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Articolo metodologico

Utilizzando 22 3 dell'anticorpo Anti-PD-L1 concentrarsi sulla biopsia e campioni di citologia dai malati di cancro del polmone Non a piccole cellule

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DOI:

10.3791/58082

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25 settembre 2018

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In questo articolo

Sommario

Per espandere la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l'ammissibilità dei pazienti con cancro del polmone per il trattamento con pembrolizumab, in modo affidabile e riproducibile, abbiamo sviluppato un test che utilizza il 22 3 anticorpo concentrato su un ampiamente disponibile immunohistochemical autostainer, per gli esemplari di biopsia e la citologia.

Abstract

Pembrolizumab in monoterapia è stato approvato per il trattamento di prima e seconda linea di pazienti con PD-L1-esprimendo avanzata di carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC). Test per PD-L1 espressione con l'analisi diagnostica di PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22 3 compagno, che dà una percentuale di tumore Punteggio ottenuto (TPS), è stato convalidato il tessuto del tumore. Abbiamo sviluppato un test ottimizzato laboratorio-sviluppato (LDT) che utilizza il concentrato 22 3 anticorpo (Ab) su un autostainer IHC ampiamente disponibile per gli esemplari di biopsia e citologia. Il TPS PD-L1 è stato valutato con 120 sezioni di accoppiati insieme-tumore del tessuto e i campioni di biopsia e con 70 accoppiato i campioni di biopsia e citologia (lavaggi bronchiali, n = 40; le effusioni pleuriche, n = 30). Il 22 3 Ab che concentrato a base di LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e citologia (~ 95%) esemplari quando confrontata con IHC PD-L1 espressione valutata mediante il saggio di 22 3 compagno IHC PD-L1 a entrambi TPS taglio punti (≥ 1%, ≥ 50%). LDT ottimizzato presentato qui, usando il concentrato di Ab 22 3 per determinare l'espressione di PD-L1 in entrambi il tessuto del tumore e in campioni citologici, si espanderà la capacità dei laboratori in tutto il mondo per valutare l'ammissibilità dei pazienti con NSCLC trattati con pembrolizumab in monoterapia in modo affidabile e riproducibile.

Introduzione

Recenti studi clinici hanno dimostrato l'efficacia di pembrolizumab, un anticorpo di isotipo monoclonale umanizzato di kappa IgG4 che blocca l'interazione tra la morte programmata delle cellule 1 (PD-1) ed i suoi ligandi, PD-L1 e L2-PD, nel trattamento di pazienti con avanzato NSCLC1,2,3,4.

Attualmente, pembrolizumab è approvato per il trattamento di NSCLC PD-L1-esprimendo in entrambi i pazienti naïve al trattamento con un'espressione di PD-L1 TPS di ≥ 50% e nessun recettore del fattore di crescita epidermico (EGF....

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Protocollo

Tutte le procedure sono state approvate dal comitato etico locale (Comitato di etica umana ricerca, Centre Hospitalier Universitaire de Nizza/Tumorothèque BB-0033-00025).

Nota: Questo protocollo è specificamente regolato per l'uso di 22 3 anticorpo concentrato su un commercialmente disponibile stainer IHC automatizzato (denominato per come autostainer qui, vedere la Tabella materiali) per le biopsie del tumore e campioni di citologia.

1. preparazione dei campioni di tessuto tumorale

  1. Difficoltà tessuto tumorale in formalina 10% neutra tamponata (NBF), in una cassetta.
    Nota: Il tessuto....

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Risultati

Utilizzando la procedura presentata qui e come descritto in dettaglio in recenti pubblicazioni10,11 di questo gruppo, LDT ottimizzato è stato clinicamente validato con 120 campioni di biopsia FFPE NSCLC archivistici da pazienti sottoposti a chirurgia resezione o una biopsia presso l'ospedale universitario di Pasteur, Nizza, tra marzo 2007 e marzo 2016. Inoltre, per la valutazione dell'espressione di PD-L1 dei campioni di citologia.......

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Discussione

Abbiamo convalidato un LDT ottimizzata utilizzando il concentrato di anticorpo del PD-L1 22 3, attraverso il confronto con il corrispondente test commerciale clinicamente validato10,11. 3 22 concentrato anticorpo-basato LDT ha mostrato un alto tasso di concordanza tra biopsia (~ 100%) e campioni di citologia (~ 95%) quando confrontata con l'espressione di PD-L1 IHC valutata mediante il saggio di PD-L1 IHC 3 22 a ≥ 1% TPS sia il ≥ 50% TPS taglio punti. Come recent.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sponsorizzato da Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, Stati Uniti d'America. I finanziatori non ha svolto ruolo nel disegno di studio, raccolta dati e analisi, decisione di pubblicare o preparazione del manoscritto.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
NovaPrep HQ1NovacytNASoluzione conservante per campioni citologici
Novaprep® HQ+ BNovacytNASoluzione mucolitica
Tissue-Tek VIP 6Sakura6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 Sistema di console per l'inclusione dei tessutiSakura5229 TEC 5
vetrino per microscopio SuperFrost PlusThermo Fisher Scientific4951PLUS4
DL-Ditiotreitolo in polvereSigma-AldrichD3801
Heidolph Multi Reax VortexShaker Thermo Fisher Scientific13-889-410
Shandon CytoblockThermo Fisher Scientific7401150
22C3 anti-PD-L1 concentrato anticorpoAgilent Dako#M365329
PD-L1 IHC 22C3 pharmDxAgilent DakoSK006
Autostainer Link 48Agilent DakoAS480
Autocoloratore BenchMark ULTRAVentana#750-600
OptiView HQ Linker universaleVentana#760-700
Multimero OptiView HRPVentana#760-700
Amplificazione OptiView H2O2Ventana#760-099
OptiView AmplificatoreVentana#760-099
OptiView Multimero di amplificazioneVentana#760-100
OptiView DABVentana#760-700
OptiView CopperVentana#760-700
Ematossilina IIVentana#790-2208
Reagente BluingVentana#760-2037
Condizionamento cellulare 1 (CC1)Ventana#950-124
Tissue-Tek CoprioggettoSakura4742

Riferimenti

  1. Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
  2. Herbst, R. S., et al.

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Ristampe e permessi

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