Articolo metodologico

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG

DOI:

10.3791/58056

⸱

7 gennaio 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Greater Los Angeles Veteran Administration Healthcare System, 2San Diego Veterans Administration Healthcare System, 3University of California, Los Angeles, 4Perkin Elmer

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Qui usiamo bioluminescenti, raggi x ed emissione di positroni tomografia/computato tomografia imaging per studiare l'attività come inibitore di mTOR urta i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in un modello dello xenotrapianto. Questo permette analisi fisiologicamente pertinenti, non invasivo e multimodale dell'effetto anti-mieloma di terapie designando i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in vivo.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mieloma multiplo (MM) tumori attecchire nel midollo osseo (BM) e la loro sopravvivenza e la progressione dipendono da complesse interazioni molecolari e cellulari che esistono all'interno di questo microambiente. Ancora il microambiente BM non può essere facilmente replicato in vitro, che potenzialmente limita la rilevanza fisiologica di molti modelli sperimentali in vitro ed ex vivo . Questi problemi possono essere superati utilizzando un modello di xenotrapianto in cui luciferasi (LUC)-cellule trasfettate 8226 MM saranno specificamente interdigitate nello scheletro del mouse. Quando questi topi sono dato il substrato appropriato, D-luciferina, gli effetti della terapia sulla crescita del tumore e la sopravvivenza può essere analizzata misurando i cambiamenti nelle immagini bioluminescenti (BLI) prodotto dai tumori in vivo. Questi dati BLI combinato con analisi di tomografia (PET/CT) emissione positronica tomografia/calcolo utilizzando l'indicatore metabolico 2-deoxy - 2-(18F) fluoro-D-glucosio (18F-FDG) è utilizzato per monitorare i cambiamenti nel metabolismo del tumore nel tempo. Queste piattaforme imaging consentono misurazioni non invasive più all'interno del microambiente del tumore/BM.

Introduzione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MM è una malattia incurabile costituita da plasma maligno B-cellule che infiltrano il BM e causare la distruzione dell'osso, l'anemia, insufficienza renale e infezione. MM rende fino al 10% - 15% di tutte le neoplasie ematologiche1 ed è il cancro più frequente di coinvolgere lo scheletro2. Lo sviluppo del MM deriva dalla trasformazione oncogena longeve delle cellule di plasma che vengono stabilite in centri germinali dei tessuti linfoidi prima alla fine homing al BM3. Il BM è caratterizzata da nicchie altamente eterogenei; tra cui componenti cellulari diversi e critici, regioni di basso pO2

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure degli animali descritte di seguito sono state approvate dal istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC) del sistema Greater Los Angeles VA sanitario e sono state eseguite in condizioni sterili ed esenti da patogeni.

1. preparazione di cellule che esprimono Luciferase 8226 (8226-LUC)

  1. Mantenere la linea cellulare umana MM, 8226, in RPMI-1640 supplementato con 10% siero bovino fetale (FBS) e 1% di penicillina-streptomicina a 37 ° C in atmosfera umidificata contenente 95% aria e 5% di anidride carbonica (CO2).
  2. Generare cellule reporter 8226 LUC-esprimendo stabili di transfezione 1 x 10

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Negli studi pilota iniziali, iniezioni IV delle cellule 8226-LUC in topi NOD/SCID non hanno sviluppato i tumori BM-engrafted MM, anche se squamose MM tumori erano facilmente formati (100% tasso di successo). Al contrario, sfide IV con 8226 cellule nei topi NOG generato (nel raggio di 15-25 giorni) tumori nello scheletro (e soli raramente formati tumori nei tessuti muscolo-scheletrici, come il fegato o la milza). Poiché i tumori nello scheletro visivamente non potrebbero essere confermati .......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nonostante una varietà di modelli preclinici dello xenotrapianto di MM6,9,11,12,13, la capacità di studiare le interazioni tumore/BM all'interno del microambiente BM rimane difficile 14. le tecniche qui descritte consentono il rapido e riproducibile engraftment delle cellule di tumori 8226-LUC nello scheletro dei topi NOG.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'autore Kevin Francis è un dipendente della Perkin-Elmer.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo lavoro è stato supportato da una grant1I01BX001532 di merito VA dagli Stati Uniti Dipartimento di veterani affari laboratorio ricerca biomedica e sviluppo servizio (uccelli) di P.F. ed E.C. riconosce il supporto dal servizio VA clinica scienza R & S ( I01CX001388 premio di merito) e riabilitazione VA R & D Service (Merit Award I01RX002604). Ulteriore supporto è venuto da una sovvenzione di seme facoltà di UCLA a J.K. Questi contenuti non rappresentano necessariamente le opinioni di US Department of Veterans Affairs o il governo degli Stati Uniti.

....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
8226 linea cellulare di mieloma umanoATCCCCL-155
NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Topi (NOG)Jackson Labs5557
VivoGlo Luciferin substratoPromegaP1041
Hypoxyprobe-1KitHPLHP1-100
PE-CD45 (clone H130)BD Biosciences555483Utilizzato per la citometria a flusso per identificare le cellule tumorali CD45+ umane nell'essudato BM
coniglio anti-umano CD45 (clone D3F8Q)Segnalazione cellulare Tecnologia70527Anticorpo primario utilizzato per l'immunoistochimica dell'osso asportato
IgG di capra anti-coniglio (HRP coniugato)ABCAMab205718Anticorpo Seconday utilizzato per l'immunoistochimica dell'osso asportato
Sistema di analisi reporter a doppia luciferasiPromegaE1910
pGL4.5 Luciferasi Reporter vettorePromegaE1310
IVIS Lumina XRMS In Sistema di imaging VivoPerkin Elmer
Sofie G8 Sistema di imaging PET/CTPerkin Elmer
di

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Multiple Myeloma. The Lancet. 374 (9686), 324-339 (2009).
  2. Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease. BoneKEy Reports. 1, 135(2012).
  3. Anderson, K. C., Carrasco, R. D.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE

Richiedi permesso

Tag

Imaging bioluminescenteimaging PET CTmodello di xenotrapiantotrattamento con temsirolimussubstrato D luciferinasonda 18F FDGimaging di piccoli animali

Articoli correlati