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Research Article
Katherine M. Martin1, Elizabeth A. Hasenmueller2, John R. White3, Lisa G. Chambers4, Jeremy L. Conkle1
1Department of Physical and Environmental Sciences,Texas A&M University-Corpus Christi, 2Department of Earth and Atmospheric Sciences,Saint Louis University, 3Department of Oceanography and Coastal Sciences,Louisiana State University, 4Department of Biology,University of Central Florida
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Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Maggior parte della ricerca microplastic fino ad oggi si è verificato nei sistemi marini dove sono relativamente bassi livelli di solidi sospesi. Attenzione si sta ora spostando ai sistemi d'acqua dolce, che possono caratterizzato da carichi di alta sedimenti e detriti galleggianti. Questo protocollo risolve raccogliendo ed analizzando campioni di microplastic provenienti dagli ambienti acquatici che contengono carichi elevati di solidi sospesi.
La presenza ubiquitaria di detriti di plastica nell'oceano è ampiamente riconosciuta dalla comunità scientifica, pubbliche e agenzie governative. Tuttavia, solo recentemente microplastiche nei sistemi d'acqua dolce, come fiumi e laghi, stato quantificato. Campionamento di Microplastic alla superficie solitamente consiste di distribuzione di reti da posta dietro neanche una barca fissa o in movimento, che limita il campionamento per ambienti con bassi livelli di sospese sedimenti e detriti galleggianti o sommersi. Gli studi precedenti che impiegate reti da posta derivanti per raccogliere microplastic detriti in genere utilizzato reti con ≥ 300 µm maglia, permettendo di detriti in plastica (particelle e fibre) sotto questa dimensione per passare attraverso la rete e quantificazione di eludere. Il protocollo dettagliato qui consente: 1) campionario in ambienti con alta sospesi carichi e galleggianti o sommerse detriti, 2) la cattura e la quantificazione di fibre e particelle microplastic < 300 µm. campioni di acqua sono stati raccolti utilizzando un pompa peristaltica in contenitori di polietilene a bassa densità (PE) per essere archiviati prima di filtraggio e di analisi in laboratorio. Filtrazione è stato fatto con un dispositivo di filtrazione microplastic su misura contenenti staccabili giunti di Unione che ospitava in nylon mesh setacci e misto cellulosa filtri a membrana estere. Maglia setacci e filtri a membrana sono stati esaminati con un microscopio stereoscopico a quantificare e separare le fibre e le particelle in microplastic. Questi materiali sono stati poi esaminati usando una riflettanza totale attenuata micro Fourier transform infrared spectrometer (micro ATR-FTIR) per determinare il tipo di polimero di microplastic. Recupero è stata misurata da chiodare campioni usando blu PE polveri e fibre di nylon verde; recupero percentuale è stata determinata per essere 100% per il particolato e 92% per le fibre. Questo protocollo guiderà studi simili su microplastiche nei fiumi ad alta velocità con alte concentrazioni di sedimento. Con semplici modifiche alla pompa peristaltica e dispositivo di filtrazione, gli utenti possono raccogliere e analizzare i vari volumi di campione e dimensioni del particolato.
Plastica in primo luogo è stata osservata nell'oceano più presto 1930s1. Stime recenti della gamma di detriti marini di plastica da oltre 243.000 tonnellate metriche (MT) di plastica sulla superficie dell'oceano a MT 4,8-12,7 milioni di plastica entrando sull'oceano da terrestre fonti annualmente2,3. I primi studi su detriti marini plastica focalizzata sulla macroplastics (> 5 mm di diametro) come sono facilmente visibili e quantificabili. Tuttavia, recentemente è stato scoperto che rappresentano macroplastics < 10% dei detriti in plastica, dal conteggio, nell'oceano, che indica che la stragrande maggioranza dei detriti in plastica è microplastic (< 5 mm di diametro)2.
Microplastiche sono suddivise in due gruppi: microplastiche primario e secondario. Microplastiche primari sono costituiti da materie plastiche che sono fabbricate a un diametro < 5 mm e includono nurdles, crudo pellet usato per fare prodotti di consumo, microsfere usato come esfolianti in prodotti di cura personale (ad es., lavaggio del viso, scrub corpo, dentifricio in pasta) e abrasivi o lubrificanti nell'industria. Microplastiche secondari vengono creati all'interno dell'ambiente come detriti di plastica più grandi sono frammentato da fotolisi, abrasione e decomposizione microbica4,5. Fibre sintetiche sono anche microplastiche secondario e una preoccupazione crescente. Può rilasciare un singolo indumento > 1.900 fibre per lavare in lavatrice domestica6. Queste microfibre, come pure di microsfere da prodotti di cura personale, vengono lavati giù gli scoli e nel sistema fognario prima di entrare in impianti di trattamenti delle acque reflue. Murphy (2016) trovato che un impianto di trattamento delle acque reflue che serve una popolazione di 650.000 ridotto la concentrazione di microplastic di 98,4% da affluente di effluente, ancora 65 milioni microplastiche rimase in acque reflue e fanghi ogni giorno7. Anche con alte percentuali di microplastiche viene rimosso durante i processi di trattamento, milioni, forse miliardi, di microplastiche passano attraverso impianti di trattamento delle acque reflue al giorno e immettere acque superficiali degli effluenti6,8 ,9,10,11.
A causa del loro rilascio nell'ambiente, microplastiche sono stati trovati nei tessuti digestivi e respiratori di organismi marini attraverso tutti i livelli trofici12,13,14,15. Loro impatto dopo l'assorbimento è variabile, con alcuni studi danno non osservazione, mentre altri dimostrano numerosi effetti quali fisica e chimica del tessuto danno4,6,14,15. A causa di queste scoperte, l'interesse in questo campo è aumentato negli ultimi cinque decenni. Tuttavia, solo recentemente hanno cominciati a quantificare i detriti in plastica, particolarmente microplastiche, nei sistemi d'acqua dolce, come fiumi e laghi, o valutare l'effetto sugli organismi che abitano in questi habitat12,16, studi 17,18. I fiumi sono una fonte importante di plastica detriti trovati nell'oceano come ricevono scarichi di acque reflue e il deflusso di acque superficiali che contengono microplastiche e macroplastics.
Il protocollo dettagliato qui può essere utilizzato per raccogliere campioni di microplastic dove le reti da posta derivanti non sono realizzabili; in particolare, negli ambienti acquatici con alte concentrazioni di sedimenti sospesi e grandi detriti come il fiume Mississippi galleggianti. Lo spartiacque del fiume del Mississippi è uno dei più grandi del mondo ed ha una popolazione di > 90 milioni di persone, probabilmente rendendola una delle maggiori fonti di detriti in plastica per l'oceano19,20. Ogni anno, il fiume del Mississippi gli scarichi una media di 735 km3 di acqua dolce nel Golfo del Messico, insieme con alte concentrazioni di sedimenti sospesi (~ 60 a > 800 mg/L) e grandi detriti13,21. Sono stati raccolti campioni di acqua a due profondità (cioè, superficie e profondità di 0,6) in varie località lungo il fiume Mississippi e i suoi affluenti in contenitori di polietilene a bassa densità (PE) 1L traslucido utilizzando una pompa peristaltica. In laboratorio, i campioni sono stati filtrati utilizzando nylon mesh setacci e filtri a membrana estere mista cellulosa simultaneamente con un cilindro di cloruro di polivinile (PVC) su misura 63,5 mm (2,5 pollici) con giunti di Unione per inserire i filtri e setacci22. L'inclusione delle unioni di PVC nel dispositivo di filtrazione permette per la filtrazione di come tante o poche classi di dimensione delle particelle come desiderato. Inoltre, può essere utilizzato per catturare microplastic detriti fino a dimensioni inferiori al micron utilizzando filtri a membrana quando si studia fibre sintetiche. Una volta filtrato, i campioni sono stati essiccati e materie plastiche sospette sono state identificate e ordinate dalla maglia setacci e filtri a membrana sotto un microscopio stereoscopico. Materie plastiche sospetta quindi sono state esaminate usando micro-attenuato di riflettanza totale spettroscopia infrarossa trasformata di Fourier (micro ATR-FTIR) per eliminare i materiali non sintetici o per determinare il tipo di polimero. Considerando le dimensioni di microplastic polveri e fibre, la contaminazione è all'ordine del giorno. Fonti di contaminazione includono la deposizione atmosferica, abbigliamento, attrezzature di laboratorio e di campo, come pure deionizzata (DI) fonti d'acqua. Più passaggi sono incluse in tutto il protocollo per ridurre la contaminazione da varie fonti durante lo svolgimento di tutte le fasi dello studio.
1. raccolta di campioni di acqua
2. TSS determinazione
3. montaggio del dispositivo di filtrazione Microplastic

Figura 1 : Montaggio del dispositivo di filtrazione. (A) il dispositivo di filtrazione è assemblato mettendo setacci di maglie di dimensione dei pori desiderata nei giunti di Unione superiori. (B), la cellulosa mista estere membrana filtro/i devono essere piegati in una forma conica per adattarsi al diametro del dispositivo di filtrazione; il cono deve includere un piccolo labbro per adattarsi sopra il bordo dell'Unione congiunta per fissare il filtro in luogo. (C) A cestello in rete viene inserito nell'Unione per aggiungere stabilità per la membrana filtrante. (D), il filtro a membrana piegato è aggiunto al carrello della maglia e le maglie più piccole del setaccio sono posizionata sopra la parte superiore della membrana filtrante. Dispositivo di filtrazione (E) completamente assemblato. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2 : Assemblea del pallone e della pompa filtro. Un pallone filtrante è collegato all'adattatore vuoto dispositivo di filtrazione utilizzando un tubo in vinile trasparente. Il pallone filtrante viene quindi collegato alla pompa del vuoto. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
4. campione filtrazione
5. Smontaggio del dispositivo di filtrazione Microplastic
6. particolato analisi
Per convalidare i tassi di recupero del presente protocollo, tre campioni (V1V -3) dalla baia di Oso, Corpus Christi, Texas (adiacente il Texas A & M University Campus di Corpus Christi), sono stati addizionati con particolati PE 10 blu (che vanno da 50-100 µm in diametro) e 50 fibre di nylon verde di varie lunghezze (Figura 3). TSS del campione è stata calcolata (sezione 2) e quindi i campioni sono stati filtrati utilizzando i metodi descritti nelle sezioni 3-5. Il blu PE polveri e fibre di nylon verde poi sono stati separati e quantificati (tabella 1). Altre fibre e particelle sono state osservate sulla maglia setacci e filtri a membrana, probabilmente derivati dal campione di acqua di Oso Bay. In media, 100% del particolato PE e il 92% di fibre di nylon sono stati recuperati. Una perdita di fibre può essere dovuto una piccola quantità di perdita del campione durante la filtrazione o identificazione errata.
Un vuoto di attrezzature sono stati raccolti dal dispositivo di filtrazione filtrando 1000 mL di acqua deionizzata. Questo vuoto è stato analizzato usando 100 µm e 50 µm maglia setacci e un filtro a membrana da 0,45 µm. Un totale di 7 fibre (blu e trasparente) sono stati trovati nell'apparecchiatura in bianco. Questa contaminazione avrebbe potuto essere dal dispositivo di filtrazione, attrezzature di laboratorio, la deposizione atmosferica o DI acqua. Tuttavia, le fibre non erano simili al blu PE polveri e fibre di nylon verde utilizzati per i campioni di spike.
Questo protocollo è stato creato per processare i campioni dallo spartiacque del fiume Mississippi, tra cui mainstem Mississippi River e il fiume Missouri. Analisi preliminari dal fiume Mississippi e Missouri River ha avuto una media TSS di 63 mg/L. Mentre i valori di TSS di Oso Bay sono in genere inferiori a quelli osservati nel bacino del fiume Mississippi, sedimento è stato intenzionalmente disturbato prima della raccolta dell'acqua per simulare le più alte concentrazioni di materiale solido in sospensione che potrebbero essere incontrate nel grande fiume sistemi. Il TSS medio nei campioni Oso Bay era 1.865 mg/L, che è ~ 30 volte superiore il TSS calcolato per i campioni del fiume Mississippi e Missouri River. I campioni di Oso Bay torbidi suggeriscono filtrazione successo per campioni con un TSS fino a ~ 1.800 mg/l usando le tecniche descritte qui.

Figura 3 : Polveri e fibre utilizzate per la convalida di recupero percentuale. Immagine di due blu PE particolato e di due fibre di nylon verde in una gamma dei formati utilizzati a picco i campioni di convalida da Oso Bay a Corpus Christi, Texas. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Campione | TSS (g/L) | 0,45 μm | 50 μm | 100 μm | Totale | % Recuperato | |||||
| Fibre | Particolato | Fibre | Particolato | Fibre | Particolato | Fibre | Particolato | Fibre | Particolato | ||
| V1 | 4.663 | 1 | 0 | 18 | 0 | 31 | 10 | 50 | 10 | 100 | 100 |
| V2 | 0 | 0 | 21 | 0 | 28 | 10 | 49 | 10 | 98 | 100 | |
| V3 | 0 | 0 | 27 | 0 | 14 | 10 | 41 | 10 | 82 | 100 |
Tabella 1: risultati da campioni convalida. Un determinato numero di fibre di nylon verde e blu PE particolati sono stati aggiunti ai campioni prelevati da Oso Bay a Corpus Christi, Texas, per convalidare il protocollo di analisi e di dispositivo di filtrazione. Tre campioni di convalida microplastic (V1V -3) e un campione di TSS sono state scattate nella stessa posizione sulla riva del Oso Bay. Le fibre e particelle sono stati quantificati per ogni dimensione dei pori e un totale è stato calcolato per ogni campione di validazione. Con una quantità nota di fibre e di particelle utilizzati a picco i campioni e il totale recuperato da ciascun campione, il recupero percentuale è stato calcolato.
Il protocollo è stato progettato anche per fiumi di campione da due profondità: la superficie (la profondità del fiume con il più alta velocità) e 0,6-profondità (la profondità del fiume con velocità circa media per la colonna intera acqua). Campioni dal fiume Mississippi e Missouri River (tabella 2) sono stati raccolti e analizzati come descritto sopra. Per esaminare l'effetto di profondità sulla concentrazione di microplastic, sono stati prelevati i campioni di primi e secondo nella stessa posizione (cioè, il fiume del Mississippi a Alton, Illinois) ma a profondità diverse. Per esaminare i possibili effetti di campionamento posizione durante il caricamento di microplastic, sono stati prelevati i campioni primi e la terzi alla stessa profondità, ma in luoghi diversi (cioè, il fiume Mississippi a Alton, Illinois e il fiume Missouri sopra Saint Louis, Missouri). Esempi di fibre e particelle trovati nei campioni di bacino del fiume Mississippi preliminari sono mostrati in Figura 4.
| Posizione | Stazione di misurazione di USGS | Profondità | Torbidità | TSS | Fibre | Particelle | Fibre | Particelle | Fibre | Particelle | Fibre | Particelle | Totale | Fibra / Particule rapporto |
| 0.45 mm | 50 mm | 100 mm | Totale | |||||||||||
| m | NTU | g/L | N. /L | |||||||||||
| MS; Alton, IL | USGS 05587498 | 0 | 38,3 | 0,063 | 80 | 0 | 126 | 1 | 54 | 1 | 260 | 2 | 262 | 130 |
| MS; Alton, IL | USGS 05587498 | 20,1 | 61,4 | 0.090 | 191 | 0 | 151 | 5 | 195 | 1 | 537 | 6 | 543 | 90 |
| MO; Fondo di Columbia, MO | USGS 06935965 | 0 | 30,8 | 0,036 | 122 | 4 | 57 | 0 | 37 | 0 | 216 | 4 | 220 | 54 |
| MS = fiume del Mississippi; MO = fiume del Missouri |
Tabella 2: i dati di raccolta e analisi di esempio di fiume del Mississippi spartiacque. Nei pressi di USGS stazioni presso il fiume Mississippi e Missouri River di misura sono stati raccolti campioni preliminari. Profondità (m), torbidità (NTU) e TSS (mg/L) sono stati misurati per ogni sito. Campioni sono stati filtrati e analizzati in seguito questo protocollo. Fibre e particelle sono stati quantificati per 50 µm e la dimensione dei pori di 100 µm mesh setacci, nonché un filtro a membrana da 0,45 µm. A causa di una mancanza di materiali raccolti su un setaccio con maglie 500 µm, questa dimensione è escluso dai risultati presentati.

Figura 4 : Esempio polveri e fibre trovano in campioni preliminari dallo spartiacque del fiume Mississippi. Immagini di fibre e di particelle quantificati in un campione (tabella 2) scattato dalla superficie del fiume del Mississippi a Alton, Illinois. (A) immagine di due fibre blu che variano nel formato su un filtro a membrana da 0,45 µm. (B) immagine di un rosso del particolato e varie fibre trovate su un setaccio con maglie 50 µm, mostrando la gamma in colore, dimensione e forma di microplastiche trovato nel bacino del fiume Mississippi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Maggior parte della ricerca microplastic fino ad oggi si è verificato nei sistemi marini dove sono relativamente bassi livelli di solidi sospesi. Attenzione si sta ora spostando ai sistemi d'acqua dolce, che possono caratterizzato da carichi di alta sedimenti e detriti galleggianti. Questo protocollo risolve raccogliendo ed analizzando campioni di microplastic provenienti dagli ambienti acquatici che contengono carichi elevati di solidi sospesi.
Il progetto per il quale è stato istituito questo protocollo è stato finanziato dal National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA) programma di detriti marini (n # NA16NO29990029). Vi ringraziamo Miles Corcoran alle grandi fiumi National Research and Education Center (NGRREC) a Alton, Illinois, per aiuto con operazione di selezione e barca di sito. Lavoro di campo e di laboratorio è stato completato con l'aiuto di Camille Buckley, Michael Abegg, Josiah Wray e Rebecca Wagner.
| Contenitori Cubitainer da 1 litro in polietilene a bassa densità | VWR | 89094-140 | Contenitori utilizzati per raccogliere e conservare i campioni. |
| 2-1/2" Clear Schedule 40 Tubo in PVC rigido | United States Plastic Corporation | 34138 | Il tubo in PVC utilizzato per realizzare il dispositivo viene fornito come un tubo da 2,43 m. Il tubo è stato quindi tagliato alle lunghezze desiderate per ogni sezione separata da giunti di unione. Le lunghezze delle sezioni sono state decise prevedendo che le dimensioni dei pori più piccole avrebbero intasato il dispositivo più rapidamente. Sezioni più lunghe sono state posizionate sopra le dimensioni dei pori più piccole per raccogliere e trattenere l'acqua per evitare di dover smontare il dispositivo per cambiare un filtro mentre un campione rimaneva nel dispositivo. Per un dispositivo di filtrazione sono necessari un pezzo da 18 pollici, uno da 12 pollici e due da 6 pollici. |
| 2-1/2" PVC SCH 40 Presa di raccordo | I giunti di unionedella Supply House | 457-025 | sono stati incollati su un tubo in PVC per alloggiare setacci in nylon e membrane in cellulosa mista. |
| Foglio di rete intrecciata in nylon 6, bianco sporco opaco, larghezza 12", lunghezza 12", dimensione della maglia 500 micron, area aperta 38% (confezione da 5) | Piccole parti tramite Amazon | CMN-0500-C/5PK-05 | I fogli di rete sono stati tagliati in cerchi per corrispondere al diametro del diametro esterno del tubo in PVC. I bordi sono stati incollati per garantire che non si verificassero sfilacciamenti. Il diametro della colla non deve estendersi nel diametro interno del PVC in modo che non venga influenzato durante la filtrazione. |
| Foglio di rete tessuta in nylon 6, bianco opaco, larghezza 12", lunghezza 12", dimensione della maglia 100 micron, area aperta del 44% (confezione da 5) | Piccole parti tramite Amazon | B0043D1TB4 | I fogli di rete sono stati tagliati in cerchi per corrispondere al diametro esterno del tubo in PVC. I bordi sono stati incollati per garantire che non si verificassero sfilacciamenti. Il diametro della colla non deve estendersi nel diametro interno del PVC in modo che non venga influenzato durante la filtrazione. |
| Foglio di rete tessuta in nylon 6, bianco opaco, larghezza 12", lunghezza 12", dimensione della maglia 50 micron, area aperta del 37% (confezione da 5) | Piccole parti tramite Amazon | B0043D1SGA | I fogli di rete sono stati tagliati in cerchi per corrispondere al diametro esterno del tubo in PVC. I bordi sono stati incollati per garantire che non si verificassero sfilacciamenti. Il diametro della colla non deve estendersi nel diametro interno del PVC in modo che non venga influenzato durante la filtrazione. |
| Membrana mista in estere di cellulosa, 0,45 um, 142 mm, 25/pz | VWR | 10034-914 | Comeultimo filtro è stato utilizzato un filtro a membrana in cellulosa mista con 0,45 um. Un grande diametro è stato utilizzato per consentire al filtro di essere piegato in un cono per aumentare la superficie del filtro e prevenire l'intasamento. |
| Cestello in rete metallica Foglie di tè Filtro per teiera 76 mm di diametro 3 pezzi | Uxcell via Amazon | a15071600ux0260 | Il cestello in rete forniva un supporto extra per il filtro a membrana per evitare strappi quando la pressione veniva applicata da una pompa a vuoto. |
| /2" PVC Inserto spinato maschio Adattatore | Casadi alimentazione | 1436-005 | È stato aggiunto un adattatore per vuoto per consentire la filtrazione sotto vuoto in caso di filtrazione lenta a causa dell'elevata concentrazione di sedimenti. |
| 1/2 pollice O.D. x 3/8 pollici I.D. x 10 piedi Tubo in vinile trasparente in PVC | HomeDepot | 702229 | Tubo utilizzato per collegare la pompa del vuoto al dispositivo di filtraggio. |
| Strumento multiparametrico YSI Professional Plus con cavo Quatro | YSI | 6050000 | Misuratore portatile utilizzato per misurare parametri aggiuntivi della qualità dell'acqua (ad es. torbidità, temperatura, conducibilità, pH e ossigeno disciolto (DO)). |
| Torbidimetro portatile 2100P | Hach | 4650000 | Misuratore portatile utilizzato per misurare la torbidità. |
| Tubi in PE rivestiti in FEP | Geotech | 87050529 | Tubing utilizzato con pompa perestaltica per la raccolta di campioni d'acqua dalle profondità desiderate. |
| Pompa peristaltica Geopump Serie II | Geotech | 91350123 | Pompa utilizzata per la raccolta di campioni d'acqua. |
| Il microscopio MeiJi Techno EMZ-8TR | Microscope.com | il microscopioEMZ8TR-PLS2 | utilizzati analizzano setacci a rete e filtri a membrana per eliminare microplastiche sospette. |
| Spettrometro Nicolet iS10 FTIR | Thermo Electron North America | 912A0607 | FTIR utilizzato per analizzare le microplastiche sospette. |
| Microscopio FTIR Nicolet iN5 | Thermo Electron North America | 912A0895 | Microscopio FTIR utilizzato per analizzare microplastiche sospette. |
| Germanio (Ge) ATR | Thermo Electron North America | 869-174400 | Geranio Accessorio ATR utilizzato insieme al microscopio Nicolet iN5 FTIR per analizzare la microplastica sospetta. |
| Supporti in alluminio EZ-Spot Micro (confezione da 5) | Thermo Electron North America | 0042-545 | Vetrini per microscopio utilizzati insieme al microscopio Nicolet iN5 FTIR per analizzare microplastiche sospette. |
| Vetrini per campioni in vetro rivestito di alluminio | Thermo Electron North America | 0042-544 | Vetrini per microscopio utilizzati insieme al microscopio Nicolet iN5 FTIR per analizzare microplastiche sospette. |