Anche se molti insetti in sottordine Heteroptera (Insecta: Hemiptera) sono velenoso, loro composizione del veleno e le funzioni delle loro tossine del veleno sono per lo più sconosciute. Questo protocollo descrive i metodi per la raccolta heteropteran veleni per ulteriore caratterizzazione, mediante elettrostimolazione, molestie e dissezione della ghiandola.
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Articolo metodologico
Raccolta le tossine veleno da Assassin Bugs e altri insetti Heteropteran
In questo articolo
Sommario
Abstract
Heteropteran insetti ad esempio assassin bug (Reduviidae) e insetti giganti di acqua (Belostomatidae) discendono da un antenato comune selvatiche e velenoso, e la maggior parte dei heteropterans esistenti conserva questa strategia trofica. Alcuni heteropterans hanno effettuato la transizione a nutrire il sangue dei vertebrati (ad esempio i bug baciare, eziologico; e cimici, Cimicidae) mentre gli altri sono ritornati all'alimentazione sulle piante (la maggior parte Pentatomomorpha). Tuttavia, con l'eccezione della saliva utilizzata da kissing bugs per facilitare l'alimentazione di sangue, poco è conosciuta circa i veleni di heteropteran rispetto ai veleni di ragni, scorpioni e serpenti.
Un ostacolo alla caratterizzazione delle tossine del veleno di heteropteran è la struttura e la funzione delle ghiandole labiali/veleno, che sono entrambi morfologicamente complessa e svolgere più ruoli biologici (difesa, cattura di prede e digestione extra-orale). In questo articolo, descriviamo tre metodi che abbiamo usato con successo per raccogliere heteropteran veleni. In primo luogo, vi presentiamo l'elettrostimolazione come un modo pratico per raccogliere il veleno che è spesso letale quando iniettato in preda di animali, e che previene la contaminazione di tessuto ghiandolare. In secondo luogo, indichiamo che dolce molestie degli animali sono sufficiente a produrre estrusione di veleno dalla proboscide e/o veleno sputare in alcuni gruppi di heteropterans. In terzo luogo, descriviamo i metodi per raccogliere le tossine veleno tramite la dissezione di animali anestetizzati per ottenere le ghiandole velenifere. Questo metodo è complementare ad altri metodi, come può consentire la raccolta delle tossine da taxa in cui l'elettrostimolazione e molestie sono inefficaci. Questi protocolli permetterà ai ricercatori di raccogliere le tossine da insetti di heteropteran per la caratterizzazione di struttura-funzione e possibili applicazioni in medicina e agricoltura.
Introduzione
Heteropteran veleni sono sostanze bioattive potentemente1. Ad esempio, le secrezioni di veleno/saliva di sangue-alimentazione Heteroptera come kissing bugs (eziologico) e cimici (Cimicidae) facilita l'alimentazione interrompendo l'emostasi2. Tossine in questi veleni bersaglio vie multiple compreso coagulazione, aggregazione piastrinica e vasocostrizione, come pure il dolore e prurito vie. Veleni dalla maggior parte delle altre specie di heteropteran sono adattati per facilitare la predazione, piuttosto che sangue-alimentazione. Loro veleni causano paralisi, morte e liquefazione del tessuto quando iniettato in invertebrat....
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Protocollo
Questo protocollo conforme alle politiche di The University of Queensland enunciati in Responsible Care e utilizzare degli animali nell'insegnamento e nella ricerca (PPL 4.20.11) così come il National Health e Medical Research Council codice australiano per la cura e uso di animali per fini scientifici (8th edizione 2013).
Attenzione: fare attenzione a non per essere envenomated quando si gestisce assassin bug. Fare attenzione a proteggere gli occhi quando si maneggia la specie che sputare veleno sulla difensiva. Prendersi cura in tutto di non ferire gli animali sperimentali. Questo include il monitoraggio della....
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Risultati
Alcune specie di heteropteran, come harpactorine p. plagipennis e il reduviine Platymeris rhadamanthus, resa in modo affidabile grandi quantità (5-20 µ l) di veleno in risposta all'elettrostimolazione (tabella 1). In generale, peiratine, reduviine e harpactorine maggior parte dei bug resa veleno in risposta a questo metodo. Tra stenopodaine bug, elettrostimolazione ha suscitato veleno da sp. Oncocephalus ma non Thodelmus sp. I bug di ho.......
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Discussione
La fase più critica nella raccolta del veleno assassin bug sta selezionando il metodo appropriato a seconda della finalità dello studio. Ognuno dei tre metodi presentati per la raccolta heteropteran veleni ha vantaggi e svantaggi a seconda delle applicazioni a valle.
Inducendo il bug di espellere il veleno da proboscide (protocolli 1-3) evita la contaminazione del veleno dai tessuti ghiandolari. Inoltre, questi metodi sono non-letale e possono essere ripetuti più volte nel corso della vita di .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Riconosciamo finanziari di sostegno dall'Australian Research Council (sovvenzioni DP130103813 e LP140100832 a G.F.K., DECRA Fellowship DE160101142 a ELHAJEB), l'Australian National Health & Medical Research Council (Principal Research Fellowship APP1044414 a G.F.K.) e la University of Queensland (Postdoctoral Fellowship a A.A.W.).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Elettrostimolatore | Grass Technologies | Stimolatore a impulsi quadrati S48 | Elettrostimolatore che consente l'elettrostimolazione pulsata |
| Pinzette leggere come una piuma | Forniture entomologiche australiane | E122B | Per la manipolazione di insetti velenosi vivi |
| Cocktail di inibitori della proteasi | Sigma | 4693124001 | Per prevenire la digestione autoproteolitica del veleno |
| Dissezione attrezzature | Forniture entomologiche australiane | E152Micro | Per dissezioni fini |
| Spille per insetti | Forniture entomologiche australiane | E162 | Per dissezioni fini |
Riferimenti
- Walker, A. A., Weirauch, C., Fry, B. G., King, G. F. Venoms of heteropteran insects: A treasure trove of diverse pharmacological toolkits. Toxins. 8 (2), 43(2016).
- Ribeiro, J. M. C., Assumpção, T. C., Francischetti, I. M. B. An insight into the sialomes of bloodsucking Heteroptera. Psyche (Stuttg). 2012, 1-16 (2012).
- Ambrose, D. P., Ma....
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Ristampe e permessi
