Questo articolo descrive un protocollo dettagliato ed altamente efficace per le registrazioni di single sensillum dalla basiconica di sensilli sul palpi dell'apparato boccale degli insetti.
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Articolo metodologico
Sensillum singole registrazioni per Locust Palp sensilli Basiconica
In questo articolo
Sommario
Abstract
I palpi dell'apparato boccale locusta sono considerati organi gustativi convenzionali che svolgono un ruolo importante nella selezione di cibo di una locusta, soprattutto per il rilevamento dei segnali chimici non volatile attraverso sensilli chaetica (precedentemente denominato terminal sensilli o crestati sensilli). C'è ora aumentando la prova che questi palpi hanno anche una funzione olfattiva. Un recettore odorizzante (LmigOR2) e un odorant-binding protein (LmigOBP1) sono state localizzate nei neuroni e nelle cellule accessorio, rispettivamente, la basiconica di sensilli dei palpi. Single sensillum (SSR) di registrazione utilizzato per registrare le risposte dei neuroni odorant, che è un metodo efficace per lo screening di ligandi attivi sui recettori specifici odoranti. SSR è utilizzata negli studi funzionali dei recettori odorant in sensilli palpo. La struttura del basiconica di sensilli situato sulla cupola dei palpi differisce da piuttosto dalla struttura di quelli sulla antenne. Di conseguenza, quando si esegue un SSR suscitato da odoranti, qualche consiglio specifico può essere utile per ottenere risultati ottimali. In questa carta, è stato introdotto un protocollo dettagliato e altamente efficace per un relè SSR da insetto palpo sensilli basiconica.
Introduzione
Gli animali si sono evoluti una gamma di chemosensory organi che percepiscono segnali chimici esogeni. In insetti, organi chemosensory più importanti sono le antenne e i palpi. Su questi organi, diversi tipi di peli chemosensory, chiamati sensilli chemosensory, sono innervati dai neuroni chemosensory (CSNs) entro i peli. CSNs in sensilli chemosensory riconoscere specifici segnali chimici attraverso la trasduzione del segnale da stimoli chimici a potenziali elettrici che vengono successivamente trasferiti fino al sistema nervoso centrale1,2,3 .
CSNs....
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Protocollo
1. preparazione degli strumenti e dell'insetto
-
Preparazione delle soluzioni di elettrodi e stimoli tungsteno
- Difficoltà un nuovo filo di tungsteno (diametro di 0,125 mm, lunghezza 75 mm) in un micromanipolatore e affilarlo in una soluzione di nitrito (NaNO2) di sodio 10% (p/v) in una siringa a 10 V fornita da un alimentatore per circa 1 min sotto uno stereomicroscopio (ingrandimento 40x).
- Immergere il filo di tungsteno affilata ripetutamente nel NaNO2 soluzione al 10%, circa 4 mm a 5 V in < 1 min (Figura 1A).
- Esaminare il diametro della punta affilata tungst....
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Risultati
Due sottotipi di sensilli (pb1 e pb2) sul palpo mascellare locuste vengono identificati in base a dinamiche di risposta diversa per chimica odoranti (isoottanolo 1 10% e 10% acido nonanoico). I neuroni in pb1 producono picchi significativamente più di 1-isoottanolo rispetto ad acido nonanoico mentre i neuroni in pb2 sono significativamente che meno attivata da 1 isoottanolo rispetto ad acido nonanoico (Figura 4). Esanale ed E-2-esenale può evocare un palpo lo.......
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Discussione
Gli insetti si basano su palpi per rilevare gli odori degli alimenti, e loro palpi sono creduti per svolgere un ruolo importante nella speciazione13,27. I palpi sono semplici organi olfattivi e stanno ricevendo crescente attenzione come un modello interessante per l'esplorazione della neuromolecular reti sottostanti chemosensation28.
Insetto labellar e palpo SSRs sono stati effettuati con successo su Drosoph.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è sostenuto da una sovvenzione dalla Fondazione Nazionale Scienze naturali della Cina (No.31472037). Qualsiasi menzione di marchi o prodotti commerciali in questo articolo è solo scopo di fornire informazioni specifiche e non implica una raccomandazione.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Filo di tungsteno | ADVENT | W559504 | Utilizzato per realizzare l'elettrodo e fissare il palp |
| NaNO2 | Sigma-aldrich | 563218-25G | Utilizzato per affilare il filo di tungsteno |
| Alimentatore CA | Syntech | A2-70 | Fornire la tensione nell'affilatura del filo di tungsteno |
| Stereoscopio | Motic | SMZ-163 | Utilizzato per osservare il affilatura del filo di tungsteno |
| Microscopio | Olympus | W-51 | Utilizzato per osservare i sensilli sul palpo mascellare della locusta |
| Controller intelligente di acquisizione dati | Syntech | IDAC-4 | Visualizzazione su schermo in tempo reale di tutti i segnali prima e durante la registrazione |
| Controllore di stimolo | Syntech | CS-55 | Utilizzato per il controllo dell'applicazione di stimolo |
| Elettronico micromanipolatore | C.M.D.T | CFT-8301D | Utilizzato per il movimento minore dell'elettrodo di registrazione |
| Micromanipolatore | Narishige | MN-151 | Utilizzato per il movimento minore dell'elettrodo di riferimento |
| EDIFIER | dell'altoparlante R101T06 | Collegato con IDAC-4 e che fornisce il suono per il segnale | |
| Base magnetica | PDOK | PD-101 | Utilizzato per tenere l'elettrodo e il tubo di erogazione dello stimolo |
| Tavolo di isolamento dalle vibrazioni | TianHe | HAP-100-1208 | Utilizzato per isolare le vibrazioni dall'apparecchiatura |
| Vetrino | CITOGLAS | ZBP-407 | Utilizzato per realizzare la base per l'MPH |
| Blu-tack | Bostik | Blu-tack-45g | Fissaggio del filo di tungsteno |
| Tubo Pasteur | YARE | WITEG | Posizionamento della carta da filtro contenente stimoli soluzioni di stimolo |
Riferimenti
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S.
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Ristampe e permessi
