Un modello di topo In Vivo di attivazione delle cellule T Naïve CD4 di misura, la proliferazione e la differenziazione Th1 indotta dalle cellule dendritiche derivate da midollo osseo

Raquel Toribio-Fernandez; Virginia Zorita; Beatriz Herrero-Fernandez; Jose M. Gonzalez-Granado

doi:10.3791/58118

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Articolo metodologico

Un modello di topo In Vivo di attivazione delle cellule T Naïve CD4 di misura, la proliferazione e la differenziazione Th1 indotta dalle cellule dendritiche derivate da midollo osseo

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DOI:

10.3791/58118

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22 agosto 2018

Raquel Toribio-Fernandez¹ , Virginia Zorita¹ , Beatriz Herrero-Fernandez² , Jose M. Gonzalez-Granado¹^,²^,³

¹LamImSys Lab, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC), ²LamImSys Lab, Instituto de Investigación Sanitaria Hospital 12 de Octubre (imas12), ³CIBER de Enfermedades Cardiovasculares

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per la determinazione in vivo dell'ingenuo T CD4 delle cellule (cellule T) attivazione, proliferazione e differenziazione Th1, indotta da GM-CSF midollo osseo (BM)-derivato le cellule dendritiche (DCs). Inoltre, questo protocollo descrive isolamento BM e T-cell, generazione di DC e DC e T-cell trasferimento adottivo.

Abstract

Quantificazione dell'attivazione di cellule T CD4 Naive, la proliferazione e la differenziazione di T helper 1 (Th1) cellule è un modo utile per valutare il ruolo svolto dalle cellule di T in una risposta immunitaria. Questo protocollo descrive la differenziazione in vitro di progenitori del midollo osseo (BM) per ottenere granulocita macrofago distimolazione factor (GM-CSF) derivato-cellule dendritiche (DCs). Il protocollo descrive anche il trasferimento adottivo del peptide di ovoalbumina (OVAp)-caricato di GM-CSF-derivati DCs e cellule T CD4 Naive da topi transgenici Paolo al fine di analizzare l'attivazione in vivo , la proliferazione e la differenziazione Th1 della trasferite le cellule T CD4. Questo protocollo elude la limitazione di puramente in vivo metodi imposti dalla incapacità di specificamente manipolare o selezionare la popolazione delle cellule studiate. Inoltre, questo protocollo permette studi in un ambiente in vivo , evitando così alterazioni di fattori funzionali che possono verificarsi in vitro e compreso l'influenza di tipi cellulari e di altri fattori trovati solo negli organi intatti. Il protocollo è uno strumento utile per la generazione di cambiamenti nel sistema DCs e cellule di T che modificare le risposte immunitarie, potenzialmente fornire risultati importanti per capire l'origine o lo sviluppo di numerose patologie immuni.

Introduzione

Le cellule T CD4 + e cellule (APCs) come DCs presentanti l'antigene sono necessari mediatori di immunità agli agenti patogeni microbici¹^,². Negli organi linfoidi periferici, le cellule T CD4 sono attivate al momento della rilevazione di antigeni specifici presentati da APC³^,⁴^,⁵. Linfociti T CD4 attivati proliferano e si differenziano in cellule effettrici specifiche distinte del Th che sono necessari per lo sviluppo di una corretta risposta immunitaria adattativa⁶^,^7....