È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Una nuova tecnica chirurgica come una Fondazione per In Vivo parziale ingegneria del fegato nel ratto

8K visualizzazioni

DOI:

10.3791/57991

6 ottobre 2018

In questo articolo

Sommario

Stabiliamo una nuova tecnica chirurgica per un modello di aspersione del singolo lobo del fegato in vivo nel ratto come prerequisito per ulteriormente lo Studio in vivo fegato parziale Ingegneria in futuro.

Abstract

Ingegneria dell'organo è una nuova strategia per generare sostituti di organo del fegato che possono essere potenzialmente utilizzati nel trapianto. Recentemente, in vivo del fegato di ingegneria, compreso in vivo decellularizzazione organo seguita da ripopolamento, è emerso come un promettente approccio sopra ingegneria ex vivo del fegato. Tuttavia, la sopravvivenza postoperatoria non è stata realizzata. Lo scopo di questo studio è quello di sviluppare una nuova tecnica chirurgica di in vivo aspersione selettiva lobo del fegato in ratti come prerequisito per l'ingegneria in vivo del fegato. Generiamo un circuito di bypass solo attraverso il lobo laterale sinistro. Quindi, lobo laterale sinistra è irrorato con soluzione fisiologica eparinizzata. L'esperimento è eseguito con 4 gruppi (n = 3 ratti per gruppo) basato su tempi diversi aspersione di 20 min, 2h, 3h e 4h. sopravvivenza, come pure il cambiamento in modo macroscopico visibile di colore e istologicamente determinato assenza di cellule del sangue nella triade portale e i sinusoids, è considerato un indicatore per una struttura di modello di successo. Dopo aspersione selettiva del lobo laterale sinistro, osserviamo che il lobo laterale sinistra, infatti, trasformato da rosso a giallo debole. In una valutazione istologica, non le cellule del sangue sono visibili nel ramo della vena portale, la vena centrale e sinusoidi. Il lobo laterale sinistro diventa rosso dopo la riapertura dei vasi bloccati. 12/12 ratti è sopravvissuto la procedura per più di una settimana. Siamo i primi a segnalare un modello chirurgico per in vivo di aspersione singolo lobo del fegato con un periodo di sopravvivenza lunga di più di una settimana. In contrasto con il rapporto precedentemente pubblicato, il vantaggio più importante della tecnica presentata qui è che l'aspersione del 70% del fegato è mantenuto durante tutta la procedura. L'istituzione di questa tecnica fornisce una base per in vivo parziale ingegneria del fegato in ratti, tra cui decellularizzazione e ricellularizzazione.

Introduzione

Le indicazioni per trapianto dell'organo sono in continua espansione. Al contrario, tassi di donazione di organi e la qualità complessiva degli organi sono in declino, che conduce ad una crescente domanda per gli innesti. Il numero di candidati aggiunto alla lista d'attesa di trapianto di fegato ha continuato ad aumentare (ad es., negli Stati Uniti, 11.340 pazienti sono stati aggiunti nel 2016, confrontato con 10.636 nel 2015)1. Nonostante i notevoli sforzi, il numero di organi disponibili non soddisfa le esigenze cliniche. A causa dell'incidenza aumentata di malattia epatica, molti pazienti con stadio finale muore di malattie del fega....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

L'alloggiamento e tutte le procedure effettuate erano in conformità con la legislazione tedesca sul benessere degli animali. Tutte le garze, rivestimento vestiti e strumenti chirurgici sono sterilizzati in autoclave e preparati prima dell'operazione. Tutte le procedure vengono eseguite in condizioni sterili.

1. preparazione del ratto per la procedura chirurgica

  1. Posizionare il ratto in una camera di induzione e anestetizzare il topo con isoflurano vaporizzato il 4% e 100% ossigeno a 0,5 L/min per circa 3 minuti, fino a quando il ratto è completamente anestetizzato.
  2. Prendere il topo dalla camera di induzione e misurare il ....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

Maschio di dodici (all'età di 12 - 13 settimane) Lewis ratti sono stati usati per valutare l'effetto della perfusione selettiva lobo del fegato. L'esperimento è stato effettuato in quattro gruppi (n = 3 ratti per gruppo). Utilizzando perfusione diversi periodi di 20 minuti, 2 ore, 3 ore e 4 ore, seguendo la procedura descritta sopra, abbiamo realizzato con successo in vivo di aspersione singolo lobo.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

Bloccando e incannulamento sinistro della vena con un catetere come un fluido in entrata e la vena epatica laterale sinistra con un altro catetere come un fluido in uscita, abbiamo generato con successo un bypass in vivo fluido all'interno del lobo laterale sinistro, che indica che anche se la tecnica è altamente impegnativa a causa le piccole dimensioni dei vasi per inserimento di una canula e un elevato rischio di sanguinamento, è fattibile. Perfino i ratti sottoposti a un periodo lungo di aspersione di 4 ore .......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori vorrei ringraziare Jens Geiling dall'Istituto di anatomia I, ospedale universitario di Jena, per produrre i disegni schematici di anatomia del fegato del ratto.

....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Pompa di
Perfusor VIB. Braun,
CatetereTerumoSR+DU2419PX24G, 0,74&volte; 19mm
Versatus-W  CatetereTerumoSR+DU2225PX22G, 0,9&volte; Micro
strumento
micro forbiciF· S· Ln. 14058-09
micro serrefineF· S· LNo.18055-05
Applicatore di micro morsettiF· S· Ln. 18057-14
Micro pinza dirittaF· S· Ln. 00632-11
Micro pinza curvaF· S· LNo. 00649-11
micro porta aghiF· S· LNo. 12061-01
strumenti
sissors standardF· S·
morsetto per zanzareF· S·
pinza seghettataF· S·
pinza dentataF· S·
porta aghiF· S·
sutura
4-0 proleneethicon
4-0 ETHICON*IIethicon
6-0 silkethicon
11-0 poliammideethicon
perfusione catetere Melsungen Versatus-W chirurgico da 25 mm chirurgici generaliLLLLL

Riferimenti

  1. Kim, W. R., et al. OPTN / SRTR 2016 Annula Data Report: Liver. American Journal of Transplantation. Suppl. 1, 172-253 (2018).
  2. Palakkan, A. A., Hay, D. C., Anil Kumar, P. R., Kumary, T. V., Ross, J. A. Liver tissue engineering and cell sources: issues and chal....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Tag

Ingegneria epatica in vivoPerfusione selettiva del lobo epaticoPerfusione con soluzione salina eparinizataLobo laterale sinistroCannulazione della vena portaCannulazione della vena epaticaTecnica di bypass chirurgicoModello di sopravvivenza a lungo terminePerfusione epatica parzialePunti di accesso vascolare