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Articolo metodologico

Set-up elettrochimico autoportanti per arricchire i batteri respiring anodo in loco

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DOI:

10.3791/57632

24 luglio 2018

In questo articolo

Sommario

Tecniche di coltivazione microbiche in loco di arricchimento o in situ possono facilitare l'isolamento dei taxa microbici difficile-a-cultura, soprattutto da ambienti basso-biomassa o geochimico estremi. Qui, descriviamo un assetto elettrochimico senza l'utilizzo di un alimentatore esterno per arricchire i ceppi microbici che sono capaci di trasporto dell'elettrone extracellulare (EET).

Abstract

Respirazione anaerobica accoppiato con trasporto di elettroni ai minerali insolubili (denominato extracellulare trasporto dell'elettrone [EET]) è pensato per essere critico per la produzione di energia microbica e persistenza in molti ambienti di sottosuolo, soprattutto quelli difettando di accettori terminali solubile. Mentre EET-capace microbi sono stati correttamente isolati da vari ambienti, la diversità di batteri capaci di EET è ancora poco capito, soprattutto nel difficile a campione, bassa energia o ambienti estremi, come molti di sottosuolo ecosistemi. Qui, descriviamo un sistema elettrochimico in loco per arricchire EET-capace batteri utilizzando un anodo come un accettore di elettroni terminale respiratoria. Questo anodo è collegato al catodo capace di catalizzare la riduzione dell'ossigeno abiotici. Paragonando questo approccio electrocultivation metodi che utilizzano un potenziostato per rettilineo il potenziale di elettrodo, il sistema del due-elettrodo non richiede un'alimentazione esterna. Presentiamo un esempio del nostro arricchimento in loco utilizzato in un stagno alcalino al Cedars, un sito di serpentinizzazione terrestre nella California del Nord. Precedenti tentativi di coltivare batteri riducendo minerali erano infruttuosi, che è probabilmente dovuto la natura di basso-biomassa di questo sito e/o l'abbondanza relativa bassa di metallo riducendo i microbi. Prima di implementare il nostro arricchimento di due elettrodi, abbiamo misurato il profilo verticale della concentrazione di ossigeno disciolto. Questo ci ha permesso di posizionare il carbonio feltro carbonio placcato platino e anodo catodo a profondità che sosterrebbe anaerobico ed aerobico elabora, rispettivamente. A seguito di incubazione in loco, abbiamo ulteriormente arricchito l'elettrodo anodico in laboratorio e confermato una comunità microbica distinta rispetto alla superficie associata o biofilm comunità normalmente osservate presso il Cedars. Questo arricchimento successivamente ha condotto all'isolamento del primo elettrogenico microbo da cedri. Questo metodo di arricchimento microbico in loco ha il potenziale per migliorare notevolmente l'isolamento di batteri EET-capace da biomassa bassa o difficili da habitat di campione.

Introduzione

Diversi microbi riduzione del minerale sono stati indicati per utilizzare fase solida minerali come accettori terminali, dai processi di trasporto dell'elettrone extracellulare (EET) che conducono elettroni all'esterno della cella via redox enzimi1. EET è fondamentale, non solo per processi di microbo-minerale ma anche energia applicata e tecnologie ambientali, ad esempio celle a combustibile microbico2, elettrodo sintesi3e bioremediation4. EET-capaci nuovi batteri sono molto ricercati e sono state ampiamente studiati da un punto di vista fondamentale o applicata

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Protocollo

1. costruzione di un sistema di due elettrodi per incubazione ambientale

  1. Preparazione del materiale dell'anodo e trattamento di carbonio sentivo elettrodo (Figura 2).
    1. Tagliare il carbonio sentivo di dimensioni pari a seconda di arricchimento di biomassa desiderata. Immergere ogni elettrodo in etanolo al 90% per 30 minuti, poi sciacquare almeno 8 volte con acqua deionizzata, sonicating per 1 min dopo ogni risciacquo.
    2. Lavare gli elettrodi due volte in 1 M HCl, mescolando per un minimo di 12 ore per ogni lavaggio.
    3. Asciugare gli elettrodi in forno caldo (37 ° C) per 6 – 12 h o fino a....

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Risultati

Produzione attuale è stata misurata con successo per circa 3 mesi, utilizzando un registratore di dati di tensione come mostrato nella Figura 3. Questa volta è stato scelto perché era il più lungo periodo di incubazione stabile per la primavera, a causa di forte caduta piogge che interessano la primavera. Un periodo più breve potrebbe essere sufficiente, anche se un periodo più lungo potrebbe fornire più forte arricchimento della biomassa. Abbiamo confermato .......

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Discussione

Nello studio descritto, vi mostriamo l'arricchimento di un consorzio microbico, collegato con la produzione di corrente in situ . I modelli osservati in corrente supporto attività microbica in questo sistema nel breve e lungo tempo scale. Il passaggio fondamentale per la costruzione di un sistema funzionale del due-elettrodo (tipo di cella a combustibile) è identificando ed utilizzando una posizione con una scuderia di livello dell'acqua e la concentrazione di ossigeno nell'ambiente. Il catodo è esposto all'ossi.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Vorremmo riconoscere Roger Raiche e David McCrory per consulenza su posizioni per l'incubazione di lungo termine e che ci permette di raggiungere i cedri. Ringraziamo anche la squadra del campo Cedars durante la stagione 2013-2014: Shino Suzuki, Shunichi Ishii, Greg Wanger, Grayson Chadwick, Bonita Lam e Matthew Schechter. Additional grazie Shino Suzuki e Gijs Kuenen per ricerca penetrante e la coltura di supporto. Questo lavoro è stato finanziato attraverso una sovvenzione per giovani scienziati A e B della Japan Society per la promozione della scienza (JSPS) KAKENHI concessione numero 17H 04969 e 26810085, rispettivamente e l'Agenzia giapponese per la ricerca medica....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Foglio di feltro di carbonion/an/aUtilizzato per anodo e catodo
Filo di titanioLa Nilaco CooporationTI-451485Utilizzato per costruire il sistema di celle a combustibile
Grafite epossidicaElettrolitica lnc.n/aUtilizzato per collegare gli elettrodi
e il filo Ti
Forno di essiccazioneYamatoDY300cuocere l'elettrodo per
solidificare la grafite conduttiva epossidica
Multimetro digitaleFluke616-1454per controllare il valore ohmico
di resistenza
Sonda di ossigeno discioltoSper Science#  850045per controllare la concentrazione di ossigeno
nel ambienti
ResistoreSodialUtilizzato per costruire il sistema di celle a combustibile
Filo conduttorePico81141sUtilizzato per costruire il sistema di celle a combustibile
Voltmetro e registratore di datiT& D corporationVR-71Utilizzato per la registrazione dei dati
Idrogeno Esacloroplatino (IV) Esaidratowako18497-13-7Utilizzato per elettropolazione
Acido citricoWako038-06925Utilizzato per elettropolazione
Acido solforicoWako192-04696Utilizzato per elettropolazione
HCl Wako083-01095Utilizzato per il lavaggio degli elettrodi
Cilindro di vetroN/AN/ARealizzato su misura, utilizzato come
coperchio e base in PTFEelettrochimico N/AN/ARealizzato su misura, utilizzato come copertura e fondazione del reattore elettrochimico
Gomma butilicaN/AN/ARealizzato su misura, inserito tra ogni componente del reattore elettrochimico
SeptaGL Science3007-16101Utilizzato come porta di iniezione del reattore elettrochimico
Elettrodo di ossido drogato con stagno di indio (ITO)GEOMATECNo.0001Utilizzato come elettrodo di lavoro, elettrodo saturo 5Ω/sq
Ag/AgCl KClHOKUTO DENKOHX-R5Utilizzato come elettrodo di riferimento, Φ
Filo di platinoIl Nilaco CooporationPT-351325Utilizzato come controelettrodo
NaHCO3Wako191-01305Utilizzato per i mezzi di cedro (CMS)
CaCO3Wako030-00385Utilizzato per CMS
NH4ClWako011-03015Utilizzato per CMS
MgCl2  e toro; 6H2OWako135-00165Utilizzato per CMS
NaOH Wako198-13765Utilizzato per CMS
Na2SO4Wako194-03355Utilizzato per CMS
K2HPO4Wako164-04295Utilizzato per CMS
CABSSANTA CRUZSC-285279Utilizzato per CMS
IncubatorTOKYO RIKAKIKAI CO. LTD.LTI-601SDUtilizzato per la precoltivazione
Macchina per autoclaveTOMY SEIKO CO. LTD.LSX-500Utilizzato per la sterilizzazione del reattore elettrochimico e del fluido
Banco pulitoSANYOMCV-91BNFUtilizzato per prevenire la contaminazione del reattore elettrochimico e del mezzo con altri microbi Separatore
centrifugaEppendorf5430RVelocità di rotazione fino a 6000&volte; g è necessario
Generatore di azoto gassosoPuequ CO. LTD.PNTN-2La bombola di azoto può essere utilizzata anche al posto del generatore di gas
Spettrometro UV-VISSHIMADZUUV-1800Utilizzato per l'ottimizzazione della densità cellulare
PotenziostatoBioLogicVMP3Utilizzato per la formazione di biofilm e gli esperimenti sull'effetto isotopico cinetico
Circolatore d'acqua termicoAS ONETR-1AUtilizzato per il mantenimento della temperatura del reattore elettrochimico
Gabbia di FaradayHOKUTO DENKOHS-201SUtilizzato per esperimenti elettrochimici
Camera anaerobicaCOYTypeB (vinile)TO condurre esperimenti
in condizioni anaerobiche
Kit di estrazione del DNA UltracleanMoBio
del reattore da 0,30 mm a

Riferimenti

  1. Nealson, K. H., Saffarini, D. Iron and manganese in anaerobic respiration: environmental significance, physiology, and regulation. Annual Reviews of Microbiology. 48, 311-343 (1994).
  2. Lovley, D. R. Bug juice: harvesting elect....

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Ristampe e permessi

Tag

Trasporto elettronico extracellulareArricchimento in situSistema elettrochimicoSistema a due elettrodiAnodo in feltro di carbonioCatodo placcato in platinoData logger di tensioneAnalisi della comunit microbicaSito di Cedars