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Articolo metodologico

Sintesi e caratterizzazione di 1,2-Dithiolane per volta peptidi autoassemblanti

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DOI:

10.3791/58135

⸱

20 agosto 2018

 ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, Fairfield University

In questo articolo

Sommario

Un protocollo per la sintesi di un 1,2-dithiolane modificato peptide e la caratterizzazione delle strutture supramolecolari derivanti dal peptide self-assembly.

Abstract

Questo rapporto si concentra sulla sintesi di un N-terminale 1,2-dithiolane modificate autoassemblanti peptide e la caratterizzazione del risultante self-assembled strutture supramolecolari. Il percorso sintetico si avvale della sintesi del peptide di fase solida con l'accoppiamento su resina della molecola del precursore dithiolane, 3-(acetylthio) -2-acido propanoico (acetylthiomethyl) e il Tio acetato assistita da microonde deprotection del peptide N-terminale prima scissione finale dalla resina di cedere l'1,2-dithiolane per volta peptide. Dopo la purificazione di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) del peptide 1,2-dithiolane, derivato dal nucleo nucleanti del peptide Aβ associato a malattia di Alzheimer, il peptide è indicato per assemblarsi in fibre amiloidi Croce-β. Protocolli per caratterizzare le fibre amiloidi-trasformata di Fourier spettroscopia infrarossa (FT-IR), spettroscopia di dicroismo circolare (CD) e microscopia elettronica a trasmissione (TEM) sono presentati. I metodi di modificazione del N-terminale con una molecola di 1,2-dithiolane a peptidi autoassemblanti ben caratterizzati ora possono essere esplorati come sistemi modello per sviluppare strategie di modificazione post-montaggio e dinamica chimica covalente e dintorni superfici di nanofibra peptide supramolecolari.

Introduzione

Il legame peptidico robusto formando chimica coinvolta nella sintesi del peptide di fase solida e la capacità di controllare la composizione e la lunghezza della sequenza rendono i peptidi che auto-assemblarsi in strutture supramolecolari un campo fortemente ricercato. I fattori che controllano e stabilizzano strutture auto-assemblate del peptide, tra cui la catena laterale sterico e interazioni elettrostatiche, legame idrogeno e idrofobo effetti1, servono come un insieme di regole di progettazione. Come la ricerca in queste regole fondamentali di progettazione continua a progredire, il logico passo successivo nel peptide coinvolge auto-assemblaggio sta espandendo la diversità delle funzioni e strutture basate su peptidi. Durante l'auto-assemblaggio di peptidi sono un biomateriale versatile che sono stati utilizzati per molte applicazioni biomediche sintonizzando il peptide sequenza o assieme condizioni2,3,4, lo sviluppo di strategie per modifiche post-montaggio al peptide nanofibre5,6,7,8,9 rimane un'area relativamente inesplorata.

Chimica di cambio e del tiolo bisolfuro dinamico alla superficie delle strutture supramolecolari è un'area che ha il potenziale per produrre biomateriali nuovi e funzionale. L'incorporazione di 1,2-dithiolane moiety (comunemente un derivato di acido lipoico (la) o acido asparagusic (aa)) sono stati segnalati in liposomi sistemi10,11, blocco copolimeri12,13e come organizzazione di ancoraggi alle superfici14,15. Qui, segnaliamo la sintesi e la caratterizzazione di un peptide autoassemblanti derivato dal nucleo nucleanti del peptide Aβ associato con la malattia di Alzheimer che è stata modificata al N-terminale con un gruppo funzionale di 1,2-dithiolane16, 17. Le fibre risultanti supramolecolari ora servono come piattaforma sperimentale per lo studio della reattività di bisolfuro-cambio e tiolo alla superficie supramolecolare di fibre amiloidi18.

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Protocollo

1. sintesi e purificazione di 1,2-Dithiolane modificati Peptide

  1. Sintesi di dithiolane precursore, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) acido propanoico19.
    1. Aggiungere 1 g di 3-bromo - 2-(bromomethyl) acido propionico (1 equiv.) dissolto in quantità minima di 1 M NaOH (circa 4 mL) in un pallone di reazione di 25 mL fondo tondo con agitazione a 55 ° C. Sigillare il pallone di reazione con un setti e posto sotto atmosfera di azoto.
    2. Preparare una soluzione contenente 1,49 g di Tio acetato di potassio (3.2 equiv.) in 4 mL di acqua deionizzata e 3 mL di acido solforico 2M (H2SO4) creare thioacetic acid in situ.
    3. Tirare la soluzione di acido thioacetic in una siringa di plastica monouso da 10 mL e inserire un ago sulla siringa. Aggiungere goccia a goccia la miscela per il pallone di reazione forando attraverso i setti con l'ago. Continuare la reazione durante la notte a 55 ° C.
    4. Monitorare la reazione di cromatografia su strato sottile (TLC) su gel di silice 60 F254 piastre utilizzando una miscela di metanolo e diclorometano (1:9). Visualizzare lo stato di avanzamento di reazione dalla macchia di verde di bromocresolo. Il prodotto ha un Rf = 0,57.
    5. Dopo la reazione è completa e raffreddati a temperatura ambiente, acidificare la miscela a pH 1 con 2 M H2così4. Un olio giallo separa dalla soluzione.
    6. Estrarre il prodotto con cloroformio freddo (40 mL x 3). Unire i livelli organici e asciugare su solfato di magnesio. Rimuovere il cloroformio sotto pressione ridotta.
    7. Confermare l'identità del prodotto isolato, 1, dalla spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR), come mostrato nelle figure 1B e C. Aspettiamo i seguenti risultati: 1H NMR, CDCl3, 300 MHz: d = 10.1 (b, 1 H), 3.2 (m, H 4), 2,9 (m, H 1) 2.4 (s, 6 H); 13 C NMR, CDCl3, 75 MHz: d = 195,1 (OS-3Cdi CH), 177,6 (-COOH), 45,1 (-CH2S-), 30.5 (CH), 29.2 (-SCOCH3).
      Nota: Il prodotto è un olio giallo e presenta un rendimento complessivo di 83%. Utilizzare il prodotto senza ulteriore purificazione.
  2. SPPS e accoppiamento su resina di Dithiolane precursore
    Nota: La sintesi peptidica in fase solida descritta di seguito è stato condotto su un sintetizzatore di peptidi automatizzato, seguendo protocolli del produttore consigliato. Impostazioni e i reagenti possono essere adattati per altri strumenti commerciali o quando si utilizza aminoacidi specializzati.
    1. Pesare 0,156 g di resina di Rink ammide 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) (0,1 mmol) e posto in un recipiente di reazione. Gonfiare la resina in dimetilformammide (DMF) per almeno 15 minuti prima dell'inizio della sintesi.
    2. Pesare fuori 4 equivalenti di ogni fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) protetto dell'amminoacido (0,4 mmol) nella sequenza e 0,152 g di N, N, N', N'- tetrametil-O-(1H- benotriazol-1-yl) uranio esafluorofosfato (0,4 mmol, HBTU) per ogni amminoacido nella sequenza. Ogni cartuccia contiene HBTU sia il Fmoc-protetto dell'amminoacido.
    3. Dopo aver eseguito tutte le pre-sintesi controlla sul sintetizzatore (riempire i reagenti, svuotate le linee dei reagenti e pressurizzato tutti i flaconi di reagente), posizionare le cartucce dell'aminoacido in giostra in C' a N' direzione capolinea. Inserire una cartuccia vuota dopo la posizione finale dell'aminoacido per la fase finale di deprotezione Fmoc N-terminale.
    4. Sintetizzare il peptide utilizzando le impostazioni consigliate standard.
      1. DEPROTECT gruppo Fmoc dalla resina con 5 mL di 20% piperidina in DMF (5 min x 2).
      2. Lavare la resina con DMF (6 x 5 mL) prima della fase di accoppiamento.
      3. Per un passaggio di singolo accoppiamento, aggiungere 4 mL di 0,4 M N-metilmorpholin-in DMF al Fmoc-protetto dell'aminoacido e HBTU. Attivare la soluzione di Fmoc-protetto dell'amminoacido per 30 s prima di trasferire la soluzione per il recipiente di reazione.
        Nota: Il sintetizzatore di peptidi automatizzato mescola la resina e la soluzione di bubbling N2 gas ogni 30 s per 20 minuti mentre la reazione di accoppiamento si svolge. Per sintesi peptidica manuale, posizionare il recipiente di reazione su agitatore orbitale a bassa velocità per tutta la durata del passaggio del giunto.
      4. Scolare la soluzione e lavare la resina con DMF (3 x 5 mL).
      5. Ripetere i passaggi da 1.2.4.1 attraverso 1.2.4.4 per ogni amminoacido Fmoc-protetto in C' a N'-direzione capolinea di sintetizzare il peptide di interesse.
    5. Dopo il passaggio finale per la deprotezione N-terminale, è possibile trasferire la resina in una siringa monouso sinterizzata. Lavare la resina con DMF (3 x 5 mL) e diclorometano (DCM, 3 x 5 mL).
      Nota: La resina può essere conservata dopo DCM di lavaggio in un essiccatore sotto vuoto. Se la resina è stata memorizzata precedente accoppiamento, assicurati di gonfiare la resina in DMF prima la reazione di accoppiamento.
    6. Coppia il precursore dithiolane (1) a N-terminale del peptide su resina aggiungendo 4 equivalenti di 1, 5 mL di DMF, 4 equivalenti di HBTU e 10 equivalenti di N, N-diisopropylethylamine (DIPEA). Pre-attivare la miscela di accoppiamento per 10 min prima di aggiungere la resina contenente la siringa sinterizzato.
    7. Agitare la reazione di accoppiamento per 2 h. Dopo 2 h, lavare la resina con DMF (3 x 5 mL) e ripetere la reazione di accoppiamento con l'agitazione durante la notte.
    8. Dopo il secondo accoppiamento, lavare la resina con DMF (3 x 5 mL) e DCM (3 x 5 mL).
      Nota: La resina può essere conservata a questo punto sotto vuoto fino fenditura.
  3. Tio acetato deprotezione e fenditura del Peptide dalla resina
    1. Per deprotect il gruppo Tio acetato dal precursore dithiolane N-terminale, trasferire la resina essiccata in una provetta di reazione microonde 10 mL e aggiungere 2 mL di DMF. Lasciare che la resina si gonfiano, aggiungere una piccola ancoretta magnetica alla nave e risospendere con una bassa velocità di agitazione magnetica per 15 min.
    2. Aggiungere 2 mL di concentrato idrossido di ammonio, il recipiente di reazione con i setti del silicone di cap e posizionare il recipiente di reazione in un reattore a microonde utilizzando le impostazioni di forno a microonde di 75 ° C per 45 minuti con agitazione.
    3. Dopo la reazione di forno a microonde è completa, è possibile trasferire la resina in una siringa monouso pulito sinterizzata. Lavare con DMF (2 x 5 mL) e metanolo (MeOH, 2 x 5 mL).
    4. Aggiungere una soluzione concentrata di idrossido di ammonio in metanolo (1:4), per un volume totale di 5 mL. Lasciare a scuotere una notte per aumentare l'ossidazione intramolecolare del legame bisolfurico dithiolane ring.
    5. Lavare la resina con MeOH (2 x 5 mL) e DCM (3 x 5 mL).
      Nota: La resina essiccata può essere memorizzata in un essiccatore sotto vuoto a questo punto.
    6. Aggiungere il cocktail di clivaggio della resina contenente la siringa con agitando delicatamente per 1,5 h. Il clivaggio cocktail utilizzato è 95% acido trifluoroacetico (TFA), 2,5% triisopropylsilane (suggerimenti) e 2,5% acqua ad un volume totale di 5 mL.
      Attenzione: Lavorare sotto cappa chimica. TFA è volatile e corrosivi.
      Nota: Per la maggior parte delle sequenze peptidiche e dell'aminoacido sidechain protezione dei gruppi, la suddetta soluzione cocktail di clivaggio è sufficiente; Tuttavia, cocktail di clivaggio alternativo può essere necessaria per alcuni catena laterale dell'amminoacido proteggere gruppi (in particolare peptidi contenenti Cys, Met, Trp e Arg) o altra resina chimica20.
    7. Precipitare il peptide grezzo in 25 mL di etere etilico freddo in una provetta conica da 50 mL di aggiunta goccia a goccia dalla siringa sinterizzata. Il peptide precipita come solido bianco. Pellet il peptide mediante centrifugazione a 1300 x g per 10 min. decantare con attenzione l'etere etilico in un contenitore separato per la raccolta dei rifiuti.
    8. Aggiungere un altro 25 mL di etere etilico a tubo conico e risospendere il precipitato nel Vortex. Ripetere la centrifugazione a 1300 x g per 10 min e decantare l'etere etilico nuovamente. Asciugare il pellet sotto vuoto.
  4. Purificazione di 1,2-Dithiolane per volta Peptide
    Nota: Purificare il peptide grezzo da HPLC in fase inversa. Raccogliere e combinare le cime del peptide e confermare la massa mediante spettrometria di massa MALDI-TOF.
    1. Dissolva la pallina del peptide grezzo in quantità minima di acetonitrile con 0,1% TFA. A causa di idrofobicità di peptide e la propensione di aggregazione, delicatamente riscaldare il campione a 40 ° C per facilitare la solubilità.
      Nota: Evitare di più alte temperature e sonicazione del peptide per prevenire potenziali bisolfuro cambio reazioni21,22,23.
    2. Per preparare 1 mL del peptide grezzo per purificazione HPLC, aggiungere 400 μL di brodo concentrato del peptide in acetonitrile a 600 µ l di H2O con 0,1% TFA e filtro attraverso un filtro per siringa 22 μm in un flacone HPLC. Un ulteriore 5% isopropanolo possa essere aggiunti per evitare la precipitazione e l'aggregazione del peptide.
    3. Purificare il peptide utilizzando C-18 semi-preparatorio colonna con una portata di 3 mL/min su una sfumatura lineare di 15-55% acetonitrile in 20 min. Set i rivelatori UV a 222 nm (spina dorsale ammide) e 330 nm (legame disolfuro). Raccogliere e combinare i picchi di interesse (Figura 2A).
    4. Confermare la massa di prodotto del peptide di spettrometro di massa MALDI-TOF in modalità reflectron (Figura 2B). Per l'analisi, mescolare 0,5 μL di picco raccolto sulla piastra MALDI con 0,5 μL della matrice di acido (DHB) 2,5-dihydroxybenzoic (10 mg/mL DHB in 50% acetonitrile, 0,1% TFA).
      Nota: Comune addotti in MALDI-TOF spettrometria di massa includono il sodio e sale di potassio del complesso ([M + Na]+ e [M + K]+) picchi. Il campione prima dell'analisi di desalificazione è consigliata se le cime di sale addotto sopprimono il segnale del picco principale [M + H]+ . Inoltre, un picco ossidato di [M + O]+ è anche rilevato nel peptide 1,2-dithiolane per volta. Un rapporto sull'ossidazione di laser indotta dall'ionizzazione MALDI utilizzando matrice DHB suggerisce che fattori quali la concentrazione del campione, solvente e intensità del laser possono essere modificati per limitare il MALDI indotta da ossidazione artefatto24.
    5. Dopo la conferma della corretta messa di MALDI-TOF, lyophilize il peptide dopo il congelamento flash. Mantenere la polvere liofilizzata peptide sotto vuoto fino all'assemblaggio.

2. caratterizzazione di supramolecolari auto-assemblaggio di strutture

  1. Formazione di fibre amiloidi
    1. Per preparare l'auto-assemblaggio soluzione, pesare 1 mg di polvere di peptide utilizzando una bilancia analitica. Sciogliere in una miscela (pH 7,5) di 20% acetonitrile e 10 mM (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic, acido (HEPES) in una provetta da microcentrifuga da 1,5 mL, ad una concentrazione finale di miscela di assemblaggio del peptide 1 mg/mL. Vortex la soluzione di montaggio e congedo per assemblare a temperatura ambiente.
  2. Caratterizzazione spettroscopica delle fibre amiloidi
    1. Seguire il processo di assemblaggio del peptide tramite spettroscopia di trasformata di Fourier infrarossa (FTIR) ogni pochi giorni. Un vasto picco centrato intorno 1670 cm-1 è la firma di IR derivanti da peptidi smontati in esempio17. Gli esempi di montaggio del peptide di solito prendono una o due settimane per il vasto picco smontato a scomparire e raggiunge la maturazione.
      1. Secco un'aliquota dell'8-10 μL della soluzione di montaggio come una sottile pellicola sul cristallo diamante ATR. Monitorare la scomparsa di un picco di acqua grande e ampio da 1640 a 1630 cm-1 come le forme di film secco.
      2. Acquisire spettri IR da 1500-1800 cm-1 in media 50 scansioni con una risoluzione di 2 cm-1 . Acquisire e sottrarre le scansioni in background prima di ogni scansione del campione. La firma di IR per l'assemblaggio di β-foglio è un picco acuto tra il 1625 e 1635 cm-1 (Figura 3A)25,26.
    2. Caratterizzare l'assembly del peptide in β-foglio ricche strutture supramolecolari mediante dicroismo circolare (CD). Registrare gli spettri utilizzando un spectropolarimeter CD con un sistema di controllo temperatura Peltier.
      1. Aggiungere 30 μL della soluzione di montaggio in un microcuvette di lunghezza di percorso 0,1 mm.
        Nota: Un supporto delle cellule è necessaria per il bloccaggio e posizionare la cella di lunghezza di percorso breve nello strumento.
      2. Per ogni spettro, impostare lo strumento CD ai seguenti parametri: scansione lunghezze d'onda di 300 nm a 180 nm, frequenza di scansione di 100/min, larghezza di banda di 1 nm, 25 ° C, media di tre scansioni.
      3. Raccogliere uno spettro del buffer (20% acetonitrile/10 mM HEPES, pH 7.5) e sottrarre da ogni scansione del campione come un controllo. La firma di CD per β-fogli è che un ellitticità minimo centrato circa 220 nm (Figura 3B)27.
  3. Microscopia di fibre amiloidi
    1. Consentire due o tre settimane per i campioni del peptide di maturare in β-foglio ricche strutture supramolecolari.
      Nota: Gli assembly possono essere imaged mediante microscopia elettronica a trasmissione (TEM) nelle fasi precedenti del processo di assemblaggio.
      1. Pipettare 10 μL della soluzione di montaggio peptide sulla superficie della griglia del carbone TEM.
        Nota: fare attenzione per non toccare la punta della pipetta di superficie della griglia. Alta precisione, a chiusura automatica pinzette vengono utilizzate per contenere la griglia TEM durante la preparazione.
      2. Attendere 1-2 min per consentire gli assembly di adsorbire sulla superficie della griglia. Rimuovere l'eccesso esempio toccando la carta da filtro al bordo della griglia.
      3. Preparare una colorazione di acetato di uranile 2% aggiungendo 100 μL di acqua deionizzata per soluzione di acetato di uranile 4% commercialmente disponibili. Aggiungere 10 μL della macchia di acetato di uranile 2% sulla superficie della griglia e incubare per 2-3 min. Dopo l'incubazione, rimuovere l'eccesso macchia toccando la carta da filtro al bordo della griglia.
      4. Posizionare le griglie TEM in un essiccatore sotto vuoto durante la notte. Conservare sotto vuoto fino a formazione immagine.
      5. Immagine i campioni preparati con TEM (Figura 3). Parametri tipici per microscopia sono come segue: immagini a ingrandimenti che vanno da 9.300 X-23, 000 X, filamento di tungsteno con una tensione di accelerazione di 120 kV.
        Nota: ImageJ può essere utilizzato per misurare la larghezza media della fibra delle strutture supramolecolari di acquisite TEM immagini28.
        Attenzione: Si prega di consultare tutte le schede di dati di sicurezza (SDS) prima dell'uso. Parecchi prodotti chimici utilizzati nella sintesi, purificazione e caratterizzazione di peptidi autoassemblanti descritto 1,2-dithiolane per volta sono corrosivi o tossici e deve essere utilizzato solo sotto una cappa chimica. Sempre utilizzare appropriati dispositivi di protezione individuale (tra cui occhiali protettivi, camice da laboratorio, lunghezza pantaloni, Scarpe chiuse) quando si lavora in laboratorio.

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Risultati

A parte la sintesi di uno stadio iniziale della molecola precursore dithiolane, il resto della sintesi del peptide di 1,2-dithiolane per volta si verifica su supporto solido (Figura 1A). La conversione di 3-bromo - 2-(bromomethyl) propionico acido 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) propionico acido, il precursore di dithiolane, è confermata da 1H e 13C NMR (Figura 1B e C) prima di esso è a...

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Discussione

Questo articolo discute i dettagli sia la sintesi e la purificazione di un peptide di autoassemblanti 1,2-dithiolane per volta N-terminale e la caratterizzazione delle strutture supramolecolari risultante. La sintesi del peptide 1,2-dithiolane segnalato qui presenta i vantaggi, tra cui una sintesi di uno stadio per produrre il precursore dithiolane, 3-(acetylthio) -2-acido propanoico (acetylthiomethyl) e la resina il forno a microonde deprotezione reazione dei Tio acetato precursore protezione gruppo per produrre la fraz...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori piacerebbe ringraziare il Dr. B. Ellen Scanley per la sua formazione tecnica e aiuto utilizzando il TEM al Connecticut State Colleges e Università (CSCU) centro per le nanotecnologie e Dr. Ishita Mukerji alla Wesleyan University per l'accesso al suo CD spettrofotometro. Il lavoro segnalato è stata in parte sostenuto dall'Istituto scienza alla Fairfield University, la NASA Connecticut Space Grant Consortium e dalla National Science Foundation sotto Grant numero-1624774.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Resina MBHA di ammide della pista, alto caricoGyros Protein TechnologiesRAM-5-HL Evitare ilcontatto con la pelle e gli occhi; non inalare
N,N-DimetilformammideFisher ScientificD119-4Liquido e vapore infiammabili; irritante per gli occhi e la pelle; Utilizzare dispositivi di protezione individuale; tenere lontano da fiamme libere
Fmoc-L-Val-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-VIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
Fmoc-L-Leu-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-LIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
Fmoc-L-Lys(Boc)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-KBCIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
Fmoc-L-Phe-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-FIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
Fmoc-L-Ala-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-AIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
Fmoc-L-Gln(Trt)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-QTIndossare dispositivi di protezione individuale; non inalare
N,N,N′,N′-Tetramethyl-O-(1H-benzotriazol-1-yl)uronium hexafluorophosphateGyros Protein Technologies26432Provoca irritazione della pelle, degli occhi e delle vie respiratorie; non inalare; utilizzare sotto il cofano o in un'area ben ventilata
0,4 M N-metilmorfolina in DMFGyros Protein TechnologiesPS3-MM-Laltamente infiammabile; indossare dispositivi di protezione individuale; tenere lontano da fonti di calore e tenere il contenitore ben chiuso; non inalare o ingerire; lavare accuratamente la pelle dopo aver maneggiato
20% di piperidina in DMFGyros Protein TechnologiesPS3-PPR-LProvoca gravi ustioni agli occhi e alla pelle; Liquido e vapore infiammabili; Non inalare
diclorometanoFisher ScientificD37-4Può causare cancro; Non inalare; Indossare dispositivi di protezione individuale; utilizzare solo sotto il cofano; in caso di contatto salire con acqua per almeno 15 minuti e consultare un medico
acetonitrileFisher ScientificA998-4Infiammabile; irritante per gli occhi; Utilizzare dispositivi di protezione individuale; Utilizzare solo sotto una cappa aspirante; tenere lontano da fiamme libere o superfici calde; in caso di contatto sciacquare con acqua per almeno 15 minuti e consultare un medico
acido trifluoroaceticoFisher ScientificA116-50Provoca gravi ustioni; non inalare; dannoso per gli organismi acquatici; utilizzare dispositivi di protezione individuale; utilizzare solo sotto cappa aspirante; in caso di contatto sciacquare con acqua per almeno 15 minuti e rivolgersi immediatamente a un medico
% acetato di uranileMicroscopia elettronicaScienze 22400-4Non inalare; nocivo per la vita acquatica
acido 4-(2-idrossietil)piperazina-1-etansolfonicoAcros OrganicsAC172571000Non inalare; utilizzare all'aperto o in un'area ben ventilata
azoto GasTechAirContenuto sotto pressione, può esplodere se riscaldato
acido 3-bromo-2-(bromometil)propionicoAlfa AesarAAA1963014Non inalare; provoca irritazione alla pelle e agli occhi; corrosivo
idrossido di sodioFisher ScientificS318-100Utilizzare dispositivi di protezione individuale; utilizzare solo sotto la cappa aspirante; in caso di contatto sciacquare l'area per almeno 15 minuti e consultare un medico
tioacetato di potassioAcros OrganicsAC221300250Provoca irritazione alla pelle e agli occhi; non inalare; utilizzare dispositivi di protezione individuale
acido solforicoFisher ScientificSA213Provoca ustioni; tenere lontano dall'acqua; tenere lontano da materiale combustibile; non inalare; utilizzare dispositivi di protezione individuale; in caso di contatto, sciacquare l'area per almeno 15 minuti e consultare un medico
cloroformio-dAcros OrganicsAC320690075Possibile pericolo di cancro; irritante per la pelle e gli occhi; non inalare; Utilizzare dispositivi di protezione individuale; utilizzare solo sotto la cappa aspirante; In caso di contatto, sciacquare l'area per almeno 15 minuti e consultare un medico
cloroformioFisher ScientificC298-4Possibile pericolo di cancro; irritante per la pelle e gli occhi; non inalare; Utilizzare dispositivi di protezione individuale; utilizzare solo sotto la cappa aspirante; In caso di contatto, sciacquare l'area per almeno 15 minuti e consultare un medico
N,N-diisopropiletilaminaAcros Organics AC367841000Altamente infiammabile; dannoso per gli organismi acquatici; indossare dispositivi di protezione individuale; non ingerire
idrossido di ammonioFisher ScientificA669S-500Corrosivo; non inalare
metanoloFisher ScientificA452-4Liquidi e vapori infiammabili; utilizzare dispositivi di protezione individuale; non inalare; In caso di contatto, risciacquare l'area per almeno 15 minuti e consultare un medico
triisopropilsilanoSigma Aldrich233781infiammabile; utilizzare dispositivi di sicurezza protettivi personali; tenere il contenitore ben chiuso
etilicoFisher ScientificE138-1Estremamente infiammabile; Irritante per la pelle e gli occhi; Utilizzare dispositivi di protezione individuale
acido 2,5-diidrossibenzoicoSigma Aldrich39319-10x10MG-Fnon inalare; irritante per la pelle e gli occhi
acido alfa-ciano-4-idrossicinnamicoAlfa AesarAAJ67635EXK
c18 zip-tipMilliporeZTC18S096
tris(2-carbossietil) fosspina cloridratoThermo ScientificPI20490
gel di silice 60 F254 fogli TLC rivestiti con supporto in alluminioEMD Millipore1.05549.0001
Tubi NMR di precisione a parete sottileBel-Art6630005855mm O.D.
Siringhe Norm-Ject interamente in plastica AirTiteAL10
ago monousoBD PrecisionGlideBD 305185aghi usati vengono smaltiti in contenitori per rifiuti taglienti
siringhe fritte usa e gettaTorviqSF1000LL10 ml sono state utilizzate siringhe fritte, ma sono disponibili siringhe più grandi se necessario per la sintesi su larga scala.
griglia di carbonioTed Pella, Inc.CF200-CUAssicurarsi di preparare i campioni e la colorazione sul lato della griglia di carbonio, non sul lato di rame lucido delle
pinzette a chiusura automaticaMicroscopia elettronica Scienze78318-3Xpunte molto affilate, lunghezza: 120 mm
0,1 mm lunghezza percorso corto cellaStarna Cells, Inc.20/C-Q-0.1Tappi per
recipienti fragili da 10 mlCEM909210
Recipienti a pressione da 10 mlCEM908035
Colonna HPLC semi-prep AerisPhenomenex00F-4632-N0da 150 x 10 mm
Starna Cells, Inc.CH-2049Necessario quando si utilizzano celle a percorso corto
Sintetizzatore di peptidi PS3Gyros Protein Technologies
Reattore a microonde DiscoverSP CentrifugaCEM
HERMLEZ 206 Autilizzato un rotore fisso 6x50 mL
HPLCShimadzuUV
Detector spettrometro a risonanza magnetica nucleareAvance, Bruker
Spettrometro di massa MALDI-TOFAxima Confidence,
Tecnologia MillrockBT85A
Spettrometro a infrarossi a trasformata di FourierAlpha Tensore,
Tecnai Spirit, FEIUtilizzato con la fotocamera digitale CCD a fibre ottiche Gatan Orius. Accessibile presso lo
spettropolarimetro per dicroismo circolareJ-810Utilizzato con un regolatore di temperatura Peltier a sei celle. Accesso alla Wesleyan University.
il 4 etere gli della griglia Supporto per celle da 300 MHz liofilizzatore Shimadzu Microscopio elettronico a trasmissione Bruker del CSCU Center for Nanotechnology, JASCO

Riferimenti

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