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Articolo metodologico

Formazione di Biofilm orali su differenti materiali per impianti dentali

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DOI:

10.3791/57756

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24 giugno 2018

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In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per la valutazione di biofilm orali su materiali di titanio e ossido di zirconio per i pilastri di protesi dentarie, compresa l'analisi di attuabilità delle cellule batteriche e caratteristiche morfologiche. Un modello in situ associato con tecniche di microscopia potente viene utilizzato per l'analisi di biofilm orale.

Abstract

Impianti dentali e loro componenti protesici sono inclini a colonizzazione batterica e la formazione di biofilm. L'utilizzo di materiali che fornisce bassa adesione microbica può ridurre la prevalenza e la progressione di malattie perimplantari. In considerazione l'ambiente orale complessità e oral biofilm eterogeneità, microscopia sono necessarie tecniche che consentono un'analisi di biofilm delle superfici dei denti e materiali dentali. Questo articolo descrive una serie di protocolli implementati per confrontare la formazione di biofilm orali su titanio e materiali ceramici per pilastri protesici, come pure i metodi coinvolti nelle analisi di biofilm orale a livello morfologico e cellulare. Il modello in situ per valutare la formazione di biofilm orali su materiali di titanio e ossido di zirconio per i pilastri di protesi dentale come descritto in questo studio fornisce una buona conservazione del biofilm 48h, dimostrando in tal modo adeguatezza metodologica. La microscopia multifotonica permette l'analisi di un rappresentante di zona del biofilm formato sui materiali di prova. Inoltre, l'uso di fluorofori e l'elaborazione delle immagini usando la microscopia multifotonica permette l'analisi della redditività batterica in una popolazione molto eterogenea di microrganismi. La preparazione di campioni biologici per microscopia elettronica promuove la conservazione strutturale del biofilm, immagini con una buona risoluzione e senza artefatti.

Introduzione

Biofilm batterici sono complesse, funzionalmente e strutturalmente organizzato comunità microbiche, caratterizzato da una diversità di specie microbiche che sintetizzano un polimero extracellulare, biologicamente attivo matrix1,2. L'adesione batterica alle superfici di tipo biotiche o abiotiche è preceduto da una formazione della pellicola acquisita, costituita principalmente da glicoproteine salivari1,3,4. Deboli interazioni fisico-chimiche tra i microrganismi e la pellicola sono inizialmente stabilite e seguite da f....

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Protocollo

Questo studio è stato approvato dal comitato di revisione istituzionale della facoltà di odontoiatria di Ribeirão Preto, e il partecipante volontario firmato il consenso scritto (processo 2011.1.371.583).

1. di biofilm in Situ

  1. Selezione dei partecipanti
    1. Selezionare i pazienti sulla base dei seguenti criteri di inclusione: un individuo sano con una dentatura completa e nessun segni clinici delle malattie orali.
    2. Escludere i pazienti sulla base dei seguenti criteri di esclusione: gravidanza, allattamento, carie dentale, una malattia parodontale o trattamento antibiotico in ultimi 3 mesi....

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Risultati

La densità di colonizzazione del biofilm dopo 48 h di crescita in situ è stata rappresentata in questo studio la percentuale dell'area colonizzata sui dischi rispetto alla superficie totale digitalizzata del campione usando microscopia multifotonica (titanio e zirconio 26.64 mm2). Figura 2 rappresenta la densità di colonizzazione batterica sulla superficie dei 3 materiali testati. Una maggiore densità del biofilm è stata osservata sulle su.......

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Discussione

Il protocollo descritto in questo studio è stato sviluppato per valutare la formazione di biofilm su materiali di titanio e ossido di zirconio per pilastri protesici, compresa l'analisi di attuabilità delle cellule batteriche e caratteristiche morfologiche. Per ottenere questo risultato, è stato progettato un modello di in situ di formazione del biofilm, che consiste di un dispositivo intraorale in grado di ospitare campioni di prova materiali e tenerli esposta all'ambiente orale dinamico per 48 h. Il dispositiv.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori ringraziano José Augusto Maulin dal laboratorio di microscopia Multiuser (scuola di medicina di Ribeirão Preto) per la sua generosa assistenza con EDS e SEM analisi e Hermano Teixeira Machado per la sua generosa assistenza tecnica nell'edizione dei video.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Hydrogum 5Zhermack DentalC302070
Durone IVDentsply17130500002
filo NiCrMorelli55.01.070
JET acrilico autopolimerizzanteClá ssico
Cera dentale Clá ssico
Pentola a pressione Essencedental
Carte abrasive grana 600NORTONT216
Carte abrasive grana 1200NORTONT401
Carte abrasive grana 2000Lucidatrice metallografica NORTONT402
Arotec
Alcool isopropilicoSIGMA-ALDRICHW292907
Adesivo hot meltTECSILPAH M20017
Filmtracer LIVE/DEAD Kit di vitalità per biofilmInvitrogenL10316
Puntali per pipette, 10 &; LKASVIK8-10   
Puntali per pipette, 1.000 &; LKASVIK8-1000B   
Piastra a 24 pozzetti KASVIK12-024
Piatto con fondo in vetroThermo Scientific150680
AxioObserver microscopio invertitoZEISS
Chameleon vision ii laserObiettivo coerente
EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Olio DICZEISS440452-9903-000
Sensori SDD - X-Max 20mm²Oxford Instruments
Soluzione di glutaraldeideSIGMA-ALDRICHG5882
Tampone di cacodilato di sodio SIGMA-ALDRICH97068 
Tetrossido di osmioSIGMA-ALDRICH201030
Na2HPO4SIGMA-ALDRICHS9638 Utilizzatoper la preparazione di soluzione salina tamponata con fosfato
KH2PO4SIGMA-ALDRICHP9791 
NaClMERK1.06404
KclSIGMA-ALDRICHP9333 
Etanolo assoluto per analisi EMSUREMERK1.00983
CPD 030 Essiccatore a punti criticiBAL-TEC
JSM-6610 Series Microscopio elettronico a scansioneJEOL
SCD 050 Sputter CoaterBAL-TEC

Riferimenti

  1. Do, T., Devine, D., Marsh, P. D. Oral biofilms: molecular analysis, challenges, and future prospects in dental diagnostics. Clinical, Cosmetic and Investigational Dentistry. 5, 11-19 (2013).
  2. Samaranayake, L., Matsubara, V. H.

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Ristampe e permessi

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