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Articolo metodologico

Utilizzando 22 3 dell'anticorpo Anti-PD-L1 concentrarsi sulla biopsia e campioni di citologia dai malati di cancro del polmone Non a piccole cellule

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DOI:

10.3791/58082

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25 settembre 2018

In questo articolo

Sommario

Per espandere la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l'ammissibilità dei pazienti con cancro del polmone per il trattamento con pembrolizumab, in modo affidabile e riproducibile, abbiamo sviluppato un test che utilizza il 22 3 anticorpo concentrato su un ampiamente disponibile immunohistochemical autostainer, per gli esemplari di biopsia e la citologia.

Abstract

Pembrolizumab in monoterapia è stato approvato per il trattamento di prima e seconda linea di pazienti con PD-L1-esprimendo avanzata di carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC). Test per PD-L1 espressione con l'analisi diagnostica di PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22 3 compagno, che dà una percentuale di tumore Punteggio ottenuto (TPS), è stato convalidato il tessuto del tumore. Abbiamo sviluppato un test ottimizzato laboratorio-sviluppato (LDT) che utilizza il concentrato 22 3 anticorpo (Ab) su un autostainer IHC ampiamente disponibile per gli esemplari di biopsia e citologia. Il TPS PD-L1 è stato valutato con 120 sezioni di accoppiati insieme-tumore del tessuto e i campioni di biopsia e con 70 accoppiato i campioni di biopsia e citologia (lavaggi bronchiali, n = 40; le effusioni pleuriche, n = 30). Il 22 3 Ab che concentrato a base di LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e citologia (~ 95%) esemplari quando confrontata con IHC PD-L1 espressione valutata mediante il saggio di 22 3 compagno IHC PD-L1 a entrambi TPS taglio punti (≥ 1%, ≥ 50%). LDT ottimizzato presentato qui, usando il concentrato di Ab 22 3 per determinare l'espressione di PD-L1 in entrambi il tessuto del tumore e in campioni citologici, si espanderà la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l'ammissibilità dei pazienti con NSCLC trattati con pembrolizumab in monoterapia in modo affidabile e riproducibile.

Introduzione

Recenti studi clinici hanno dimostrato l'efficacia di pembrolizumab, un anticorpo di isotipo monoclonale umanizzato di kappa IgG4 che blocca l'interazione tra la morte programmata delle cellule 1 (PD-1) ed i suoi ligandi, PD-L1 e L2-PD, nel trattamento di pazienti con avanzato NSCLC1,2,3,4.

Attualmente, pembrolizumab è approvato per il trattamento di NSCLC PD-L1-esprimendo in entrambi i pazienti naïve al trattamento con un'espressione di PD-L1 TPS di ≥ 50% e nessun recettore del fattore di crescita epidermico (EGF....

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Protocollo

Tutte le procedure sono state approvate dal comitato etico locale (Comitato di etica umana ricerca, Centre Hospitalier Universitaire de Nizza/Tumorothèque BB-0033-00025).

Nota: Questo protocollo è specificamente regolato per l'uso di 22 3 anticorpo concentrato su un commercialmente disponibile stainer IHC automatizzato (denominato per come autostainer qui, vedere la Tabella materiali) per le biopsie del tumore e campioni di citologia.

1. preparazione dei campioni di tessuto tumorale

  1. Difficoltà tessuto tumorale in formalina 10% neutra tamponata (NBF), in una cassetta.
    Nota: Il tessuto....

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Risultati

Utilizzando la procedura presentata qui e come descritto in dettaglio in recenti pubblicazioni10,11 di questo gruppo, LDT ottimizzato è stato clinicamente validato con 120 campioni di biopsia FFPE NSCLC archivistici da pazienti sottoposti a chirurgia resezione o una biopsia presso l'ospedale universitario di Pasteur, Nizza, tra marzo 2007 e marzo 2016. Inoltre, per la valutazione dell'espressione di PD-L1 dei campioni di citologia.......

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Discussione

Abbiamo convalidato un LDT ottimizzata utilizzando il concentrato di anticorpo del PD-L1 22 3, attraverso il confronto con il corrispondente test commerciale clinicamente validato10,11. 3 22 concentrato anticorpo-basato LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e campioni di citologia (~ 95%) quando confrontata con l'espressione di PD-L1 IHC valutata mediante il saggio di PD-L1 IHC 3 22 a ≥ 1% TPS sia il ≥ 50% TPS taglio punti. Come recent.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sponsorizzato da Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, Stati Uniti d'America. I finanziatori non ha svolto ruolo nel disegno di studio, raccolta dati e analisi, decisione di pubblicare o preparazione del manoscritto.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
NovaPrep HQ1NovacytNASoluzione conservante per campioni citologici
Novaprep® HQ+ BNovacytNASoluzione mucolitica
Tissue-Tek VIP 6Sakura6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 Sistema di console per l'inclusione dei tessutiSakura5229 TEC 5
vetrino per microscopio SuperFrost PlusThermo Fisher Scientific4951PLUS4
DL-Ditiotreitolo in polvereSigma-AldrichD3801
Heidolph Multi Reax VortexShaker Thermo Fisher Scientific13-889-410
Shandon CytoblockThermo Fisher Scientific7401150
22C3 anti-PD-L1 concentrato anticorpoAgilent Dako#M365329
PD-L1 IHC 22C3 pharmDxAgilent DakoSK006
Autostainer Link 48Agilent DakoAS480
Autocoloratore BenchMark ULTRAVentana#750-600
OptiView HQ Linker universaleVentana#760-700
Multimero OptiView HRPVentana#760-700
Amplificazione OptiView H2O2Ventana#760-099
OptiView AmplificatoreVentana#760-099
OptiView Multimero di amplificazioneVentana#760-100
OptiView DABVentana#760-700
OptiView CopperVentana#760-700
Ematossilina IIVentana#790-2208
Reagente BluingVentana#760-2037
Condizionamento cellulare 1 (CC1)Ventana#950-124
Tissue-Tek CoprioggettoSakura4742

Riferimenti

  1. Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
  2. Herbst, R. S., et al.

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Ristampe e permessi

Tag

Immunoistochimica per PD-L1concentrato di anticorpo 22C3Tumor Proportion Scorecampioni citologici biopticiprotocollo per autostainer IHCprocessazione di campioni citologiciinclusione di tessuto tumoraleanalisi dell'espressione di PD-L1selezione dei pazienti per l'immunoterapia