Esplorare il potenziale delle cellule staminali mesenchimali foglio sullo sviluppo di Carcinoma epatocellulare In Vivo

Summary

Qui, presentiamo un protocollo per sviluppare un modello in vivo del cancro utilizzando tecnologia dello strato delle cellule. Tale modello potrebbe essere molto utile per la valutazione delle terapie anticancro.

Abstract

Un in vivo modello animale che imita cancro umano potrebbe avere varie applicazioni che forniscono le informazioni cliniche significative. Le tecniche attualmente utilizzate per lo sviluppo di modelli di cancro in vivo hanno notevoli limitazioni. Pertanto, in questo studio, miriamo a implementare la tecnologia dello strato delle cellule per sviluppare un modello di cancro in vivo . Carcinoma epatocellulare (HCC) è sviluppato con successo in nudi ratti utilizzando fogli di cella create da cellule di HCC cella linea. I fogli di cellule di cancro sono generati tramite adesione intracellulare e la formazione di una struttura stratificata, controllata dalla matrice extracellulare. Ciò consente il trapianto di foglio HCC in fegato e la creazione di un modello animale del tumore-cuscinetto entro un mese. Inoltre, il ruolo delle cellule staminali mesenchimali (MSC) nello sviluppo di questo modello di cancro è studiato. Oltre il foglio di linea delle cellule HCC, un'altra cella due fogli vengono creati: un foglio delle cellule HCC e midollo osseo MSCs (BMMSCs) e un foglio di cellule di HCC e cordone ombelicale MSCs (UCMSCs). Fogli che hanno una combinazione di entrambe le cellule HCC e MSCs sono anche in grado di produrre un animale del tumore-cuscinetto. Tuttavia, l'aggiunta di MSCs riduce le dimensioni del formato di tumore, e questo effetto negativo sullo sviluppo del tumore varia a seconda origine dei MSCs usate. Questo indica che una lastra cella determinati sottotipi MSC poteva essere utilizzata nel controllo e gestione di tumore.

Introduction

HCC è un cancro primario del fegato che è significativamente associato con una prognosi difficile. Ogni anno, quasi mezzo milione nuovi pazienti sono diagnosticati con HCC, che rappresenta 85% dei pazienti di cancro del fegato nel mondo¹. Hepatocarcinogenesis non è una malattia di form singolo; piuttosto, è una collezione di malattie che hanno differenti caratteristiche istopatologiche e variabilità genetica e genomica, oltre alla varia prognostici risultati¹. Di conseguenza, le principali sfide nello sviluppo di un'efficace strategia terapeutica per HCC sono la limitata conoscenza della biologia HCC e la mancanza di un ....

Protocol

Il protocollo segue le indicazioni di cura degli animali del comitato etico di King Saud University. Le procedure chirurgiche, anestetici e altri farmaci usati sugli animali sono approvati dal comitato etico di King Saud University. Tutto il lavoro sperimentale è eseguito da personale opportunamente addestrato.

1. cella foglio costruzione

1. Spalmate le piastre di coltura (piastre di coltura termosensibile 3.5 cm) non diluito siero bovino fetale (FBS) e garantire per coprire tutta la superficie del piatto.
   Nota: Questo passaggio è importante per il distacco dello strato di cellule dal momento che supporta la crescita delle cellule....

Results

Carcinogenicità di strati delle cellule trapiantate in ratti:

Un mese dopo il trapianto, tutti i fogli delle cellule trapiantate in fegati di ratti hanno sviluppato tumori (Figura 3). La dimensione media dei tumori sviluppati da HepG2, HepG2/BMMSC e strati delle cellule HepG2/UCMSC erano 4,5 cm, 4 cm e 2,5 cm, rispettivamente¹⁰.

Discussion

Una vasta quantità di ricerca è dedicata allo sviluppo di un'adeguata in vivo animale modello preclinico analogo cancri umani. Attualmente, gli approcci principali utilizzati per creare modelli animali di cancro coinvolgono ingegneria genetica e delle cellule trapianto¹¹. Modelli animali geneticamente modificati sono buoni strumenti per l'identificazione e la validazione dei geni bersaglio, come pure la comprensione dei meccanismi molecolari alla base di tossicità indotta da farmaci. Tutt.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagenti
FBS	Gibco/Invitrogen	10270106
DMEM ad alto contenuto di glucosio	Sigma	D5671-500ML
Penicillina/streptomicina	Life Technology	15070063
Soluzione fisiologica sterile	Sigma	S0817-1GA
Linea cellulare HepG2 umana	ATCC, USA	HB-8065
cellulare MSC del midollo osseo umano	PromoCell, USA	C-12974
MSC del tessuto del cordone ombelicale umano	PromoCell, USA	C-12971
Ketamina 50%	Rompun, Bayer
Xylazine 2%	Rompun	23076-35-9
Alphadine.   soluzione.	Riyadh Pharma	LBL0816
Monouso:
15mL Polipropilene ad alta trasparenza	Centrifuga Tube Falcon
piastre sterili UpCell da 3,5 cm con carta da filtro (membrana)	Sigma	174904-1CS
100-1000 &; l   Puntali per pipette	Sigma	CLS4868-1000EA
Procedura di base Telo	Thermofisher	PMD5293.0
Equipment  Pipetta
Plus, volume variabile	Eppendorf®   Ricerca®	Z683779-1EA
Incubatore per colture tissutali 37 gradi C, 5% CO2	Qualsiasi marca
Cabina di sicurezza biologica	Qualsiasi marca
Incubatore per colture tissutali 20 gradi; C, 5% CO2	Qualsiasi marca
Strumenti chirurgici sterili e ratti nudi:
Forcipe
Forbici
bisturi
Sutura in nylon  5-0	Accutome	AB-3854S	Monofilamento, Lancetta
1 ml Siringhe per tubercolina	Fisher Scientific	14-826-88
Ratti nudi	Fiume