Qui, presentiamo un protocollo per sviluppare un modello in vivo del cancro utilizzando tecnologia dello strato delle cellule. Tale modello potrebbe essere molto utile per la valutazione delle terapie anticancro.
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Articolo metodologico
Qui, presentiamo un protocollo per sviluppare un modello in vivo del cancro utilizzando tecnologia dello strato delle cellule. Tale modello potrebbe essere molto utile per la valutazione delle terapie anticancro.
Un in vivo modello animale che imita cancro umano potrebbe avere varie applicazioni che forniscono le informazioni cliniche significative. Le tecniche attualmente utilizzate per lo sviluppo di modelli di cancro in vivo hanno notevoli limitazioni. Pertanto, in questo studio, miriamo a implementare la tecnologia dello strato delle cellule per sviluppare un modello di cancro in vivo . Carcinoma epatocellulare (HCC) è sviluppato con successo in nudi ratti utilizzando fogli di cella create da cellule di HCC cella linea. I fogli di cellule di cancro sono generati tramite adesione intracellulare e la formazione di una struttura stratificata, controllata dalla matrice extracellulare. Ciò consente il trapianto di foglio HCC in fegato e la creazione di un modello animale del tumore-cuscinetto entro un mese. Inoltre, il ruolo delle cellule staminali mesenchimali (MSC) nello sviluppo di questo modello di cancro è studiato. Oltre il foglio di linea delle cellule HCC, un'altra cella due fogli vengono creati: un foglio delle cellule HCC e midollo osseo MSCs (BMMSCs) e un foglio di cellule di HCC e cordone ombelicale MSCs (UCMSCs). Fogli che hanno una combinazione di entrambe le cellule HCC e MSCs sono anche in grado di produrre un animale del tumore-cuscinetto. Tuttavia, l'aggiunta di MSCs riduce le dimensioni del formato di tumore, e questo effetto negativo sullo sviluppo del tumore varia a seconda origine dei MSCs usate. Questo indica che una lastra cella determinati sottotipi MSC poteva essere utilizzata nel controllo e gestione di tumore.
HCC è un cancro primario del fegato che è significativamente associato con una prognosi difficile. Ogni anno, quasi mezzo milione nuovi pazienti sono diagnosticati con HCC, che rappresenta 85% dei pazienti di cancro del fegato nel mondo1. Hepatocarcinogenesis non è una malattia di form singolo; piuttosto, è una collezione di malattie che hanno differenti caratteristiche istopatologiche e variabilità genetica e genomica, oltre alla varia prognostici risultati1. Di conseguenza, le principali sfide nello sviluppo di un'efficace strategia terapeutica per HCC sono la limitata conoscenza della biologia HCC e la mancanza di un ....
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Il protocollo segue le indicazioni di cura degli animali del comitato etico di King Saud University. Le procedure chirurgiche, anestetici e altri farmaci usati sugli animali sono approvati dal comitato etico di King Saud University. Tutto il lavoro sperimentale è eseguito da personale opportunamente addestrato.
1. cella foglio costruzione
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Carcinogenicità di strati delle cellule trapiantate in ratti:
Un mese dopo il trapianto, tutti i fogli delle cellule trapiantate in fegati di ratti hanno sviluppato tumori (Figura 3). La dimensione media dei tumori sviluppati da HepG2, HepG2/BMMSC e strati delle cellule HepG2/UCMSC erano 4,5 cm, 4 cm e 2,5 cm, rispettivamente10.
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Una vasta quantità di ricerca è dedicata allo sviluppo di un'adeguata in vivo animale modello preclinico analogo cancri umani. Attualmente, gli approcci principali utilizzati per creare modelli animali di cancro coinvolgono ingegneria genetica e delle cellule trapianto11. Modelli animali geneticamente modificati sono buoni strumenti per l'identificazione e la validazione dei geni bersaglio, come pure la comprensione dei meccanismi molecolari alla base di tossicità indotta da farmaci. Tutt.......
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Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Gli autori vorrei ringraziare il personale della chirurgia sperimentale e laboratorio animale presso il College of Medicine, re Saud University, per la loro cooperazione e assistenza-soprattutto Hussain Almukhayzim e Hisham Aloudah. Gli autori inoltre desidera ringraziare il team di media King Saud bin Abdul-Aziz University per la preparazione di visual materiale-soprattutto Muath bin Ghannam e Abdulwahab Alsulami.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagenti | |||
| FBS | Gibco/Invitrogen | 10270106 | |
| DMEM ad alto contenuto di glucosio | Sigma | D5671-500ML | |
| Penicillina/streptomicina | Life Technology | 15070063 | |
| Soluzione fisiologica sterile | Sigma | S0817-1GA | |
| Linea cellulare HepG2 umana | ATCC, USA | HB-8065 | |
| cellulare MSC del midollo osseo umano | PromoCell, USA | C-12974 | |
| MSC del tessuto del cordone ombelicale umano | PromoCell, USA | C-12971 | |
| Ketamina 50% | Rompun, Bayer | ||
| Xylazine 2% | Rompun | 23076-35-9 | |
| Alphadine. soluzione. | Riyadh Pharma | LBL0816 | |
| Monouso: | |||
| 15mL Polipropilene ad alta trasparenza | Centrifuga Tube Falcon | ||
| piastre sterili UpCell da 3,5 cm con carta da filtro (membrana) | Sigma | 174904-1CS | |
| 100-1000 &; l Puntali per pipette | Sigma | CLS4868-1000EA | |
| Procedura di base Telo | Thermofisher | PMD5293.0 | |
| Equipment Pipetta | |||
| Plus, volume variabile | Eppendorf® Ricerca® | Z683779-1EA | |
| Incubatore per colture tissutali 37 gradi C, 5% CO2 | Qualsiasi marca | ||
| Cabina di sicurezza biologica | Qualsiasi marca | ||
| Incubatore per colture tissutali 20 gradi; C, 5% CO2 | Qualsiasi marca | ||
| Strumenti chirurgici sterili e ratti nudi: | |||
| Forcipe | |||
| Forbici | |||
| bisturi | |||
| Sutura in nylon 5-0 | Accutome | AB-3854S | Monofilamento, Lancetta |
| 1 ml Siringhe per tubercolina | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Ratti nudi | Fiume |
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