV1 periferica (test RTX) e la stimolazione meccanica (test di pressione della coda) quindi seguire. Anche se le risposte nocicettive dei topi che erano stati somministrati RTX i.c.v. erano paragonabili a quelle dei gruppi di controllo, i topi somministrati da RTX-i.c.v. erano insensibili all'effetto analgesico dell'acetaminofene, suggerendo che il trattamento i.c.v. RTX può indurre la desensitizzazione trPV1 sovraspinal-selettiva. Questo modello murino può essere utilizzato come un comodo sistema sperimentale per studiare il ruolo di TRPV1 nella funzione cerebrale/sovraspinale. Queste tecniche possono anche essere applicate agli studi sulle azioni centrali di altri farmaci.
Introduzione
Gli animali ricevono vari stimoli fisici e chimici dal loro ambiente attraverso sensori sui nervi periferici. Il recettore transitorio potenziale vanilloide di tipo 1 (TRPV1) è uno dei canali termosensibili, non selezionativi che agiscono come sensori di calore1,2e l'attivazione e/o modulazione di TRPV1 è noto per essere un passo chiave per la nociception in entrambi i contesti normali e infiammatori3. Anche se il modello di espressione generale è controverso, l'espressione di TRPV1 è stata suggerita anche nelle regioni sovraspinali, essendo coinvolta in varie attività cerebrali (tra cu....
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Protocollo
Tutti i protocolli sperimentali qui utilizzati sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Musashino. I topi maschi ddY (SLC, Shizuoka, Giappone) sono stati tenuti per almeno 7 giorni in un ciclo di 12-h luce/scuro prima di esperimenti con acqua e cibo ad libitum. Per gli esperimenti sono stati utilizzati topi di 5 o 6 settimane.
1. Preparazione dei farmaci
-
Rtx
NOTA: La soluzione alcolica RTX può causare gravi ustioni cutanee e danni agli occhi. Assicurarsi di utilizzare guanti di gomma e occhiali per la protezione durante la manipolazione. Questa soluzione stock può ....
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Risultati
I topi trattati con i.c.v. non mostrano anomalie apparenti nel loro aspetto, attività spontanee, pesocorporeo 19 e temperatura corporea del nucleo (gruppo trattato con veicolo, 38,4 x 0,3 gradi centigradi, n - 6; Gruppo trattato da RTX, 38,7 x 0,2 gradi centigradi, n - 6).
Figura 2A-B mostra la reattività dei topi trattati con s.c.- o i.c.v. all'iniezione int.......
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Discussione
Il passo più critico in questi esperimenti è il successo dell'iniezione i.c.v. La tecnica di iniezione i.c.v. utilizzata qui è abbastanza semplice, ma richiede una certa pratica. Prima degli esperimenti, si raccomanda la pratica con coloranti (ad es. 0,5% di blu di prova in salina). Se l'iniezione viene eseguita correttamente, un segno di ago deve essere evidente sulla sutura coronale e il colorante iniettato deve essere presente nel ventricolo contralaterale e nel terzo ventricolo. Inoltre, l'inserimento forzato deve es.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse per dichiarare
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | utilizzato per i pretrattamenti s.c./i.c.v. e il test RTX |
| Paracetamolo | IWAKI SEIYAKU | donato da IWAKI SEIYAKU | |
| Pentobarbital sale sodico | Tokyo Chemical Industry | P0776 | utilizzato per l'anestesia |
| Etanolo (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | utilizzato per la dissoluzione RTX |
| Poliossietilene(20) Monooleato di sorbitano | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | utilizzato per la dissoluzione di RTX |
| 25 μ L microsiringa | Hamilton | 1702LT | utilizzata per iniezione endovenosa |
| 100 μ Microsiringa L | Hamilton | 1710LT | utilizzata per iniezione intraplantare |
| Ago monouso calibro 26 | TERUMO | NN-2613S | utilizzato per iniezione endovenosa |
| Ago monouso calibro 30 | NIPRO | 01134 | utilizzato per iniezione intraplantare |
| Misuratore di pressione | Ugo | Basile Analgesy-Meter Tipo 7200 | utilizzato per test di pressione di coda |
Riferimenti
- Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons. J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).
- Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen....
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Ristampe e permessi
